臨床基因擴增檢驗的質(zhì)量保證ppt97(編輯修改稿)
2025-01-31 17:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 應對試劑準備、標本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出 “標準操作程序 ”(SOP) 實驗室質(zhì)量管理體系的建立n質(zhì)量手冊n質(zhì)量體系程序文件n標準操作程序質(zhì)量管理的內(nèi)涵n寫你所做的n做你所寫的n記錄你已做的怎樣編寫 SOP？人員培訓 n 臨床基因擴增檢驗的操作主要是標本處理中的核酸提取步驟， 這其中所涉及 的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡單， 但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測定結(jié)果，操作人員需要一定的專業(yè)技術知識和經(jīng)驗，要盡可能做到知其然 又知其所以然。 核酸樣本的制備、擴增檢測及其質(zhì)量控制n 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內(nèi)釋出的原理n 核酸的分離純化n 靶核酸提取的質(zhì)量 n 臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) n 核酸樣本制備及擴增檢測的質(zhì)控 n 產(chǎn)物檢測的質(zhì)控 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內(nèi)釋出的原理n 靶核酸可以與宿主細胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構形存在于細胞內(nèi)，如測定的是病原微生物 ,則靶核酸存在于細菌、病毒、原蟲或真菌細胞內(nèi)，如果上述細胞破裂 ,則靶核酸亦可存在于細胞外。 n 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細胞內(nèi)釋放出來。核酸的分離純化 n核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴增的物質(zhì)去除。 n經(jīng)典方法n硅吸附法n對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進行評價。 臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) n 臨床標本中： 血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、 降解靶核酸的核酸 酶等 。n 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 對臨床標本中可能存在的抑制 /干擾物的質(zhì)控措施n質(zhì)控措施： 采用內(nèi)質(zhì)控（internal control, IC）（通常稱為內(nèi)標）的方法 n內(nèi)標有兩種 ,即競爭性的和非競爭性的內(nèi)標。 n內(nèi)標設置的必要性 ？統(tǒng)計學質(zhì)量控制 n理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件n測定中質(zhì)控樣本的設置、數(shù)量及排列順序 n統(tǒng)計學質(zhì)控的特點 n統(tǒng)計質(zhì)控方法理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件n 基質(zhì)與待測樣本一致；n 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；n 穩(wěn)定；n 靶值或預期結(jié)果已定；n 無已知的生物傳染危險性；n 單批可大量獲得；n 價廉測定中質(zhì)控樣本的設置、數(shù)量及排列順序n 每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應每隔幾份臨床標本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴增檢驗的標本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應可以滿足要求。而定量測定則要根據(jù)試驗的測定范圍，采用高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。至于在測定中的排列順序，可排于標準品或校準品之后，臨床樣本之前。 臨床基因擴增檢驗室內(nèi)質(zhì)控的獨特性n即監(jiān)測污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設置。 n應該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴增反應混合液的管 。 陰性原血清質(zhì)控樣本的功能 n監(jiān)測實驗室的以前擴增產(chǎn)物的污染； n由實驗操作所致的標本間的交叉污染 ；n擴增反應試劑的污染。 在標本核酸提取過程中帶入的一個空管 的功能n基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴增抑制物，因而對污染的反映更為靈敏 ；n不能取代原血清陰性樣本 。僅含擴增反應混合液的管 的功能n 監(jiān)測擴增試劑是否發(fā)生污染，具有較強的污染鑒別性。n 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴增反應混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產(chǎn)物的存在。 統(tǒng)計學質(zhì)控的特點 n 檢驗誤差有兩類，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機誤差。n 系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設備、試劑、標準品或校準物出現(xiàn)問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。n 隨機誤差則表現(xiàn)為測定 SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機因素所致，其出現(xiàn)難以完全避免和控制。統(tǒng)計學質(zhì)控的功能n 統(tǒng)計學質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。n 開展統(tǒng)計質(zhì)量控制前，應將可以控制的誤差產(chǎn)生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內(nèi)質(zhì)控的前提，也是保證常規(guī)檢驗工作質(zhì)量的先決條件。 統(tǒng)計質(zhì)控方法 n 基線測定n 質(zhì)控規(guī)則的表達方式及定義 n LeveyJennings質(zhì)控圖方法 n LeveyJennings質(zhì)控圖結(jié)合 Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法 n 累積和 (CUSUM) 質(zhì)控方法 n “ 即刻法 ” 質(zhì)控方法 基線測定n 最佳條件下的變異（ Optimal conditions variance, OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； n 當 RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時，則RCV是可以接受的。以上為 批間變異 。n 批內(nèi)變異 的測定；n 室內(nèi)質(zhì)控物的 測定準確度 的評價。 臨床基因擴增檢驗 IQC統(tǒng)計計算問題n可使用質(zhì)控樣本擴增后的 拷貝數(shù)/ml或 IU/ml來進行統(tǒng)計計算，也可
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