18醫(yī)藥基因工程(編輯修改稿)
2025-01-19 14:56 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 純化步驟； ⑷ 成本不高，有利于那些負(fù)擔(dān)不起現(xiàn)有的高價(jià)疫苗的患者。 五 .基因工程抗體 ? 抗體的定義： 是機(jī)體受抗原刺激后由 Ｂ淋巴細(xì)胞 產(chǎn)生，并且能與該抗原發(fā)生 特異性結(jié)合 的具有免疫功能的 球蛋白 ，是 體液免疫 應(yīng)答中發(fā)揮免疫功能的最主要的免疫分子，主要分布與血清中，在組織液和外分泌液中也存在。常規(guī)抗體是針對多種不同抗原決定蔟產(chǎn)生的抗體，又稱 多克隆抗體 ；而針對某種抗原決定蔟的抗體稱 單克隆抗體 ，一般由雜交瘤細(xì)胞分泌。 ? 在臨床上，抗體可用于 抗腫瘤、抗感染、抗器官移植排斥反應(yīng)、抗血栓形成和解毒 ，以及 構(gòu)建獨(dú)特型疫苗、治療自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)疾病 ，此外還可用于 體外診斷和發(fā)揮體內(nèi)藥物導(dǎo)向作用 ?；蚬こ炭贵w在臨床上可發(fā)揮更多更重要的作用。 第三節(jié) 基因工程抗體 一 .抗體的結(jié)構(gòu) ? 抗體分子是由４條多肽鏈組成的四聚體，即由 ２條相同的輕鏈（Ｌ）和２條相同的重鏈（Ｈ） 組成，重鏈之間以及輕鏈之間通過二硫鍵連接，呈Ｙ字型結(jié)構(gòu)（圖１８－２）。 ? 重鏈由 ４５０個(gè)氨基酸 組成（如抗體Ｉ gＧ），輕鏈由 ２１４個(gè)氨基酸 組成，完整抗體的相對分子質(zhì)量約為１５０ １０ ３ 。抗原的識別位點(diǎn)位于輕鏈和重鏈的Ｎ端區(qū)域，該區(qū)稱稱作 抗體的可變區(qū)（Ｖ區(qū)），識別位點(diǎn)就在Ｖ區(qū)內(nèi)的３個(gè) 互補(bǔ)決定區(qū)（ＣＤＲ）， 也稱 超變區(qū) ，每個(gè)ＣＤＲ長約５～１６個(gè)氨基酸。 ? Ｖ區(qū)以外的部分稱為 框架區(qū)（ＦＲ）， 其氨基酸序列相對保守，不與抗原分子直接結(jié)合，可維持抗體的空間構(gòu)型。 ? 抗體分子含有多個(gè)功能區(qū)，除Ｖ區(qū)外，每一條輕鏈含有１個(gè) 保守區(qū)（Ｃ區(qū)） Ｃ Ｌ ，每一個(gè)重鏈含有３個(gè)保守區(qū)（Ｃ Ｈ１ 、Ｃ Ｈ２ 、Ｃ Ｈ ３ ）。 二 .天然抗體的局限性 ? 抗原有多種不同抗原決定蔟，可刺激產(chǎn)生 多克隆抗體 。這種抗原是 不均一 的，會影響檢測抗原的特異性及敏感性，在臨床上應(yīng)用受到很大限制。 ? 單克隆抗體的定義 ：是由識別一種抗原決定蔟的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一抗體，可視為 第二代抗體 ，具高度 特異性、均一性，且親和力強(qiáng)、效價(jià)高 ，在臨床上發(fā)揮了重要作用。 ? 單克隆抗體在臨床中的問題 ：⑴單克隆抗體具有 免疫原性 ；⑵雜交瘤制備的單克隆抗體在人體內(nèi)的半衰期只有５～６h，不利于藥效發(fā)揮作用；⑶吸收差，抗體相對分子質(zhì)量大，很難通過血管進(jìn)入細(xì)胞間隙，大大降低治療效果；⑷生產(chǎn)復(fù)雜，價(jià)格較高。 