血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素測定[1](編輯修改稿)
2024-10-31 12:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 7。tā)標本對照管的吸光度。 6．膽紅素大于342μmol/L的標本可減少標本用量，或用0.154mmol/L NaCl溶液稀釋血清后重測。 7．結(jié)合膽紅素測定在臨床上應用很廣，但至今無候選參考方法，國內(nèi)也無推薦方法。方法不同，反響時間不同，結(jié)果相差很大。時間短、非結(jié)合膽紅素參與反響少，結(jié)合膽紅素反響也不完全；時間長，結(jié)合膽紅素反響較完全，但一局部非結(jié)合膽紅素也參與反響。這是一個很難權(quán)衡的問題。在沒有結(jié)合膽紅素標準液的情況下，問題更復雜。,Biobase,第十一頁，共二十四頁。,12,改進(gǎili225。ng)JG法測定血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素H,【評價】 1．靈敏度和線性范圍 本法摩爾吸光系數(shù)為74 380，標本中膽紅素17.1mol/L時吸光度約0.08(血清用量已達0.2m1)，正常血清總膽紅素多數(shù)小于17.1mol/L，手工法測定顯得靈敏度很不夠。在病理血清結(jié)合膽紅素增高在17.1μmol/L以下時，靈敏度同樣不夠。線性上限雖可做到1.7吸光度，但手工法在膽紅素超過171μmol/L時，吸光度已達0.8，應減量操作。分析儀檢測靈敏度高得多，最低吸光度可測至0.02，線性上限可達342μmol/L；但本法需3次加試劑，一般無法在全自動生化分析儀中使用。 2．精密度 正常濃度(n243。ngd249。)時精密度較差，特別是批間CV，據(jù)報道為14%～20%；而膽紅素342μmol/L時，精密度佳，批內(nèi)CV為0.95%，批間CV5%～10%。,Biobase,第十二頁，共二十四頁。,13,改進JG法測定血清(xu232。qīng)總膽紅素和結(jié)合膽紅素H,【評價】 3．重氮反響法測定膽紅素，也可用甲醇(ME法)或二甲亞砜等作加速劑，可做成單一試劑，反響pH和顯色pH都在酸性(suān x236。nɡ)，560nm波長比色，易于自動化。但靈敏度比改進JG法略低，ME法摩爾吸光系數(shù)為60 500，Hb干擾較明顯，Hb＞1g/L時，需用樣品空白校正。 4．本法靈敏度高，且可防止其它有色物質(zhì)的干擾，是測定血清總膽紅素的參考方法，但不能自動化分析是其缺點。現(xiàn)有些商品試劑盒稱咖啡因法或JG法，但不加堿性酒石酸，即不在堿性條件下顯色，其靈敏度和特異性不如上述方法。,Biobase,第十三頁，共二十四頁。,14,膽紅素氧化酶法測定總膽紅素和結(jié)合(ji233。h233。)膽紅素,【原理】 膽紅素呈黃色，在450nm附近有最大吸收峰。膽紅素氧化酶(BOD)催化膽紅素氧化，隨著膽紅素被氧化，A450nm下降，下降程度與膽紅素被氧化的量相關。在pH8.0條件下，未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，因而檢測450nm吸光度的下降值可反映總膽紅素含量；參加SDS及膽酸鈉等陰離子外表活性劑可促進其氧化。 在pH3.7～4.5緩沖液中，BOD催化單葡萄糖醛酸膽紅素(mBc)、雙葡萄糖醛酸膽紅素(dBc)及大局部δ膽紅素氧化，非結(jié)合膽紅素(Bu)在此pH條件下不被氧化。用配制(p232。izh236。)于人血清中的二?；撬崮懠t素(ditaurobilirubin，DTB)作標準品，檢測此條件下450nm吸光度的下降值可反映結(jié)合膽紅素的含量。,Biobase,第十四頁，共二十四頁。,15,膽紅素氧化酶法測定總膽紅素和結(jié)合(ji233。h233。)膽紅素,【試劑】 1．0.1mol/LTris
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