農(nóng)藥分析-氣相色譜技術(shù)(參考版)
2025-01-03 03:11本頁面
【正文】 以峰面積定量 ， 按外標計算 。 ?用乙腈 — 水 (1： 1)溶液完全轉(zhuǎn)移至 5ml量瓶中 ，搖勻 ， 作為供試品溶液 。 凈化 ? 20℃ — 25℃ ， 取玻璃層析柱 (25cm l． 5cm)， (下端紉尖 ， 帶活塞 )， 自下而上依次裝填少量棉花 ， 1cm厚無水硫酸鈉 ， 含水 3． 0％ 中性氧化鋁 10． 0g， ，2cm厚無水硫酸鈉 ， 輕敲層析柱至填料緊密后 ， 用1． 0％ 丙酮二氯甲烷溶液浸濕后 ， 待液面下降至上層硫酸鈉以下時 ， 將上述濃縮液用少量 1． 0％ 丙酮二氯甲烷溶液完全轉(zhuǎn)移至層析柱上 ， 并用 1． 0％ 丙酮二氯甲烷溶液洗脫 ， 去掉前 10mL， 收集 50mL洗脫液 。 即刻用 2％ 氯化鈉溶液30mL分次將殘渣完全移至 60mL分液漏斗中用二氯甲烷萃取 5次 (20ml ， 15mL 4)， 每次至少振搖1min。 ? 加丙酮 ， 超聲波振蕩提取 3次 (40， 20， 20 ML)， 提取時間分別為 30， 10。 ?三七 、 白芍 、 西洋參藥材各 3批；當歸藥材 3批丙酮 (1000mL加 lg高錳酸鉀重蒸餾 )、 二氯甲烷 (重蒸餾 )， 無水硫酸鈉均為分析純；中性層析用氧化鋁 (100— 200目 ) ， (550℃ 活化 5h，冷卻后 ， 加水使含水量為 3． 0％ 減活 ， 加水后振搖至不結(jié)塊 。 DWF— 100型電動植物粉碎機； CSF— 1A型超聲波發(fā)生器； LD5— 2A型離心機； ZFQ— 922型旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)器；玻璃層析柱 (25cm 1． 5cm， 頭尖 )。將洗脫液于 45℃ 空氣流下吹干 ， 用 1． 0mL正己烷溶解殘渣后進行 GGECD測定 。 ? 將固相萃取小柱自上而下的按 Supelclean EN— VI—CarbSPE小柱 (3mL)、 Supelclean LC— ALUMN—INA N SPE小柱 (3mL)的順序串聯(lián)接好 ， 安裝在真空抽濾裝置上 ， 用 8mL丙酮 — 正己烷 (體積比為 1： 1)溶液淋洗小柱；然后在固相萃取小柱下放好收集管 ，將 2mL樣品提取液加到小柱上 ， 再用 4 2mL丙酮 —正己烷 (體積比為 1： 1)溶液洗滌試管并一起轉(zhuǎn)移至小柱中 。 實驗步驟 ?提取： 將葡萄樣品用組織搗碎機搗碎 ， 稱取均勻試樣 5g(精確到 g)于 30 mL離心管中 ，加入 5mL丙酮 ， 在混勻器上混勻 l min， 以2500r／ min的速率離心 3min， 將上清液倒人另一 50 mL離心瓶中 ， 殘渣用 2 5mL丙酮處理 ， 合并提取液 。 色譜分析條件 色譜柱： OV— 170l石英毛細管柱 ， 30 m ． 1． μ m(膜厚 )。 ? 準確稱取烯唑醇標準品 O． 100 0 g， 用少量丙 酮溶解后 ， 用正己烷定容至 l00mL， 配成 g/L 的烯唑醇標準儲備液 。 主要儀器和試劑 ? Shimadzu GC— 17A氣相色譜儀 ， 配備 ECD和 CR2A數(shù)據(jù)處理器 。 ? 極性強的對離子趨向于形成離子鍵，非極性強的對離子通過動態(tài)離子交換的趨勢大。 薄層色譜法 — ? 淋洗中組分的離子在流動相的作用下離開固定相表面，雙電荷平衡破壞。圓形紙色譜法比一般紙色譜法快分離效果好。在濾紙上再蓋一個同樣大小的培養(yǎng)皿。將圓形濾紙平放在培養(yǎng)皿上。 ?圓形濾紙展開法 用一圓形濾紙，圓心開一小孔，插如一棉芯或紙芯。 ?點樣前可以將濾紙挖成柵欄狀，可以避免展開過程中試樣橫向擴散。 ?當展開劑前沿上升一定高度，取出紙條，風干展開劑，用噴霧器噴上顯色劑后被分離組分就顯示出色斑。 ?操作 試樣用點樣管點在濾紙一端，紙條直立在密閉槽里，槽底部放有展開溶劑，帶有試樣的一端浸在展開劑中在毛細作用下展開劑向上展開帶動試樣中組分向上行。現(xiàn)代紙上色譜是 1941年提出，用于氨基酸分離。最常用瓊脂凝膠。 ?摸前還沒有完全滿足以上條件的載體。 ?用于提純蛋白質(zhì)、酶、酶抑制劑、抗體、抗原、基因、激素、核酸等。也可以加入特種配基將結(jié)合牢固的配基置換出來。親和十分牢固的大分子用強酸、強堿洗脫。 ?丙烯酰胺 /瓊脂糖凝膠 ?商品名 Ultrogel 是顆粒堅硬的微球，在水中溶漲，機械強度好。 ?另有大空聚苯乙烯凝膠是將凝膠骨架磺化到一定程度，商品名 Aquapak,可以用水作流動相，但是有離子交換作用，影響凝膠色譜特性，可用離子強度高的液體作流動相可以消除影響。大孔交連聚苯乙烯凝膠 Styragel和 Bio— Bead SM系列是大孔干凝膠和氣溶膠混合體，具有良好的色譜特性，化學穩(wěn)定性和機械強度，溶漲后體積變化很小。適宜于凝膠滲透色譜用。特點是孔徑均勻，孔徑不受流動相的化學性質(zhì)、pH值和離子強度影響不被微生物腐蝕、機械強度好、高壓高速使用以及可以用熱硝酸清洗， 500℃ 蒸汽消毒。微粒多孔硅膠是高效高速凝膠，多孔硅膠平均力度為 10～ 200nm，排除極限為 10～ 106。使用溫度高、使用壽命長。 其它凝膠 ?小孔球形硅膠滲鹽后高溫焙燒而成。 ? 不能脫水干燥，否則不能復原。 ? 商品名 Sepharose和 Bio — Gel A等，制成微球。內(nèi)部結(jié)構(gòu)是大網(wǎng)狀干凝膠和氣溶膠的混合物。商品名 Spheron,各種型號。 甲基丙烯酸聚乙二醇凝膠 ?甲基丙烯酸單酯與雙甲基乙二醇酯共聚物。 ?吸水量與 Sephadex G有近似值。加水自然溶漲， P后的數(shù)字乘 1000表示肽與蛋白質(zhì)的排除極限。交連劑的比例越大，產(chǎn)品的孔徑越小。 聚丙烯酰胺凝膠 ?由丙烯酰胺與 N， N’ — 亞
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