【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 基上的生長(zhǎng)特性及菌落形態(tài)特性。對(duì)某些細(xì)菌（如多殺性巴氏桿菌），還應(yīng)打開(kāi)培養(yǎng)基平皿蓋聞味，檢查是否有特殊的氣味產(chǎn)生。 結(jié)合臨床病變、細(xì)菌的染色特性、細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特性、溶血性等，可初步鑒定細(xì)菌的種類(lèi)。必要時(shí)需做一系列的生化試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)，對(duì)分離菌做詳細(xì)的鑒定。 細(xì)菌和霉菌 一：孵化廳細(xì)菌監(jiān)測(cè)技術(shù) ： （棉試子涂擦檢驗(yàn)法） :培養(yǎng)基及器械 (皿 )數(shù)量的準(zhǔn)備應(yīng)根據(jù)送檢計(jì)劃事先進(jìn)行，凡與被檢樣品 直接接觸的物品 :平皿、吸管、生理鹽水等，必需經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理及紫外線(xiàn)消毒 。 培養(yǎng)基 : A:營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 (NA.) 、 B:麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 (Mac.)、 C:高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基 (MSA.)、 D:霉菌瓊脂培養(yǎng)基 (MM)、 E:沙門(mén)氏志賀氏瓊脂培養(yǎng)基 ()、 F:四硫磺酸鈉增菌液 (TTB.)、 G:三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基、 H:賴(lài)氨酸鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基、 I:尿素及其它常見(jiàn)生化試驗(yàn)管、 I:沙門(mén)氏菌屬血清、 器械 (皿 ): A..水浴鍋 :向水浴鍋內(nèi)加入純凈水適量 ,溫度調(diào)至 55℃。 2 毫升吸管、 10 毫升吸管、平皿。 :滅菌鹽水、液泵、記號(hào)筆、試管架、塑料桶等。 : 登記、編號(hào) : 化驗(yàn)室接到樣品后，首先根據(jù)送檢單對(duì)其進(jìn)行清點(diǎn)和簦記。同時(shí)將所有樣品進(jìn)行統(tǒng)一化驗(yàn)編號(hào) ,并 用記號(hào)筆標(biāo)記在相應(yīng)的試管上，并依次排在試管架上。 操作人員必須雙手消毒、更換工作服、鞋、帽、戴口罩進(jìn)入無(wú)菌室。 稀釋 : 在無(wú)菌室內(nèi)將全部試管蓋兒打開(kāi) ,每管內(nèi)加入 4 毫升滅菌鹽水 ,浸泡 510 分鐘。 標(biāo)號(hào) : 加樣前先要將棉拭子的編號(hào)標(biāo)記在平皿上 ,每個(gè)棉拭子使用四個(gè)平皿。 加樣 : 用 2 毫升吸管在浸有棉拭子的試管中反復(fù)吸打使之均勻，然后吸取 2 毫升稀釋液，分別加入對(duì)應(yīng)編號(hào)的四個(gè)平皿內(nèi) ,每個(gè)平皿 毫升。 分組 :加樣完 畢 ,要將全部平皿分成四組放置，使每組的編號(hào)完全一樣，即每個(gè)棉拭子占用的四個(gè)平皿各為一組。 傾注培養(yǎng)基 : 將水浴鍋中冷卻到 4852℃的 NA、 Mac、 MSA、 MM 四種液體培養(yǎng)基分別傾注到四組平皿中，每種培養(yǎng)基傾注一組，每個(gè)平皿 15 毫升，傾注后搖勻冷卻。 培養(yǎng) :待凝固后倒置于 37℃恒溫箱中培養(yǎng)。 . 沙門(mén)氏菌屬的檢驗(yàn) : 將試管中的 2 毫升液體連同拭子加入盛有 20ml 四硫磺酸鈉亮綠增菌液（ TTB）的三角燒瓶中，置于 37℃恒溫箱內(nèi)增菌 24 小時(shí) 。 取增菌液一環(huán)劃線(xiàn)接種于沙門(mén)氏志賀氏瓊脂培養(yǎng)基 (SS)板上，然后將其置于 37℃恒溫箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。