7醫(yī)療研究項(xiàng)目中期評(píng)價(jià)報(bào)告(編輯修改稿)
2024-09-26 02:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 攪動(dòng)的等量沸水中，保持溫度84℃，迅速加入液氮或碎冰，降溫至25℃以下，啤酒酵母的細(xì)胞壁不能經(jīng)受劇烈的迅速熱脹冷縮而破碎，使細(xì)胞內(nèi)的核酸游離出來。當(dāng)溫度降至25℃以下，在高倍顯微鏡下觀察，90%以上的酵母細(xì)胞已破壞完全，能適用下一步核酸的提取分離。稀堿法：啤酒酵母的細(xì)胞壁主要由多糖組成，加入naoh溶液溶解多糖以破壞細(xì)胞壁，增加通透性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)溶出。具體操作步驟是取啤酒酵母泥適量，加入8倍體積的1%naoh溶液，于20℃，然后用6mol/l的hcl中和，核酸溶于水中。此方法中要注意堿的濃度和用量，8倍體積1%的氫氧化鈉已足以使細(xì)胞壁大部分溶解，方便下一步的核酸提取，無需過濃和過量的堿，否則不僅為后面的中和、提取帶來大的工作量，而且反應(yīng)過強(qiáng)，會(huì)引起核蛋白嚴(yán)重水解變 性，影響提取效
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