大豆蛋白的提取與含量測(cè)定(編輯修改稿)
2024-10-04 00:15 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 物理化學(xué)性質(zhì) ， 如比重 、 紫外吸收 ，折射率等測(cè)定而得知；或用化學(xué)方法 ， 如定氮 、 雙縮脲反響 ，F(xiàn)olin酚試劑反響等方法來計(jì)算 。 其中雙縮脲法和 Folin酚法是一般實(shí)驗(yàn)室中常用的方法 ， 它們操作簡(jiǎn)便 ， 迅速 ， 不需要復(fù)雜而昂貴的儀器 。 Folin酚法靈敏度高 ， 比雙縮脲法靈敏 100倍 。 Folin酚法所用試劑是由兩局部組成 ， 試劑甲相當(dāng)于雙縮脲試劑 ， 可與蛋白質(zhì)中的肽鏈起顯色反響 。 試劑乙中的磷鉬酸和磷鎢酸在堿性條件下不穩(wěn)定 ， 易被酚類復(fù)原而呈蘭色 〔 鉬蘭和鎢蘭混合物 〕 。 第九頁(yè)，共十八頁(yè)。 由于蛋白質(zhì)中含有帶酚基的酷氨酸復(fù)原呈蘭色 ， 溶液蘭色的深淺與蛋白濃度有較好的線性關(guān)系 。 因此用 Folin酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 ， 靈敏度較高 。 樣品中含酚類化合物及檸檬酸均有干擾作用 ， 如果樣品酸度較高那么顯色較淺 ， 要提高碳酸鈉一氫氧化鈉的濃度 。 此法也可測(cè)定溶液中酪氨酸的色氨酸的濃度 。 Folin酚法有不少具有操作方法 ， 但根本原理都是一個(gè) ，只是在各溶液的濃度及填加量上 ， 保溫的溫度及保溫時(shí)間上有所不同而已 ， 本實(shí)驗(yàn)所介紹的是本室常用的 ， 靈敏度較高的操作方法 。 第十頁(yè)，共十八頁(yè)。 試劑和器材 材料： 本實(shí)驗(yàn)所提取大豆蛋白水提取液 ， 經(jīng)適宜稀釋至可測(cè)定范圍 。 試劑： 〔 1〕 。 〔 2〕 200μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)酪 〔 牛血清 〕 蛋白溶液 。 〔 3〕 Folin試劑甲： 〔 俗稱堿性銅試劑 〕 ： 10g NaoH溶于 400ml水中 ， 再加 50gNa2CO3； 稱取 0 . 5 g酒石酸鉀鈉溶于 80m l H 2 O中 ， 再加；以上兩溶液混合定容到 500ml， 冰箱保存可用一個(gè)月 。 第十一頁(yè)，共十八頁(yè)。 F o l i n試劑乙：在 2升磨口回流裝置的燒瓶?jī)?nèi) ， 加鎢酸鈉〔 NaWO42H2O〕 100g， 鉬酸鈉 〔 NaMoO2M2O〕 25g， 蒸餾水700ml， 85%的磷酸 50ml， 濃鹽酸 100ml， 充分混合后 ， 小火回流10小時(shí) ， 再加硫酸鋰 〔 Li2SO4〕 150g， 蒸餾水 50ml及數(shù)滴溴 。 然后開口沸騰 15min
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