【文章內(nèi)容簡介】 溫度調(diào)節(jié)至常溫關(guān)閉總電源打開柱室，等柱溫接近室溫時，關(guān)閉載氣。最后清洗進樣器。２８高效液相色譜仿真實驗一、實驗概述：以液體做流動相的色譜稱為液相色譜。人們把已經(jīng)比較成熟的氣相色譜理論應(yīng)用于液相色譜，使液相色譜得到了迅速的發(fā)展。隨著其他科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了新型的高壓輸液泵、高效的固定相和柱填充技術(shù)、高靈敏度的檢測器，加上計算機的應(yīng)用，使得液相色譜實現(xiàn)了高效率和高速度。這種分離效率高、分析速度快的液相色譜稱為高效液相色譜（High performance liquid chromatography, HPLC）。二、實驗裝置：Agilent(安捷倫)1100系列液相色譜系統(tǒng)簡介：Agilent1100系列HPLC組件和系統(tǒng)，將Agilent長期的化學(xué)分析經(jīng)驗與領(lǐng)先的計算機技術(shù)結(jié)合，把網(wǎng)絡(luò)技術(shù)引入了實驗室。從1996年以來，在全球已經(jīng)安裝了超過130,000臺1100組件和55,000多套化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，成為目前單一型號市場占有率最高的液相色譜系統(tǒng)。本仿真軟件是模擬用Agilent化學(xué)工作站的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進行樣品分析和數(shù)據(jù)采集（色譜圖）的過程。注：本軟件只是模擬分析的過程和內(nèi)容，并不涉及其原理，所以實驗中的參數(shù)調(diào)節(jié)對結(jié)果并沒有影響，而真實實驗結(jié)果是隨參數(shù)的變化而變化的，這一點需要特別注意！實驗主界面：２９化學(xué)工作站界面：三、實驗操作： 第一步：選取實驗點擊主菜單上的“實驗選取”，會出現(xiàn)如下的對話框：用鼠標(biāo)左鍵點中你要做的實驗，此文件名會出現(xiàn)在對話框的“文件名”一欄的文本框 中，在此實驗文件上面雙擊左鍵或者點擊“打開”按鈕打開實驗文件。３０第二步：確認(rèn)操作條件點擊主菜單上的“操作條件”，會出現(xiàn)如下的操作條件列表：第三步：加入試劑點擊儀器上的自動進樣器部分（當(dāng)鼠標(biāo)移到儀器的各部分時會出現(xiàn)相應(yīng)的說明），出現(xiàn)如下畫面：在實驗調(diào)節(jié)過程中，請以此列表內(nèi)的條件為準(zhǔn)進行調(diào)節(jié)，否則不能正確輸出色譜峰。點擊下面的試劑小瓶，會自動放置到自動進樣器的托盤中。完成后，點擊主界面上的電腦啟動化學(xué)工作站。第四步：編輯方法擊主界面上的電腦啟動化學(xué)工作站開始編輯方法。所謂方法就是一個參數(shù)集，它包括分析一個樣品所需要的所有的參數(shù)：數(shù)據(jù)采集參數(shù)、數(shù)據(jù)分析參數(shù)和命令行或者宏指令。點擊菜單“方法→編輯方法”開始編輯方法（注意：此時不可以改變方法的參數(shù)，可改變的參數(shù)將在下面特別說明）：３１然后會出現(xiàn)下面的窗口讓你選擇編輯方法的內(nèi)容：用鼠標(biāo)點擊復(fù)選框選擇要編輯的方法的內(nèi)容，然后點擊“確定”按鈕開始方法編輯，點擊“取消”按鈕終止方法編輯。開始方法編輯后，系統(tǒng)會根據(jù)你選擇的內(nèi)容分別依次顯示每一部分的具體內(nèi)容，點擊“確定”按鈕進入下一部分，點擊“取消”按鈕終止方法編輯。完成方法編輯后，系統(tǒng)會回到主操作界面，此時色譜柱已經(jīng)開始升溫，在圖形界面中會有顯示，如下圖中紅色圓圈標(biāo)示區(qū)域所示：３２特別說明：對于本實驗要改變的參數(shù)，可以點擊化學(xué)工作站軟件界面中央的圖示的進樣器、溶劑系統(tǒng)、色譜柱、檢測器等部分，會彈出各部分參數(shù)窗口，此時可以按照實驗要求的參數(shù)進行調(diào)節(jié)（實驗參數(shù)可以點擊主界面上左邊菜單中的“實驗數(shù)據(jù)”按鈕察看）。進樣器：溶劑系統(tǒng)：３３色譜柱：檢測器：編輯方法完成后，在啟動系統(tǒng)之前，請返回液相色譜儀，打開二元泵系統(tǒng)，調(diào)節(jié)Purge閥，觀察使回路無汽泡。