觀察其菌落形態(tài)是否有可疑沙門(mén)氏菌落 ,若有無(wú)色半透明 。產(chǎn)硫化氫菌株有的菌落中心帶有黑色 ,即為沙門(mén)氏可疑菌落。如無(wú)典型可疑菌落應(yīng)再繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時(shí)。 篩選試驗(yàn) : 在沙門(mén)氏志賀氏瓊脂平板至少應(yīng)選出 2 個(gè)典型或可疑沙門(mén)氏菌落分別接種于尿素試管培養(yǎng)基中并穿刺、劃線(xiàn)于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試管中 .(為了防止遺漏 ,一般應(yīng)多挑幾個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng) )于 37℃恒溫箱中培養(yǎng) 24 小時(shí) (必要時(shí)可 延長(zhǎng)止 48 小時(shí) )觀察其菌落形態(tài)及生化反應(yīng)。 表 1 三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶培養(yǎng)基篩選 三糖鐵瓊脂 賴(lài)氨酸脫羧酶 初步判斷 斜面 底層 產(chǎn)氣 硫化氫 K A +() +() + 可疑沙門(mén)氏菌屬 K A +() +() _ 可疑沙門(mén)氏菌屬 表 2 三糖鐵瓊脂和尿素酶瓊脂篩選 三糖鐵瓊脂 尿素酶 瓊 脂 初步判斷 斜面 底層 產(chǎn)氣 硫化氫 K A +() +() _ 可疑沙門(mén)氏菌屬 A A +() +() _ 可疑亞 利桑那菌屬 注 ： K:產(chǎn)堿 。 A: 產(chǎn)酸 。 ＋ : 陽(yáng)性反應(yīng) － :陰性反映 (－ ): 少見(jiàn)反應(yīng) : 生化試驗(yàn) : 將符合表 1 表 2 可疑沙門(mén)氏菌屬的三糖鐵瓊脂及尿素培養(yǎng)特性的應(yīng)再進(jìn)一 步做生 化試驗(yàn)及沙門(mén)氏菌屬的因子血清鑒定試驗(yàn)。按表 3 進(jìn)行生化試 表 3. 沙門(mén)氏菌屬生化反應(yīng) 序號(hào) 生化項(xiàng)目 沙門(mén)氏菌反應(yīng) 1 尿素酶試驗(yàn) － 2 V－ P 試驗(yàn) － 3 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn) ＋ 4 吲哚試驗(yàn) － 5 丙二酸鈉試驗(yàn) － 6 衛(wèi)矛醇試驗(yàn) 反應(yīng)不定 所有生化試驗(yàn)管均于 37℃培養(yǎng) 24 小時(shí)。 生化試驗(yàn)結(jié)果符合表 3 沙門(mén)氏菌特性的按 進(jìn)行。 血清學(xué)鑒定試驗(yàn) : 檢查培養(yǎng)物有無(wú)自凝性 在潔凈的玻片上加一滴生理鹽水 ,將待檢培養(yǎng)物混合于生理鹽水滴內(nèi) ,使其成為均一性的渾濁懸液 ,將玻片輕輕搖動(dòng) ,在黑色背景下觀察其凝集反應(yīng)。如菌體 彼此相凝集成明顯或較明顯的小顆粒狀物，即可 認(rèn)為有自凝性。反之無(wú)自凝性。 用沙門(mén)氏診斷血清做進(jìn)一步的血清學(xué)鑒定 . 對(duì)無(wú)自凝性的培養(yǎng)物 ,先以多價(jià)“ O”血清代替生理鹽水 ,在 2 分鐘內(nèi)判斷 結(jié)果。 如為陽(yáng)性結(jié)果以單“ O”血清進(jìn)一步進(jìn)行分群試驗(yàn)。 : 菌落計(jì)數(shù) : 培養(yǎng) 24 小時(shí)后取出營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、霉菌瓊脂培養(yǎng)基、高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基記數(shù)所有菌落為總菌數(shù)；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基記數(shù)粉紅色菌落數(shù)，通過(guò)生化鑒定大腸桿菌；霉菌瓊脂培養(yǎng)基置于室溫下再經(jīng)過(guò) 24小時(shí)記數(shù)霉菌數(shù)。