農藥分析-氣相色譜技術(編輯修改稿)
2025-01-19 03:11 本頁面
【文章內容簡介】 在引入離子交換基團后進行硅烷化可以增加容量。樹脂交換量與硅膠表面積成正比，顆粒小的柱效高，分離時間短。樹脂耐壓，流動相成分改變時體積不變。但是硅膠在 pH≥ ，故不能用于堿性強的溶液作流動相。 ? 1975年 Small提出用電導檢測器的離子交換色譜法首次實現了有機和無機陰離子的快速分離檢測。用離子交換樹脂要有強的滲透性。 ?不用離子交換樹脂的用含己基硫酸鹽或辛基硫酸鹽的洗脫液動態(tài)涂漬的柱子分離陽離子；辛基或十六烷基季銨鹽用于分離陰離子。 ?經典離子交換色譜在樹脂粒度、交換容量、分離柱內徑與長度及分離時間都大于現代離子家換色譜?，F代檢測手段先進及用泵輸送流動相流速穩(wěn)定等優(yōu)點。 離子對色譜法 ? 離子對色譜分為正相與反相。 ? 正相是極性大的固定相，采用極性小的流動相，極性小的組分先流出，極性大的組分慢流出。 ? 反相色譜采用疏水型非極性化學鍵合相，用極性大的流動性。極性大的組分先流出，極性小的組分或流出。如十八烷基硅膠鍵合相或苯基硅膠鍵合相，流動性用低濃度的離子對試劑水溶液或能溶于水的有機溶劑，如甲醇或乙醇等與水組成的混合溶劑。能夠有效的分離有機酸堿和兩性化合物，廣泛用于分離羧酸、磺酸、酚、胺、季銨鹽、氨基酸、多肽、核酸及其衍生物。 離子對試劑 ? 陽離子型 伯銨鹽、仲銨鹽、叔銨鹽、季銨鹽 陰離子型 無機物 鹵離子、磷酸氫根離子、磷酸二氫根離子、高氯酸根離子 、硫酸根離子、硝酸根離子。 有機物 甲酸離子、乙酸離子、丙酸根離子、檸檬酸氫根離子、苯甲酸離子、水楊酸根離子、苦味酸離子、硫酸氫酯離子、磺酸根離子等 ? 水是反相離子對色譜法中流動相的主要組成部分，固定相是非極性鍵合相，組分與離子對試劑結合后改變組分離子的親水性或疏水性，改變了保留值。利用碳鏈較長的磺酸鹽可以增大保留值，利用磷酸二氫根可增大親水性。 ? 保留值隨離子對試劑濃度增大而增大碳鏈長的離子對試劑由于表面活性劑作用，保留值增大有一個極限值。 ? 流動相的 pH值影響弱電解質的電離平衡， pH值上升，弱酸電離度增大，陰離子濃度增加，與離子對試劑作用增強 。分離兩性化合物時，用陰離子對實際必須使兩性離子帶正電，既流動相的 pH值應該小于它們的等電點；用陽離子對試劑必須使兩性離子帶負電，即流動相的 pH值應大于它們的等電點。， 反相離子對色譜機理 ?各種機理 ? 與試劑結合后改變了疏水性，影響了在固定相和流動相之間的分配系數，從而改變了色譜行為。 ? 疏水型性離子對可逆吸附在非極性固定相表面后與祖墳發(fā)生動態(tài)離子交換，即形成具有離子交換能力的表層。帶相反電荷組分的離子與離子對試劑的平衡離子發(fā)生交換。離子對碳鏈長的組分，交換劑的覆蓋面大，保留值長。 ? 離子相互作用 非極性固定相的表面先吸附流動相中部分親脂性的帶正或負電荷的離子對形成第一正、或負電層。為了維持電中性外面吸附了相反電荷的其它離子，形成第二相反電荷層。 ? 固定相的表面吸附帶負或正電荷的組分離子使第一層增加負、或正電荷。為了維持電中性，就從流動相中拉入帶相反電荷的離子，結果離子被成對的吸附在固定相表面上，但不是形成離子對。因為各種組分的離子與過渡性表面的疏水作用和雙電層的靜電引力不同因而表現不同的保留值。 凝膠色譜 ? 凝膠色譜法是一種化學惰性的高度多孔的非離子型凝膠小球作為固定相。 ? 特點 ? 分離原理 分子篩原理，大分子先流出、小分子依次流出。 ? 凝膠色譜法適宜于分離非離子型的，分子量大于2023的高分子化合物 ? 天然高分子化合物，如蛋白質、核酸可以很好的被分離 ? 一般式樣可以用娘叫滲透色譜法進行試分離，一了界試樣的復雜程度和分子量的分布范圍 ? 色譜峰容量小，不能分離分子量近似或相同的物質 凝膠色譜固定相 ?固定相的要求 ?在 pH值很寬的范圍內是化學惰性。 ?本身中性，不含可離解基團。 ?分離過程不發(fā)生離子交換。 ?溶漲度受交連度影響，交連度越低溶漲度越大，對大分子滲透性越強。 ?機械強度要好，否則使用過程變形，增大阻力，減少流速以至阻塞。 固定相種類 ?葡聚糖凝膠 ? Sephadex G 蔗糖經微生物發(fā)酵后制成的有葡萄糖殘基構成的分子量大的聚合物。經提純后用鹽酸降解為分子量平均為 104～ 20 104葡聚糖。用乙醇分級沉淀，在堿性溶液中與環(huán)氧氯丙烷，生成由甘油交連的葡聚糖醚的不溶性三維強親水結構。 ? G后面的數字表示沒 10kg干葡聚糖凝膠溶漲吸水量 ?如 Sephadex G— 200表示 1g干凝膠吸水20mL左右。 ? Sephadex G系列可以經受高溫消毒，對水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸都穩(wěn)定。強酸型醚鍵水解。長時間與氧化劑接觸骨架會破壞。 ? Sephadex G的分級方法是用微球直徑表示。適用于水、甲醇、 DMSO作流動相。主要用于分離蛋白質、核酸、酶和多糖。分離范圍從 1000以下到 8 105，固流比 ～ ，不能承受壓力 ? Sephadex LH— 20， LH表示親脂溶劑和親水溶劑均能溶漲?？梢苑蛛x不溶于水的的物質。 聚丙烯酰胺凝膠 ?由丙烯酰胺與 N， N’ — 亞甲基雙丙烯酰胺共聚而成。后者為交連劑。交連劑的比例越大，產品的孔徑越小。商品名 Bio— Gel P。加水自然溶漲， P后的數字乘 1000表示肽與蛋白質的排除極限。 ?性質與 Sephadex G很相似，可以不被微生物腐蝕，耐酸堿性不如前者。 ?吸水量與 Sephadex G有近似值。 ?規(guī)格劃分較細。 甲基丙烯酸聚乙二醇凝膠 ?甲基丙烯酸單酯與雙甲
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