植物基因工程中的λ噬菌體載體(編輯修改稿)
2025-02-03 05:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 當噬菌體感染宿主細胞后 , 雙鏈 DNA 分子通過 cos 而成環(huán)狀。 在感染早期 , 環(huán)狀 DNA 分子進行轉(zhuǎn)錄。在此期間 , 噬菌體有兩條復(fù)制途徑可供選擇 : 一是裂解生長。環(huán)狀DNA 分子在宿主細胞里復(fù)制若干次 , 合成了大量的噬菌體基因產(chǎn)物 , 形成子代噬菌體顆粒 , 成熟后使細菌裂解 , 釋放出許多新的有感染能力的病毒顆粒。另一是溶源性生長。噬菌體 DNA 整合進宿主菌的基因組 ,然后像細菌染色體上的基因一樣進行復(fù)制 , 并傳遞給下一代細菌。 由于噬菌體頭部包裝容量的限制，重組 λ DNA分子大小只能在 39— 52kb之間。 λ噬菌體的繁殖方式 在感染的細胞內(nèi) , 噬菌體有兩條復(fù)制途徑 : 裂解生長 溶源性生長 DNA重組技術(shù)一般需要 λ 噬菌體進入溶菌狀態(tài)。 λ噬菌體載體的構(gòu)建 構(gòu)建方式： 插入型。只具有一個限制酶位點，可便于外源DNA插入，這種載體叫插入型載體（ insertion vectors）。 置換型。含有二個限制酶切點，在兩個位點之間的 DNA區(qū)段可以被外源 DNA片段所取代。這種載體叫置換型載體（ replacement vectors）。 至今已用噬菌體開發(fā)出許多插入型和置換型載體 插入型載體 : ZAP,ZAP, gt10,gt11等 置換型載體 : GEM11, GEM12,EMBL3,EMBL4等 構(gòu)建過程 ? 野生型 λ噬菌體 DNA必須經(jīng)過改造才能成為理想的載體，其構(gòu)建過程主要有：①刪除基因組中非必需區(qū)，建立外源 DNA片段的替換點，增加承載外源 DN
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