不同的曲霉分生孢子的顏色不一樣 ,有黃、蘭、青、黑綠、棕等色；鐮孢酶的菌絲有隔 ,產(chǎn)生在菌絲孢子上的分生孢子 ,大分生孢子呈鐮刀狀 ,有的呈豆角狀。和高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基也置于室溫下經(jīng)過(guò) 24 小時(shí)后觀察其菌落形態(tài)，對(duì)培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的圓形、光滑、隆起的金黃色菌落 ,染色鏡檢鑒定葡萄球菌。每一平板上的菌落數(shù)乘以 8 即為每個(gè)棉試子的含菌量。 檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) : 總菌數(shù) 60 個(gè) /枚 大腸桿菌 : 0 沙門(mén)氏菌 : 0 萄葡球菌 : 0 霉菌 : 0 2．空氣中細(xì)菌的檢驗(yàn) ： 采樣 :見(jiàn)樣品采集方法中孵化廳空氣樣品一項(xiàng) : : 菌落計(jì)數(shù) : 培養(yǎng) 24 小時(shí)后取出營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、霉菌瓊脂培養(yǎng)基、高鹽 甘露醇瓊脂培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基記數(shù)所有菌落為總菌數(shù)；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基記數(shù)紅色菌落數(shù)，通過(guò) 生化鑒定大腸桿菌 。霉菌瓊脂培養(yǎng)基置于室溫下再經(jīng)過(guò) 24 小時(shí)記數(shù)霉菌數(shù)；高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基也置于室溫下經(jīng)過(guò) 24 小時(shí)后觀察其菌落形態(tài)，對(duì)培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的圓形、光滑、隆起的菌落染色鏡檢鑒定葡萄球菌。 檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn) : A: 總菌數(shù) 30 B: 大腸桿菌 5 C: 沙門(mén)氏菌 0 D: 霉 菌 2 E: 葡萄球菌 2 3． 工作間表面及設(shè)備表面檢驗(yàn) :培 養(yǎng)基及器械 (皿 )數(shù)量的準(zhǔn)備應(yīng)根據(jù)送檢計(jì)劃事先進(jìn)行，凡與被檢樣品 直接接觸的物品 :平皿、吸管、生理鹽水等，必需經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理及紫外線(xiàn)消毒 。 培養(yǎng)基 : A:營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 (NA.) 、 B:麥康凱瓊脂培養(yǎng)基 (Mac.)、 C:高鹽甘露醇瓊脂培養(yǎng)基 (MSA.)、 D:霉菌瓊脂培養(yǎng)基 (MM)、 E:沙門(mén)氏志賀氏瓊脂培養(yǎng)基 ()、 F:四硫磺酸鈉增菌液 (TTB.)、 G:三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基、 H:賴(lài)氨酸鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基、 I:尿素及其它常見(jiàn)生化試驗(yàn)管、 I:沙門(mén)氏菌屬血清、 器械 (皿 ): A..水浴鍋 :向水浴鍋內(nèi)加入純凈水適量 ,溫度調(diào)至 55℃。 2 毫升吸管、 10 毫升吸管、平皿。 :滅菌鹽水、液泵、記號(hào)筆、試管架、塑料桶等。 : 登記、編號(hào) : 化驗(yàn)室接到樣品后，首先根據(jù)送檢單對(duì)其進(jìn)行清點(diǎn)和簦記。同時(shí)將所有樣品進(jìn)行統(tǒng)一化驗(yàn)編號(hào) ,并用記號(hào)筆標(biāo)記在相應(yīng)的試管上，并依次排在試管架上。 操作人員必須雙手消毒、更換工作服、鞋、帽、戴口罩進(jìn)入無(wú)菌室。 稀釋 : 在無(wú)菌室內(nèi)將全部試管蓋兒打開(kāi) ,每管內(nèi)加入 4 毫升滅菌鹽水 ,浸泡 510 分鐘。 