農(nóng)藥分析-氣相色譜技術(shù)(編輯修改稿)
2025-01-19 03:11 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 在引入離子交換基團(tuán)后進(jìn)行硅烷化可以增加容量。樹(shù)脂交換量與硅膠表面積成正比，顆粒小的柱效高，分離時(shí)間短。樹(shù)脂耐壓，流動(dòng)相成分改變時(shí)體積不變。但是硅膠在 pH≥ ，故不能用于堿性強(qiáng)的溶液作流動(dòng)相。 ? 1975年 Small提出用電導(dǎo)檢測(cè)器的離子交換色譜法首次實(shí)現(xiàn)了有機(jī)和無(wú)機(jī)陰離子的快速分離檢測(cè)。用離子交換樹(shù)脂要有強(qiáng)的滲透性。 ?不用離子交換樹(shù)脂的用含己基硫酸鹽或辛基硫酸鹽的洗脫液動(dòng)態(tài)涂漬的柱子分離陽(yáng)離子；辛基或十六烷基季銨鹽用于分離陰離子。 ?經(jīng)典離子交換色譜在樹(shù)脂粒度、交換容量、分離柱內(nèi)徑與長(zhǎng)度及分離時(shí)間都大于現(xiàn)代離子家換色譜。現(xiàn)代檢測(cè)手段先進(jìn)及用泵輸送流動(dòng)相流速穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。 離子對(duì)色譜法 ? 離子對(duì)色譜分為正相與反相。 ? 正相是極性大的固定相，采用極性小的流動(dòng)相，極性小的組分先流出，極性大的組分慢流出。 ? 反相色譜采用疏水型非極性化學(xué)鍵合相，用極性大的流動(dòng)性。極性大的組分先流出，極性小的組分或流出。如十八烷基硅膠鍵合相或苯基硅膠鍵合相，流動(dòng)性用低濃度的離子對(duì)試劑水溶液或能溶于水的有機(jī)溶劑，如甲醇或乙醇等與水組成的混合溶劑。能夠有效的分離有機(jī)酸堿和兩性化合物，廣泛用于分離羧酸、磺酸、酚、胺、季銨鹽、氨基酸、多肽、核酸及其衍生物。 離子對(duì)試劑 ? 陽(yáng)離子型 伯銨鹽、仲銨鹽、叔銨鹽、季銨鹽 陰離子型 無(wú)機(jī)物 鹵離子、磷酸氫根離子、磷酸二氫根離子、高氯酸根離子 、硫酸根離子、硝酸根離子。 有機(jī)物 甲酸離子、乙酸離子、丙酸根離子、檸檬酸氫根離子、苯甲酸離子、水楊酸根離子、苦味酸離子、硫酸氫酯離子、磺酸根離子等 ? 水是反相離子對(duì)色譜法中流動(dòng)相的主要組成部分，固定相是非極性鍵合相，組分與離子對(duì)試劑結(jié)合后改變組分離子的親水性或疏水性，改變了保留值。利用碳鏈較長(zhǎng)的磺酸鹽可以增大保留值，利用磷酸二氫根可增大親水性。 ? 保留值隨離子對(duì)試劑濃度增大而增大碳鏈長(zhǎng)的離子對(duì)試劑由于表面活性劑作用，保留值增大有一個(gè)極限值。 ? 流動(dòng)相的 pH值影響弱電解質(zhì)的電離平衡， pH值上升，弱酸電離度增大，陰離子濃度增加，與離子對(duì)試劑作用增強(qiáng) 。分離兩性化合物時(shí)，用陰離子對(duì)實(shí)際必須使兩性離子帶正電，既流動(dòng)相的 pH值應(yīng)該小于它們的等電點(diǎn)；用陽(yáng)離子對(duì)試劑必須使兩性離子帶負(fù)電，即流動(dòng)相的 pH值應(yīng)大于它們的等電點(diǎn)。， 反相離子對(duì)色譜機(jī)理 ?各種機(jī)理 ? 與試劑結(jié)合后改變了疏水性，影響了在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)，從而改變了色譜行為。 ? 疏水型性離子對(duì)可逆吸附在非極性固定相表面后與祖墳發(fā)生動(dòng)態(tài)離子交換，即形成具有離子交換能力的表層。