【文章內(nèi)容簡介】 基本要求 毒理研究 急毒 指動物單次給藥后引起 50％ 動物死亡的劑量 。 LD50值的意義是： LD50越小表示藥物的急性毒性越大 。 動物：小鼠 、 大鼠等 動物與分組：一般 5組；每組 10只 雌 、 雄各半 。 試驗前禁食 給藥途徑：臨床給藥途徑 觀察 14天 ， 進(jìn)行大體解剖觀察 ， 如有改變 病理檢查 申報資料的基本要求 毒理研究 急毒 LD50試驗 指動物單次大劑量給藥或在 24小時內(nèi)接受多次大劑量受試藥物后 ， 動物在短期內(nèi)出現(xiàn)的與藥物相關(guān)的毒性反應(yīng) ， 但是又不引起動物死亡的最大劑量 動物：小鼠 、 大鼠 、 犬等 動物數(shù)：小動物 20只；大動物 4只 雌 、 雄各半 。 試驗前動物應(yīng)注意禁食 給藥途徑：臨床給藥途徑 觀察 14天 ， 進(jìn)行大體解剖觀察 ， 如有改變 病理檢查 申報資料的基本要求 毒理研究 急毒 最大耐受量試驗 該試驗多用于中藥和毒性較小的其它藥物研究 指藥物以最高濃度和最大容積的給藥 ， 劑量可能并未達(dá)到最大耐受的劑量 ， 所以該劑量被稱為最大給藥量 。 具體要求可參照最大耐受量試驗 。 低毒藥物 ， 口服給藥： 5g（ 或 ml） /kg 動物數(shù)一般 ≥ 5只 ， 大鼠禁食一夜 ， 小鼠禁食 4－ 6小時 ，觀察 14天 ， 如無死亡 ， 則無必要進(jìn)行更高劑量 如動物在 5g/kg出現(xiàn)死亡 ， 可選擇較低劑量 申報資料的基本要求 毒理研究 急毒 最大給藥量試驗 限量試驗 長期 （ 重復(fù)給藥 ） 毒性 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 ? 觀察動物在給予超過臨床劑量（數(shù)倍或數(shù)十倍）和用藥周期（ 34倍以上）的情況下所出現(xiàn)的毒性反應(yīng) ? 設(shè)法發(fā)現(xiàn)引起毒性反應(yīng)的劑量、劑量與毒性之間的關(guān)系、中毒表現(xiàn)和程度、主要毒性靶器官或組織及可逆程度等 ? 預(yù)測臨床研究階段可能的安全范圍和毒性，預(yù)先制定防治措施或避免某些有特殊疾病患者的使用，減少臨床可能的風(fēng)險 ? 為臨床試驗初始劑量和指標(biāo)的選擇等提供重要參數(shù) 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 長期毒性研究目的 ? 通常長毒始于主要藥效、安全藥理、單次給藥毒性、初步藥代動力學(xué)（如果已經(jīng)可獲得）等試驗之后 ? 了解臨床適應(yīng)證和用藥特點對合理設(shè)置給藥方案也是不可缺少的 ? 治療還是輔助治療藥物 ? 根據(jù)藥物特點，考慮動物的選擇 ? 有些藥物側(cè)重比較毒理學(xué)的研究，如新的劑型、改變酸根或堿基、改變給藥途徑等。 二、 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 試驗方案設(shè)計 基本原則 l 動物的種類 常用大鼠和犬或敏感動物。創(chuàng)新藥一般 2種以上，雌雄各半。生物制品多用大鼠和猴（種屬特異性可特殊） l 動物的年齡與數(shù)量 大鼠試驗 3月內(nèi)： 68周齡； 3月： 56周齡 犬：一般選用性成熟的 ， 610月 ；猴： 根據(jù)試驗周期長短確定每組動物數(shù) 。 原則： 試驗結(jié)束時小動物每組動物數(shù)應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求； 大動物的數(shù)應(yīng)滿足毒理學(xué)評價要求； 一般大鼠為 1030只 ， 雌雄各半；犬 、 猴至少雌 、 雄各3只；毒性大 、 周期長數(shù)量應(yīng)增加 ， 考慮恢復(fù)期數(shù)量 。 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 試驗方案設(shè)計 試驗動物 ? 給藥時間與頻率 臨床給藥周期的 34倍。