植物基因工程-08級(jí)(編輯修改稿)
2025-10-08 21:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 基因槍的動(dòng)力系統(tǒng)，分為 3種類型 火藥爆炸力為加速動(dòng)力 ，采用塑料子彈和阻擋板。塑料子彈前端載放著 DNA包裹的鎢 /金粉。 高壓氣體作為動(dòng)力 ，如氦氣、氫氣、氮?dú)獾?。把載有 DNA的鎢 /金粉鋪灑在一張微粒載片上，在壓縮空氣的沖擊下，驅(qū)動(dòng)載片，當(dāng)載片受阻于金屬篩網(wǎng)時(shí)，載有 DNA的鎢 /金粉繼續(xù)向下沖擊射入細(xì)胞。 高壓放電為驅(qū)動(dòng)力 ，可以無(wú)級(jí)調(diào)速，通過(guò)變化工作電壓，使載有 DNA的鎢 /金粉粒子能達(dá)到目的細(xì)胞層。 PDS1000/He系統(tǒng) 基因槍的操作步驟 a) DNA微彈的制備：金粉或鎢粉 50~100mg、 DNA、CaCl PEG4000和亞精胺 b) 靶外植體材料準(zhǔn)備 c) DNA微彈轟擊 d) 轟擊后外植體的培養(yǎng) 轉(zhuǎn)化率及其影響因素 a) 金屬微粒的影響 b) DNA沉淀輔助劑的影響 c) DNA的純度及濃度對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響 d) 微彈速度的影響 e) 植物材料的內(nèi)在因素的影響 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法 ① 植物冠癭瘤－植物的一種癌癥 冠癭瘤的起因： 由根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)[屬根瘤菌科 (Rhizobiaceat)]對(duì)植物的侵染而引起 冠癭瘤的侵染過(guò)程： 細(xì)菌通過(guò)傷口進(jìn)入植物，在基因水平上轉(zhuǎn)化植物。細(xì)菌 DNA中的編碼基因 在植物細(xì)胞中表達(dá)，刺激植物細(xì)胞不受控制的分裂，形成瘤。 冠癭瘤 ② Ti質(zhì)粒 (Tumor inducing plasmid) Ti質(zhì)粒 是根癌農(nóng)桿菌染色體外的遺傳物質(zhì)，為雙股共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA分子，其分子量為 95～ 156 106D，約有 200kb。 Ti質(zhì)粒的類型 ： 根據(jù)冠癭瘤合成的冠癭堿種類不同分為： a) 章魚(yú)堿型 (octopine) b) 胭脂堿型 (nopaline) c) 農(nóng)桿堿型 (agropine) Ti質(zhì)粒的基因結(jié)構(gòu) ： TDNA區(qū)、 Vir區(qū)、 Con區(qū)和 Ori區(qū)共 4個(gè)區(qū)段。 ③ Ti質(zhì)粒的遺傳特性 I. TDNA區(qū) (transfer DNA region) Ti質(zhì)粒中的一部分 DNA片段 ， 進(jìn)入寄主細(xì)胞并插入基因組中 ， 能夠利用植物的酶系統(tǒng)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯 ， 其表達(dá)產(chǎn)物可誘發(fā)植物產(chǎn)生腫瘤 。 TDNA區(qū)結(jié)構(gòu)特征： a) 左右兩端邊界各有一個(gè) 25bp長(zhǎng)的正向重復(fù)序列 (Lb和 Rb) ， 具有高度保守性 。 b) 右邊界突變和缺失導(dǎo)致轉(zhuǎn)移能力降低或喪失
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