帶相反電荷組分的離子與離子對(duì)試劑的平衡離子發(fā)生交換。離子對(duì)碳鏈長(zhǎng)的組分，交換劑的覆蓋面大，保留值長(zhǎng)。 ? 離子相互作用 非極性固定相的表面先吸附流動(dòng)相中部分親脂性的帶正或負(fù)電荷的離子對(duì)形成第一正、或負(fù)電層。為了維持電中性外面吸附了相反電荷的其它離子，形成第二相反電荷層。 ? 固定相的表面吸附帶負(fù)或正電荷的組分離子使第一層增加負(fù)、或正電荷。為了維持電中性，就從流動(dòng)相中拉入帶相反電荷的離子，結(jié)果離子被成對(duì)的吸附在固定相表面上，但不是形成離子對(duì)。因?yàn)楦鞣N組分的離子與過(guò)渡性表面的疏水作用和雙電層的靜電引力不同因而表現(xiàn)不同的保留值。 凝膠色譜 ? 凝膠色譜法是一種化學(xué)惰性的高度多孔的非離子型凝膠小球作為固定相。 ? 特點(diǎn) ? 分離原理 分子篩原理，大分子先流出、小分子依次流出。 ? 凝膠色譜法適宜于分離非離子型的，分子量大于2023的高分子化合物 ? 天然高分子化合物，如蛋白質(zhì)、核酸可以很好的被分離 ? 一般式樣可以用娘叫滲透色譜法進(jìn)行試分離，一了界試樣的復(fù)雜程度和分子量的分布范圍 ? 色譜峰容量小，不能分離分子量近似或相同的物質(zhì) 凝膠色譜固定相 ?固定相的要求 ?在 pH值很寬的范圍內(nèi)是化學(xué)惰性。 ?本身中性，不含可離解基團(tuán)。 ?分離過(guò)程不發(fā)生離子交換。 ?溶漲度受交連度影響，交連度越低溶漲度越大，對(duì)大分子滲透性越強(qiáng)。 ?機(jī)械強(qiáng)度要好，否則使用過(guò)程變形，增大阻力，減少流速以至阻塞。 固定相種類(lèi) ?葡聚糖凝膠 ? Sephadex G 蔗糖經(jīng)微生物發(fā)酵后制成的有葡萄糖殘基構(gòu)成的分子量大的聚合物。經(jīng)提純后用鹽酸降解為分子量平均為 104～ 20 104葡聚糖。用乙醇分級(jí)沉淀，在堿性溶液中與環(huán)氧氯丙烷，生成由甘油交連的葡聚糖醚的不溶性三維強(qiáng)親水結(jié)構(gòu)。 ? G后面的數(shù)字表示沒(méi) 10kg干葡聚糖凝膠溶漲吸水量 ?如 Sephadex G— 200表示 1g干凝膠吸水20mL左右。 ? Sephadex G系列可以經(jīng)受高溫消毒，對(duì)水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和弱酸都穩(wěn)定。強(qiáng)酸型醚鍵水解。長(zhǎng)時(shí)間與氧化劑接觸骨架會(huì)破壞。 ? Sephadex G的分級(jí)方法是用微球直徑表示。適用于水、甲醇、 DMSO作流動(dòng)相。主要用于分離蛋白質(zhì)、核酸、酶和多糖。分離范圍從 1000以下到 8 105，固流比 ～ ，不能承受壓力 ? Sephadex LH— 20， LH表示親脂溶劑和親水溶劑均能溶漲?？梢苑蛛x不溶于水的的物質(zhì)。 聚丙烯酰胺凝膠 ?由丙烯酰胺與 N， N’ — 亞甲基雙丙烯酰胺共聚而成。后者為交連劑。交連劑的比例越大，產(chǎn)品的孔徑越小。商品名 Bio— Gel P。加水自然溶漲， P后的數(shù)字乘 1000表示肽與蛋白質(zhì)的排除極限。 ?性質(zhì)與 Sephadex G很相似，可以不被微生物腐蝕，耐酸堿性不如前者。 ?吸水量與 Sephadex G有近似值。 ?規(guī)格劃分較細(xì)。 甲基丙烯酸聚乙二醇凝膠 ?甲基丙烯酸單酯與雙甲
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