反復(fù)、長期或植入的藥， 按最長給藥時間，即嚙齒 — 6月；非嚙齒 — 9月 連續(xù)給藥、周期短 每天給藥； 1個月 6天 /周 每天給藥時間應(yīng)一致 保證動物攝入量的準(zhǔn)確性 中藥如給藥體積大 ， 可將藥物分成 2次 /日 不提倡采用摻食給藥 ， 除非有穩(wěn)定性 、 均一性 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 試驗方案設(shè)計 給藥方案 ? 給藥途經(jīng) 擬訂的臨床給藥途徑 替代途徑 ? 給藥劑量與容積 給藥劑量應(yīng)根據(jù)不同毒性的試驗要求 根據(jù)動物體重增長調(diào)整 給藥容積不宜過大 ， 大鼠 ip 1ml/100g； iv 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 試驗方案設(shè)計 給藥方案 ? 給藥劑量 一般 3個給藥劑量組 毒性較大 ， 安全范圍較窄：考慮 3組 原則： 高劑量 動物應(yīng)出現(xiàn)毒性和個別死亡（ 20%） 低劑量 等于或略高于有效劑量 ， 無毒性 中劑量 介于以上兩者之間 ， 輕微毒性 二、 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 試驗方案設(shè)計 給藥方案 ? 對照組的設(shè)置 通常給藥組和對照組的動物數(shù)應(yīng)基本相等 對照組可根據(jù)試驗方案的具體要求和研究目的設(shè)立 陰性對照組 、 溶媒對照組 、 假手術(shù)對照組 ? 觀察指標(biāo) 全面 、 針對特點 一般體征 、 飲食 、 體重變化；血尿常規(guī) 、 血液及血液生化指標(biāo) 、 心電圖 ， 臟器 /體重系數(shù) 、 重要組織器官的肉眼和病理組織學(xué)觀察 、 死亡情況 。 應(yīng)記錄毒性癥狀出現(xiàn) 、 減輕或消失的時間 。 體重和進(jìn)食量每周測 12次 。 周期 3月的 ， 1/3動物檢查中期主要指標(biāo)； 如發(fā)現(xiàn)異常可適當(dāng)增加檢查次數(shù) 。 申報資料的基本要求 毒理研究 長毒 試驗方案設(shè)計 給藥方案 毒物代謝動力學(xué) （ TK） 試驗考慮要點 ? 藥物代謝動力學(xué)研究在毒理學(xué)研究中的延伸 。 ? 評價藥物的全身暴露 （ Exposure） 狀態(tài) ? 結(jié)合于長期毒性試驗 ， 測定 AUC、 Cmax 和 Ct 通過了解藥物暴露時與毒性劑量和時間的關(guān)系： ? 評價毒理學(xué)的發(fā)現(xiàn)和這些發(fā)現(xiàn)與臨床安全的相關(guān)性； ? 結(jié)合毒性發(fā)現(xiàn) ， 為進(jìn)一步的臨床前毒性試驗設(shè)計提供信息； ? 評價動物的耐受量 ， 有助于解釋不同動物種類 、 劑量和性別之間毒性的差異 。 申報資料的基本要求 毒理研究 毒代 試驗方案設(shè)計 給藥方案 申報資料的基本要求 毒理研究 致突變 致突變（遺傳毒性） 致突變 （ 遺傳毒性 ） ? 目前建立的遺傳毒性試驗是研究機(jī)體遺傳物質(zhì)受外源性化學(xué)物質(zhì)或其它環(huán)境因素作用時對有機(jī)體產(chǎn)生的遺傳毒性作用 。 ? 該研究方法不適用于生物制品 。 這些物質(zhì)不會直接與 DNA或其它染色體發(fā)生相互作用 。 ? 遺傳毒性試驗包括體外和體內(nèi)檢測系統(tǒng) 。 兩者應(yīng)結(jié)合進(jìn)行研究 。 ? 體外檢測系統(tǒng)包括細(xì)菌回復(fù)突變 、 微核試驗 、哺乳動物細(xì)胞染色體畸變等；體內(nèi)試驗包括骨髓微核試驗 、 顯性致死試驗等 。 申報資料的基本要求 毒理 致突變 申報資料的基本要求 毒理研究 生殖毒性 生殖毒性試驗 生殖毒性試驗 ? 評價藥物對哺乳動物生殖的影響 ， 推測對人可能的生殖毒性 ? 研究分為三段 I段 （ 一般生殖毒性 ） ： 是評價對成年動物生育力和早期胚胎發(fā)育影響 ， 評價藥物對配子成熟 ， 交配行為 、 受孕 、 胚胎著床前和著床的影響 II段 （ 致畸敏感期毒性 ） ： 即妊娠動物在胚胎器官形成期給藥 ， 評價藥物對親體 、 胚胎 、 胎仔發(fā)育影響 III段 （ 圍產(chǎn)期毒性 ） ： 在妊