【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 杜仲葉能清除肝、心、血清中的超氧陰離子，對(duì)自由基的清除率達(dá) %以上，對(duì)降低肝組織過(guò)氧化脂質(zhì)的作用達(dá) 64%。 (7) 其他功效 ? 日本近年來(lái)研究表明，使用以杜仲葉為原料提取的化妝品后，可使肌膚美白、消除老人斑，還能夠增加頭發(fā)的黑色素細(xì)胞，提高頭發(fā)黑色素細(xì)胞的活性。飲用杜仲茶還可消除肥胖、防止牙齒松動(dòng)、預(yù)防牙周病及老年癡呆癥，治療畏寒癥等。 杜仲葉飼 料添加劑 由于杜仲具有防治高血壓、提神抗勞、增強(qiáng)免疫功能、抗肌肉骨骼老化、清除體內(nèi)“垃圾”、防癌抗癌等藥理保健作用，杜仲被廣泛應(yīng)用于保健品、化妝品等的開(kāi)發(fā)項(xiàng)目中。近些年來(lái)，杜仲葉作為飼料添加劑的研究頗為熱門。 隨著人們生活水平的提高，保健與回歸自然的意識(shí)不斷增強(qiáng)，人們渴望無(wú)污染、無(wú)殘留的綠色畜禽產(chǎn)品，從而促使畜禽飼料添加劑由化工型逐漸轉(zhuǎn)為中草藥型 [2]。 20 世紀(jì) 90 年代以來(lái)，隨著人們對(duì)抗生素和某些化學(xué)合成藥危害性認(rèn)識(shí)的加深，以及對(duì)食品安全性要求的提高，人們?cè)絹?lái)越重視植物源藥和植物源飼料添加劑的研究與應(yīng)用 ?，F(xiàn)在世界各國(guó)均加大科研力度，正在積極尋找來(lái)源廣泛、使用方便、成本低廉、應(yīng)用范圍廣、效果顯著、殘留量低、不易產(chǎn)耐藥性、配伍性強(qiáng)等特點(diǎn)的新型添加劑代替抗生素類添加劑 [15]。而對(duì)杜仲作為動(dòng)物飼料添加劑的研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)也隨之加強(qiáng)。 杜仲葉飼料添加劑的功能及特點(diǎn) 杜仲葉經(jīng)過(guò)處理后，可作為飼料添加劑添加到雞、兔、牛、羊及魚(yú)類的飼，從而提高其產(chǎn)量和品質(zhì)。如將 1%的杜仲粉添加到雞飼料中，可使母雞產(chǎn)蛋率提高 28%以上，產(chǎn)蛋量提高 %，雞蛋中膽固醇含量降低 20%以上；將杜仲粉添加到魚(yú)飼料中，可使魚(yú)肉中的 膠原蛋白增加 倍；將杜仲粉添加到螃蟹飼料中，可減少螃蟹病害的發(fā)生，并且其味道鮮美，口感近天然野生；添加到兔、牛、羊飼料中，可使動(dòng)物脂肪含量減少，瘦肉增加 [6]。日本有學(xué)者以杜仲葉作為蛋雞飼料添加劑，生產(chǎn)低膽固醇和高密度脂蛋白的雞蛋；王紀(jì)亭等報(bào)道了杜仲葉作為飼料添加劑在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用；杜仲葉提取物制劑對(duì)動(dòng)物的鎮(zhèn)痛作用及免疫功能影響的研究均有報(bào)道。呂錦芳等報(bào)道了杜仲葉對(duì)肉雜雞生產(chǎn)性能及部分肉品質(zhì)的影響 [7]。因此，杜仲葉飼料添加劑具有以下產(chǎn)品特點(diǎn) [8]： 天然植物提取物，不含任何化學(xué)合成類物質(zhì)；有效成分 明確，功能確定，活性成分能夠量化控制；提高動(dòng)物增重和飼料轉(zhuǎn)化效率；有效改善動(dòng)物產(chǎn)品的肉質(zhì)風(fēng)味，提高產(chǎn)品質(zhì)量；提高動(dòng)物免疫力；符合安全、衛(wèi)生、環(huán)保的條件要求，有 利人類健康；動(dòng)物死亡率減少 5%以上。同時(shí)，有效減少抗生素用量，無(wú)耐藥性和殘留，安全、無(wú)毒、純天然。 杜仲葉飼料添加劑的加工 (1) 原料采集 綠原酸被認(rèn)為是杜仲葉所含主要藥用成分之。湯詩(shī)杰等（ 1999）研究指出，不同地理種源杜仲葉片綠原酸含量有明顯差異，季節(jié)性差異也極為明顯。研究同時(shí)對(duì) 17 個(gè)地理種源杜仲葉總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，不 同地理種源杜仲葉總黃酮含量差異顯著，但春葉與秋葉的總黃酮含量無(wú)顯著差異 [9]。