仿制藥雜質(zhì)檢查方法建立和方法學研究與評價(編輯修改稿)
2025-01-23 16:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 如果制劑中的主藥或輔料在 284nm有明顯的明收，會干擾 5HMF的檢查，可釆用 HPLC法代替 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 27 雜質(zhì)檢查常見方法介紹 HPLC法 考慮被仿制藥的色譜條件 參考同類物質(zhì)質(zhì)量標準中的雜質(zhì)檢查方法 一般選擇多種色譜條件 反相和正相 方法包括 固定相、流動相、洗脫方式、波長、測試樣品的處理、具體操作、計算方法 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 28 （ 1）固定相的選擇 根據(jù)待研究的藥物的特性選擇合適填料的柱子，常用 RPHPLC，色譜柱多選用 C18柱， C8柱、苯基柱、氨基柱也有使用 C18柱時，流動相有機溶劑 %通常 ≥5% 流動相 PH值 28 PH＞ 8，溶解硅膠載體，宜選用耐堿填充劑：包覆聚合物、高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、非硅膠或有機 無機雜化填充劑 PH＜ 2，鍵合相水解脫落，宜選用耐酸填充劑：有機 無機雜質(zhì)填充劑、具有大體積側(cè)鏈的二異丙基或二異丁基取代基取代 C18鍵合硅膠等 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 29 ?注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究： 當雜質(zhì)峰與主峰的分離情況不十分完美 確定輔料峰的相對保留時間（用于定位扣除輔料峰的干擾） 確定特定雜質(zhì)的相對保留時間 確定有關(guān)物質(zhì)出峰完畢的保留時間 當不同品牌而引起以上各因素不固定時，應在標準中注明品牌。 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 30 （ 2）流動相的選擇 ? 嘗試多種流動相 ? 結(jié)合雜質(zhì)的性質(zhì) 手性雜質(zhì) 無紫外吸收雜質(zhì) 一般雜質(zhì) （ 3）洗脫方式的選擇 等度洗脫 梯度洗脫：極性大的化合物可能被掩蓋，極性小 的化合物難以被洗脫，甚至保留在柱上，可適用梯度 洗脫。 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 31 梯度洗脫與等度洗脫條件下有關(guān)物質(zhì)的分離情況 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 32 （ 4）波長的選擇 選擇的原則是大部分主要雜質(zhì)與主成分均在此 波長下有吸收 ?二極管陣列方法 無紫外吸收或檢測波長處吸收相差較大的多種 化合物，有時在單一檢測波長處不能檢出 兼顧各雜質(zhì)吸收情況；特定波長檢測特定雜質(zhì) 必要時，改用其他類型檢測器 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 33 三、雜質(zhì)檢查方法驗證的要求 34 （ 5）樣品的處理和配制 預處理樣品的考慮 ?乳膏 ?提取可能導致的雜質(zhì)漏檢和失真 ?衍生化處理導致的雜質(zhì)丟失 樣品濃度的影響 ?濃度高利于雜質(zhì)的檢出，但防超載 ?低濃度樣品雜質(zhì)的檢查難題？ 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 35 （ 6）雜質(zhì)的定量計算方法 雜質(zhì)對照品法 ? 定量準確，已知雜質(zhì)，需用雜質(zhì)對照品 校正因子的主成分自身對照法 ? 定量準確，已知雜質(zhì)，無需長期提供對照品 不加校正因子的主成分自身對照法 ? 前提是假定雜質(zhì)與主成分的響應因子基本相同 ? 有一定誤差，可用于未知雜質(zhì) ? 已知雜質(zhì)對主成分的響應因子在 ～ 峰面積歸一法 ? 簡便 ? 因雜質(zhì)與主成分響應因子不同、線性范圍不同、儀器對它們的積分精度及準確度不同等因素，有一定的局限性 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 36 目前定量方法中存在的主要問題 雜質(zhì)對照品法較少使用 主成分自身對照法較少采用校正因子計算 ?雜質(zhì)無法進行歸屬或雜質(zhì)對照品無法得到 ?校正因子無法計算 常見的是對未知雜質(zhì)，不加校正因子的主成分 自身對照或面積歸一化法 ?無法準確定量 ?無法有效檢測雜質(zhì) 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 37 TLC法 設(shè)備和操作簡便，一些特定雜質(zhì)的檢查 靈敏度較差、定量不夠精確，分離度欠佳，有 時無法滿足需要 僅限于限度檢查（半定量），結(jié)合不同原理的 檢視技術(shù)能使各雜質(zhì)斑點均可顯示，彌補 HPLC 的不足 需做好系統(tǒng)適用性試驗 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 38 定量方法 ?限度檢查（半定量） ?對照品比較法 —— 已知雜質(zhì)，對照品 ?自身對照法 —— 已知雜質(zhì)、未知雜質(zhì)，色調(diào)一 致 ?檢視技術(shù) —— 顯色、熒光、自身顏色等 二、雜質(zhì)檢查方法的建立 39
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