標(biāo)號(hào) : 加樣前先要將棉拭子的編號(hào)標(biāo)記在平皿上 ,每個(gè)棉拭子使用四個(gè)平皿。 加樣 : 用 2 毫升吸管在浸有棉拭子的試管中反復(fù)吸打使之均勻，然后吸取 2 毫升稀釋液，分別加入對(duì)應(yīng)編號(hào)的四個(gè)平皿內(nèi) ,每個(gè)平皿 毫升。 分組 :加 樣完畢 ,要將全部平皿分成四組放置，使每組的編號(hào)完全一樣，即每個(gè)棉拭子占用的四個(gè)平皿各為一組。 傾注培養(yǎng)基 : 將水浴鍋中冷卻到 4852℃的 NA、 Mac、 MSA、 MM 四種液體培養(yǎng)基分別傾注到四組平皿中，每種培養(yǎng)基傾注一組，每個(gè)平皿 15 毫升，傾注后搖勻冷卻。 培養(yǎng) :待凝固后倒置于 37℃恒溫箱中培養(yǎng)。 . 沙門(mén)氏菌屬的檢驗(yàn) : 將試管中的 2 毫升液體連同拭子加入盛有 20ml 四硫磺酸鈉亮綠增菌液（ TTB）的三角燒瓶中，置于 37℃恒溫箱內(nèi)增菌 24 小時(shí)。 取增菌液一環(huán)劃線(xiàn)接種于沙門(mén)氏志賀氏瓊脂培養(yǎng)基 (SS)板上，然后將其置于 37℃恒溫箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。觀察其菌落形態(tài)是否有可疑沙門(mén)氏菌落 ,若有無(wú)色半透明 。產(chǎn)硫化氫菌株有的菌落中心帶有黑色 ,即為沙門(mén)氏可疑菌落。如無(wú)典型可疑菌落應(yīng)再繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時(shí)。 篩選試驗(yàn) : 在沙門(mén)氏志賀氏瓊脂平板至少應(yīng)選出 2 個(gè)典型或可疑沙門(mén)氏菌落分別接種于尿素試管培養(yǎng)基中并穿刺、劃線(xiàn)于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試管中 .(為了防止遺漏 ,一般應(yīng)多挑幾個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng) )于 37℃恒溫箱中培養(yǎng) 24 小時(shí) (必要 時(shí)可延長(zhǎng)止 48 小時(shí) )觀察其 菌落形態(tài)及生化反應(yīng)。 表 1 三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶培養(yǎng)基篩選 三糖鐵瓊脂 賴(lài)氨酸脫羧酶 初步判斷 斜面 底層 產(chǎn)氣 硫化氫 K A +() +() + 可疑沙門(mén)氏菌屬 K A +() +() _ 可疑沙門(mén)氏菌屬 表 2 三糖鐵瓊脂和尿素酶瓊脂篩選 三糖鐵瓊脂 尿素酶 瓊 脂 初步判斷 斜面 底層 產(chǎn)氣 硫化氫 K A +() +() _ 可疑沙門(mén)氏菌屬 A A +() +() _ 可疑亞 利桑那菌屬 注 ： K:產(chǎn)堿 。 A: 產(chǎn)酸 。 ＋ : 陽(yáng)性反應(yīng) － :陰性反映 (－ ): 少見(jiàn)反應(yīng) : 生化試驗(yàn) : 將符合表 1 表 2 可疑沙門(mén)氏菌屬的三糖鐵瓊脂及尿素培養(yǎng)特性的應(yīng)再進(jìn)一 步做生 化試驗(yàn)及沙門(mén)氏菌屬的因子血清鑒定試驗(yàn)。按表 3 進(jìn)行生化試 表 3. 沙門(mén)氏菌屬生化反應(yīng) 序號(hào) 生化項(xiàng)目 沙門(mén)氏菌反應(yīng) 1 尿素酶試驗(yàn) － 2 V－ P 試驗(yàn) － 3 賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn) ＋ 4 吲哚試驗(yàn) － 5 丙二酸鈉試驗(yàn) － 6 衛(wèi)矛醇試驗(yàn) 反應(yīng)不定 所有生化試驗(yàn)管均于 37℃培養(yǎng) 24 小時(shí)。 生化試驗(yàn)結(jié)果符合表 3 沙門(mén)氏菌特性的按 進(jìn)行。 血清學(xué)鑒定試驗(yàn) : 檢查培養(yǎng)物有無(wú)自凝性 在潔凈的玻片上加一滴生理鹽水 ,將待檢培養(yǎng)物混合于生理鹽水滴內(nèi) ,使其成為均一性的渾濁