陳芝龍等（ 2020）初步揭示了杜仲原料葉內(nèi)含膠藥成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，證明采收時(shí)間不同膠藥品質(zhì)差異較大，最佳采收季節(jié)為藥用葉 8 月份，膠用葉 10 月至 11 月中旬 [10]。 由于種（系）、產(chǎn)地、采收時(shí)間和處理加工不同，杜仲葉及其產(chǎn)品中營(yíng)養(yǎng)和生物活性成分含量也存在不同程度的差異。因此，在科學(xué)研究、產(chǎn)品開(kāi)發(fā)及實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)當(dāng)綜合考慮其影響因素，不能僅以用葉量為依據(jù)。 (2) 原料的預(yù)處理 原料的預(yù)處理可采用烘干法及沸水蒸法 [11]。 蒸汽處理對(duì)鮮葉的穿透均勻，不會(huì)產(chǎn)生焦葉，葉子內(nèi)部溫度瞬時(shí)升高，使多酚類物質(zhì)充分氧化，從而減輕了杜仲葉提取液的苦澀味，有利于各種活性成分的保留，提高了提取液的口感，且所用時(shí)間較短，因此，蒸發(fā)預(yù)處理要優(yōu)于烘干法。 (3) 杜仲葉的發(fā)酵 將杜仲葉經(jīng)酵母菌、枯草芽孢桿菌進(jìn)行發(fā)酵后，不僅可保持原有的營(yíng)養(yǎng)成分，產(chǎn)生出許多有益的代謝產(chǎn)物，而且還有利于一些有效成分的分離和提取 [12]。發(fā)酵培養(yǎng)基是微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，適宜的培養(yǎng)基可有效提高杜仲液中有效成分如綠原酸的含量，改善口感、風(fēng)味 [13]。 杜仲葉飼料添 加劑研究現(xiàn)狀 杜仲提取液對(duì)畜禽有增強(qiáng)免疫機(jī)制、改善動(dòng)物產(chǎn)品風(fēng)味的效果，并有維生素樣促生長(zhǎng)等作用，是很有發(fā)展前景的天然飼料添加劑 [16]。杜仲添加劑具有增強(qiáng)免疫和抗病力、抗應(yīng)激、促生長(zhǎng)、改善肉質(zhì)等獨(dú)特功效，具無(wú)毒、無(wú)公害、無(wú)殘留等優(yōu)點(diǎn)，飼養(yǎng)效果良好，經(jīng)濟(jì)效益明顯，是一種天然中藥飼料添加劑 [17]。 當(dāng)然，在杜仲葉飼料添加劑的研究課題中尚有一些問(wèn)題有需要進(jìn)一步探討：對(duì)杜仲所含不同成分單獨(dú)和聯(lián)合的藥理作用、食品動(dòng)物食后反應(yīng)、最適劑量進(jìn)行研究；加強(qiáng)以杜仲葉為原料的飼料添加劑研發(fā)，采取先進(jìn)技術(shù)工藝和科學(xué)管理，生產(chǎn) 出高效、低適宜成本和使用方便的飼料添加劑產(chǎn)品，依產(chǎn)品性質(zhì)或使用對(duì)象對(duì)產(chǎn)品分類并制定標(biāo)準(zhǔn)；加強(qiáng)動(dòng)物試驗(yàn)，試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)包括所有主要食品動(dòng)物，以及每種動(dòng)物的不同生理生產(chǎn)階段等 [19]?？傊?，對(duì)于杜仲葉應(yīng)合理開(kāi)發(fā)，制定科學(xué)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，完善加工工藝，使杜仲的有效成分真正進(jìn)入生產(chǎn)性應(yīng)用中，推動(dòng)我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展。 本研究的目的和意義 本研究以杜仲葉為主要原料，利用酵母菌、枯草芽孢桿菌等生物能源對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵，并對(duì)發(fā)酵前后杜仲葉中綠原酸、多糖、蛋白質(zhì)等成分進(jìn)行對(duì)比分析其作為飼料添加劑的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，從而獲得對(duì)杜仲葉發(fā)酵 最有利的菌株。 且我校浦口校區(qū)附近有近萬(wàn)畝的杜仲樹(shù)林，若能合理開(kāi)發(fā)，是極具經(jīng)濟(jì)效益及發(fā)展前景的。