第五步：調(diào)節(jié)Purge閥點擊儀器上的二元泵系統(tǒng)部分（當(dāng)鼠標(biāo)移到儀器的各部分時會出現(xiàn)相應(yīng)的說明），出現(xiàn)如下畫面：３４圖中藍(lán)色方框部分就是Purge閥，此時是關(guān)閉的，用鼠標(biāo)點擊藍(lán)色方框部分，會出現(xiàn)Purge閥的放大畫面，然后點擊Purge閥會自動逆時針方向旋轉(zhuǎn)打開Purge閥。打開Purge閥后，右邊的試劑瓶的導(dǎo)管當(dāng)中會有氣泡流出，待沒有氣泡再流出之后，再次點擊Purge閥會自動逆時針方向旋轉(zhuǎn)關(guān)閉Purge閥。然后進行下一步“啟動系統(tǒng)”。第六步：啟動系統(tǒng)完成方法編輯后，點擊菜單“設(shè)備→系統(tǒng)開”或者圖中紅色圓圈指示的按鈕“開啟系統(tǒng)”:３５啟動系統(tǒng)后，在圖形界面中會有顯示，如下圖中紅色圓圈標(biāo)示區(qū)域所示：同時在色譜峰顯示區(qū)域開始走基線，開始的時候系統(tǒng)不穩(wěn)定，基線變化很厲害，等到基線走平穩(wěn)表示系統(tǒng)穩(wěn)定后，可以開始進樣運行方法。第七步：進樣、運行方法等到狀態(tài)指示欄顯示“Ready”后，表明系統(tǒng)已經(jīng)準(zhǔn)備完畢。點擊菜單“運行控制→運行方法”開始進樣和分析，或者點擊圖中紅色圓圈所指示的“Start”按鈕或者按“F5”鍵：３６開始進樣后，在圖形界面中會有顯示，如下圖中紅色圓圈標(biāo)示區(qū)域所示：３７待色譜圖出完后，樣品分析完畢。第八步：完成實驗報告樣品分析完成后，點擊化學(xué)工作站界面上的紅色方框部分，或者點擊主界面左邊菜單中的“實驗數(shù)據(jù)”調(diào)出實驗報告：３８根據(jù)得出的保留時間、峰高、半峰寬等實驗數(shù)據(jù)，可以計算分離度等相關(guān)參數(shù)。如果計算機安裝了打印機，可以點擊右上角“打印報表”按鈕打印實驗報告。３９第四篇：《儀器分析實驗》指導(dǎo)書編寫劉開敏化學(xué)工程與技術(shù)系2008年3月《儀器分析實驗》指導(dǎo)書目錄鄰菲羅啉分光光度法測定鐵??????????????????????1 電位法測定水溶液的pH值??????????????????????4 醋酸的電位滴定和酸常數(shù)測定?????????????????????6 水中氟化物的測定－離子選擇電極法??????????????????8 氣相色譜定量分析?????????????????????????10 紫外分光光度法測定苯甲酸含量???????????????????11 熒光法測定維生素B2????????????????????????13 水質(zhì) 鉀和鈉的測定 火焰原子吸收分光光度法?????????????15 原子吸收分光光度法測定自來水中鎂的含量??????????????19 苯、萘、聯(lián)苯的高效液相色譜分析及柱效能的測定???????????21鄰菲羅啉分光光度法測定鐵一、實驗內(nèi)容：。二、準(zhǔn)備工作 722S型分光光度計20臺（二人一臺）。通知儀器室準(zhǔn)備20套儀器：(1)50ml容量瓶7只。(2）1ml刻度吸管1支。(3）吸球1只。(4）洗瓶1只。(5）400ml燒杯（廢液杯）1只。：(l）1ml刻度吸管（發(fā)樣品用）1支。(2）100ml小燒杯（發(fā)標(biāo)準(zhǔn)Fe3+）20只。(3）自動加液器二套（6只），盛放HAc－NaAc緩沖溶液，1％％鄰菲羅啉。：（1）100μg／mlFe3+標(biāo)準(zhǔn)溶液：(SO4)212H2O于100ml燒杯中，加入1：1HCl20ml及少量水，溶解后，轉(zhuǎn)移到1L容量瓶中，用水稀釋到刻度、搖勻。（2）％鄰菲羅啉水溶液：～3滴濃HCl的蒸餾水100ml中，貯于棕色瓶內(nèi)。（3）HAc－NaAc緩沖溶液：3H2O溶于水中，稀釋至1000ml。（4）1％鹽酸羥胺水溶液：取1g鹽酸羥胺溶于水中，稀釋至100ml。不另配制，直接將標(biāo)準(zhǔn)Fe3+液發(fā)于同學(xué)交上來的容量瓶中，～，。未知樣品體積以1ml計。三、提問內(nèi)容：，那些試劑加入量要比較準(zhǔn)確，哪些試劑則可不必？為什么？，吸光度的最佳讀數(shù)范圍為多少？如何控制？比色皿壁被有機試劑染上顏色，用水不易洗去，可試用HCl－C2H5OH（1：2）洗滌液浸泡，然后水洗，應(yīng)避免使用毛刷或鉻酸洗滌液。（3）比色皿的盛液量：比色皿內(nèi)所裝溶液量不宜太少，致使光線無法照射到溶液上，也不宜太多，以使溶液灑出流入光度計內(nèi)，一般以裝至比色皿高度的2/3～4/5為宜。