三 .基因工程抗體的種類 １ .單克隆抗體的人源化 為了解決鼠源抗體的免疫原性問題，應(yīng)改造抗體，構(gòu)建人－鼠嵌合抗體和人源化抗體。 －鼠嵌合抗體 通過基因重組，將鼠源單克隆抗體的Ｆ v片段替換人源抗體的相應(yīng)片段，制成人－鼠嵌合抗體（圖１８－３）。７０％序列來自人源抗體，３０％序列來自鼠源抗體；可保留抗體的特異性結(jié)合位點(diǎn)，也可減弱其免疫原性。 是對嵌合抗體進(jìn)一步改進(jìn)的結(jié)果，即用鼠源單克隆抗體的ＣＤＲ所獲得的雜合抗體，９５％序列來自人源抗體，５％的序列來自鼠源抗體，最大限度地使鼠源抗體人源化（圖１８－４）?？贵w的抗原結(jié)合特性保留，在人體內(nèi)產(chǎn)生免役原性的程度降到最低。 ２ .小分子抗體 為了解決穿透性問題，對抗體改造，保留抗原結(jié)合位點(diǎn)，成為小分子抗體，分為下面５種： ab抗體 抗體的Ｆ ab片段由重鏈的Ｖ區(qū)和Ｃ m區(qū)與輕鏈以二硫鍵相連，能發(fā)揮抗體的抗原結(jié)合功能，大小為完整抗體的１／３。 將抗體的Ｖ Ｈ 和Ｖ Ｌ 用連接肽連接，形成具有 抗原結(jié)合能力的單鏈抗體多肽，即所謂的單鏈抗體（Ｓ cＦ v）。其大小僅為完整抗體的１／６，免疫原性弱，藥物動力學(xué)優(yōu)于Ｆ ab片段和完整抗體，能有效到達(dá)完整抗體無法達(dá)到的靶部位。 抗體結(jié)合抗原的部位主要在Ｖ區(qū)， 只含有Ｖ區(qū) 的小分子抗體，如Ｖ Ｈ 或Ｖ Ｌ， 也能保持原單克隆抗體的特異性，這種小分子抗體稱為單域抗體，其大小為完整抗體的１／１２，其只有一個(gè)功能區(qū)，制備簡單，更容易穿過靶細(xì)胞。 由單個(gè)ＣＤＲ多肽構(gòu)成的小分子抗體稱為超變區(qū)多肽，其只有１６～３０個(gè)氨基酸，具有與抗原結(jié)合的能力，穿透力極強(qiáng)。但親和力低，穩(wěn)定性不高，實(shí)際應(yīng)用有很大局限性。 將兩種不同抗體的Ｖ Ｈ 區(qū)和Ｖ Ｌ 區(qū)通過連接肽（５～１０個(gè)氨基酸）連接，形成“雜交”的單鏈抗體稱作雙體抗體（ diabody），也稱雙特異性抗體。在宿主細(xì)胞中表達(dá)后，２條鏈自動折疊，形成雙特異性的抗體片段，其大小為Ｉ gＧ的１／３或Ｆ ab的１／２，是相對分子質(zhì)量最小的雙功能抗體，在免疫診斷和治療方面有廣闊的應(yīng)用前景。 ３ .雙功能抗體 ? 雙功能抗體的定義 ：天然的抗體分子是雙價(jià)單特異性的，將小分子抗體（如Ｆ ab或Ｆ v）與其他蛋白如毒素、酶、細(xì)胞因子及受體分子連接在一起，可形成一種新型分子，這樣的雜和分子稱雙功能抗體。 ? 雙功能抗體即 可以與靶位點(diǎn)結(jié)合 ，又可 將特定的活性分子導(dǎo)向特定部位 ，發(fā)揮其生物學(xué)功能，如殺死腫瘤細(xì)胞、發(fā)揮催化功能等。 ? 將人細(xì)胞受體或黏附分子與抗體的恒定區(qū)（主要是Ｆ c片段）的Ｎ段連接，形成 免疫黏連素 ，既可發(fā)揮抗體的效應(yīng)功能，又能發(fā)揮細(xì)胞黏附功能。
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