是極有發(fā)展前景和具有較高開(kāi)發(fā)利用價(jià)值的飼料添加劑原料。 第二章 實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)材料 菌種來(lái)源 杜仲葉樣品來(lái)源：采集 主要試劑 表 21 發(fā)酵實(shí)驗(yàn)主要試劑 試劑名稱 純度 生產(chǎn)廠家 馬鈴薯 葡萄糖 分析純 中國(guó)惠興生化試劑有限公司上海 牛肉膏 生化試劑 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司 蛋白胨 生化試劑 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 氯化鈉 分析純 國(guó)藥 集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 氫氧化鈉 分析純 西隴化工股份有限公司 酵母浸膏 生化試劑 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 表 22 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)主要試劑 試劑名稱 純度 生產(chǎn)廠家 甲醇 分析純 上海九億化學(xué)試劑有限公司 綠原酸標(biāo)樣 % Made in Germany 蒽酮 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 硫脲 分析純 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司 標(biāo)準(zhǔn)纖維素 濃硫酸 分析純 上海九億化學(xué)試劑有限公司 鹽酸 分析純 上海九億化學(xué)試劑有限公司 氫氧化鈉 分析純 西隴化工股份有限公司 硼酸 分 析純 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司 硫酸銅 分析純 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司 硫酸鉀 (硫酸鈉 ) 分析純 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司 硫酸銨 分析純 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司 無(wú)水碳酸鈉 分析純 江蘇永華精細(xì)化學(xué)品有限公司 主要儀器 表 23 發(fā)酵實(shí)驗(yàn)主要儀器 儀器名稱 型號(hào) 生產(chǎn)廠家 電爐 高壓蒸汽滅菌鍋 超凈工作臺(tái) 搖床培養(yǎng)箱 電烘箱 電子天平 FA2020 上海舜宇恒平科學(xué)儀器公司 冰箱 三角瓶 接種環(huán) 培養(yǎng)皿 酒精燈 表 24 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)主要儀器 儀器名稱 型號(hào) 生產(chǎn)廠家 超聲波清洗器 KH3200 昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) Spectrumlab752s Leng guang tech 恒溫水浴鍋 HH6 江蘇金壇榮華儀器制造有限公司 電爐 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 DHG9076A 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司 量筒 滴管 電子天平 FA2020 上海舜宇恒平科學(xué)儀器公司 容量瓶 250ml 移液槍 1ml、 5ml 實(shí)驗(yàn)流程 杜仲葉 →預(yù)處理 →干燥 →粉碎 →搖瓶培養(yǎng) →發(fā)酵后檢測(cè) 菌種 →活化 →啟動(dòng)發(fā)酵 發(fā)酵方法 接種 發(fā)酵前檢測(cè) 培養(yǎng)基 表 25 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基名稱 PDA 培養(yǎng)基 普通肉湯培養(yǎng)基 配制成分 馬鈴薯 200g，葡萄糖 20g，水 1000ml