，對分析結(jié)果將有何影響？如鹽酸羥胺配制過久，則因其還原能力減弱，而無法將試樣中的Fe3+完全還原成Fe3+，并與鄰菲羅啉定量形成橙紅色絡(luò)合物，這樣將使測定結(jié)果偏低。： 100μg／ml標(biāo)準(zhǔn)Fe3+溶液，注入50ml容量瓶中，加入5ml 1％鹽酸羥胺溶液，5mlHAc—NaAc緩沖液及3ml ％鄰菲羅啉溶液，以水稀釋至刻度、搖勻。在722S型分光光度計上，用1cm比色皿，采用試劑空白，在440～560nm間，每隔10nm測定一次吸光度，然后繪制A—λ吸收曲線，以選擇最適當(dāng)?shù)臏y定波長。：在5只容量瓶中，分別加入100μg／ml標(biāo)準(zhǔn)Fe3+，，（可利用上述那個，不必再配）。再各加入5ml 1％鹽酸羥胺溶液，5ml HAcNaAc緩沖溶液和3ml ％鄰菲羅啉溶液（次序不能顛倒），以水稀釋至刻度搖勻，在所選擇的波長下，用1cm比色皿，采用試劑空白，測定各溶液的吸光度，作出A－C工作曲線。：用洗凈的50ml容量瓶一只向教師領(lǐng)取1ml未知試樣（貼上標(biāo)簽，寫上學(xué)號），按與標(biāo)準(zhǔn)溶液完全相同的步驟配成有色溶液，并搖勻，然后在與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線完全相同的測試條件下測出其吸光度。由該吸光度值即可從工作曲線上查得相應(yīng)的鐵含量。五、計算公式未知試樣含鐵量（．）＝六、評分標(biāo)準(zhǔn)≤5‰≤10‰≤15‰＞15‰5分4分3分2分（1）選用儀器“pH”檔，將清洗干凈的電極浸入欲測標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖溶液中，按下測量按鈕，轉(zhuǎn)動定位調(diào)節(jié)旋鈕，使儀器顯示的pH值穩(wěn)定在該標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液pH值；（2）松開測量按鈕，取出電極，用蒸餾水沖洗幾次，小心用濾紙吸去電極上水液；（3）將電極置于欲測試液中，按下測量按鈕，讀取穩(wěn)定值pH，記錄。松開測量按鈕，取出電極，按（2）清洗，繼續(xù)下個樣品溶液測量。測量完畢，清洗電極，并將玻璃電極浸泡在蒸餾水中。2．雙標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖溶液法測量溶液pH值為了獲得高精度的pH值，通常用兩個標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖溶液進行定位校正儀器，并且要求未知溶液的pH值盡可能落在這兩個標(biāo)準(zhǔn)pH溶液的pH值中間。（1）按單位標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖溶液方法步驟（1）﹑（2），選擇兩個標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液，用其中一個對儀器定位；（2）將電極置于另一個標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，調(diào)節(jié)斜率旋鈕（如果沒設(shè)斜率旋鈕，可使用溫度補償旋鈕調(diào)節(jié)），使儀器顯示的pH讀數(shù)至該標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液的pH值；(3)松開測量按鈕，取出電極，用蒸餾水沖洗幾次，小心用濾紙吸去電極上水液；再放入第一次測量的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，按下測量按鈕，表明儀器和玻璃電極的響應(yīng)特性均良好。往往要反復(fù)測量﹑反復(fù)調(diào)節(jié)幾次，才能使測量系統(tǒng)達(dá)到最佳狀態(tài)；(4)當(dāng)測量系統(tǒng)調(diào)定后，將洗干凈的電極置于欲測試樣溶液中，按下測量按鈕，讀取穩(wěn)定pH值，記錄。松開測量按鈕，取出電極，沖洗凈后，將玻璃電極浸泡在蒸餾水中。五﹑問題討論1． 在測量溶液的pH值時，為什么pH計要用標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖溶液進行定位？ 2． 使用玻璃電極測量溶液pH值時，應(yīng)匹配何種類型的電位計？3．為什么用單標(biāo)準(zhǔn)pH緩沖溶液法測量溶液pH值時，應(yīng)盡量選用pH與它相近的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液來校正酸度計？、 mL氟化物標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別置于5只50 mL容量瓶中，加入10mL總離子強度調(diào)節(jié)緩沖溶液，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。分別移入100 mL聚乙烯杯中，放入一只塑料攪拌子，按濃度由低到高的順序，依次插入電極，連續(xù)攪拌溶液，讀取攪拌狀態(tài)下的穩(wěn)態(tài)電位值(E)。在每次測量之前，都要用水將電極沖洗凈，并用濾紙吸去水分。在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制ElgcF標(biāo)準(zhǔn)曲線，濃度標(biāo)于對數(shù)分格上，最低濃度標(biāo)于橫坐標(biāo)的起點線上。4．水樣測定用無分度吸液管吸取適量水樣，置于50 mL容量瓶中，用乙酸鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)至近中性，加入10mL總離子強度調(diào)節(jié)緩沖溶液，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻。將其移入100 mL聚乙烯杯中，放入一只塑料攪拌子，插入電極，連續(xù)攪拌溶液，待電位穩(wěn)定后，在繼續(xù)攪拌下讀取電位值(Ex)。在每次測量之前，都要用水充分洗滌電極，并用濾紙吸去水分。根據(jù)測得的毫伏數(shù)，由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試液氟化物的濃度，再根據(jù)水樣的稀釋倍數(shù)計算其氟化物含量。5．空白試驗用去離子水代替水樣，按測定樣品的條件和步驟測量電位值，檢驗去離子水和試劑的純度，如果測得值不能忽略，應(yīng)從水樣測定結(jié)果中減去該值。當(dāng)水樣組成復(fù)雜時，宜采用一次標(biāo)準(zhǔn)加入法，以減小基體的影響。其操作是：先按步驟4測定出試液的電位值(E1)，然后向試液中加入與試液中氟含量相近的氟化物標(biāo)準(zhǔn)溶液(體積為試液的1/10～1/100)，在不斷攪拌下讀取穩(wěn)態(tài)電位值(E2)，按下式計算水樣中氟化物的含量：式中：Cx—水樣中氟化物(F)濃度(mg/L)；Vx—水樣體積(mL)；cs—F標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mg/L)；Vs—加入F標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(mg/L)；△E—等于E1氣相色譜定量分析一、實驗?zāi)康挠帽阶鳂?biāo)準(zhǔn)物，測定己烷、環(huán)己烷、甲苯的定量校正因子，根據(jù)色譜圖，用歸一法測定混合物中各組分的含量；用外標(biāo)法測定混合物中甲苯的含量。學(xué)習(xí)定量校正因子的測定和氣相色譜常用的定量方法。二、儀器與試劑氣相色譜儀、熱導(dǎo)池檢測器、10微升注射器3支、色譜柱：不銹鋼色譜柱（長2米，內(nèi)徑4毫米）15%聚乙二醇—1000：6201擔(dān)體（60—80目）、苯、甲苯、己烷、環(huán)己烷（都為分析純）、混合物樣品三、實驗步驟：柱溫80186。C；載氣，氮氣或氫氣15—20毫升/分鐘（柱后），檢測器溫度100℃，汽化室溫度120—150℃，橋電流130毫安。在分析天平上，于5毫升中，按重量比大約2 :1的比例，稱取己烷和苯配制二元混合物。待色譜儀基線穩(wěn)定后，進樣分析二元混合物，重復(fù)3—5次。量取己烷和苯的峰面積，按公式求出己烷對苯的相對重量校正因子。以此為例，測定并求出環(huán)己烷對甲苯的相對重量校正因子。（1）歸一化法如果被測樣品中只含有己烷、環(huán)己烷和甲苯，并且三者相對重量校正因子均已求出，即可進被測樣品進行色譜分析，按歸一化法求出各組分的含量。（2）外標(biāo)法如果被測試樣中含有微量苯，預(yù)測定其含量，則可以甲苯為溶劑，配制已知濃度的苯標(biāo)準(zhǔn)溶液，用外標(biāo)法測定試樣中苯的含量，具體方法如下：準(zhǔn)確量取10毫升苯于100毫升容量瓶中，用甲苯稀至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備