18醫(yī)藥基因工程-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 dhfrˉ）株，并進(jìn)一步篩選獲得高產(chǎn)人紅細(xì)胞生成素的ＣＨＯ。 ? 早期制備是通過(guò) 誘導(dǎo)或重組誘導(dǎo) 天然或人工培養(yǎng)的人體細(xì)胞或血細(xì)胞產(chǎn)生 天然干擾素。把目的基因轉(zhuǎn)到已經(jīng)在臨床上使用的安全的活疫苗中，利用該活疫苗作為載體表達(dá)目的抗原基因，從而達(dá)到針對(duì)某種傳染病的免疫保護(hù)作用。⑵ 不含有內(nèi)含子的乙型肝炎病毒ＨＢ sＡ g 的基因 ?；蚬こ炭贵w在臨床上可發(fā)揮更多更重要的作用。 ? 單克隆抗體的定義 ：是由識(shí)別一種抗原決定蔟的細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的均一抗體，可視為 第二代抗體 ，具高度 特異性、均一性，且親和力強(qiáng)、效價(jià)高 ，在臨床上發(fā)揮了重要作用。 將抗體的Ｖ Ｈ 和Ｖ Ｌ 用連接肽連接，形成具有 抗原結(jié)合能力的單鏈抗體多肽，即所謂的單鏈抗體（Ｓ cＦ v）。 ? 雙功能抗體即 可以與靶位點(diǎn)結(jié)合 ，又可 將特定的活性分子導(dǎo)向特定部位 ，發(fā)揮其生物學(xué)功能，如殺死腫瘤細(xì)胞、發(fā)揮催化功能等。利用該模型已制備了多種類型的人單克隆抗體，如抗人表皮生長(zhǎng)因子受體的人源性抗體。 ? 反義ＲＮＡ可以人工合成，更多的是將目的ＤＮＡ以反方向插入載體通過(guò)反義表達(dá)載體產(chǎn)生。 ? 肽核酸保留了 與互補(bǔ)ＤＮＡ或ＲＮＡ雜交 的性能，親和力得到進(jìn)一步提高，同時(shí)，其化學(xué)和生物學(xué)穩(wěn)定性更強(qiáng)，不易被核酸酶和蛋白酶降解；從化學(xué)角度看，更易進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)。 ? 具有催化活性的 脫氧核酶 （ＤＮＡ zyme），是通過(guò)合成隨機(jī)寡核苷酸庫(kù) ，從中篩選到一個(gè)具有核酶活性的寡核苷酸。（圖１８－６） ３ .核酸疫苗的特點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： ⑴ 安全性好，沒(méi)有感染的危險(xiǎn) ； ⑵ 免疫效果好 ，核酸疫苗能在自身細(xì)胞中產(chǎn)生于自然抗原接近的外源性蛋白，能誘導(dǎo)產(chǎn)生類似自然抗原的免疫應(yīng)答； ⑶ 制備簡(jiǎn)單 ，只需對(duì)編碼抗原的基因進(jìn)行克?。? ⑷核酸疫苗的本質(zhì)是核酸分子，因而不同于蛋白質(zhì)和活疫苗，可以 在室溫條件下保存 ，不存在疫苗的冷藏和低溫運(yùn)輸問(wèn)題，從而保證ＤＮＡ疫苗的高效接種率； ⑸ 免疫應(yīng)答持久 ，外源基因的不斷表達(dá)可持續(xù)提供抗原。 目的基因?qū)氚屑?xì)胞之后， 或者 與細(xì)胞染色體整和，穩(wěn)定長(zhǎng)期表達(dá)導(dǎo)入基因， 或者 位于細(xì)胞染色體外，短暫地表達(dá)導(dǎo)入基因。但對(duì)正常細(xì)胞基本無(wú)影響?；蚪M兩端各有一個(gè)１００～１６０ bp的 反向末端重復(fù)序列（ＩＴＲ）， ５’末端是病毒的包裝信號(hào) ，ＩＴＲ和包裝信號(hào)是病毒基因組復(fù)制和包裝必不可少的順式功能元件，長(zhǎng)度不到１ kb，是病毒的基本結(jié)構(gòu)。然后雙鏈 siＲＡＮ與核酸酶結(jié)合形成 ＲＮＡ誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（ＲＩＳＣ）。 ２ .疫苗載體 核酸疫苗是通過(guò)疫苗載體 將抗原編碼基因?qū)霗C(jī)體而激發(fā)免疫 的。 ? 核酶具有特定的催化域和底物結(jié)合域。 ? 反義ＲＮＡ可以通過(guò)自動(dòng)合成儀，但其很易被降解，為提高其穩(wěn)定性，親和力，降解靶核酸的能力以及其他性能，由此催生了第一代反義核酸藥物硫代磷酸脫氧寡核苷酸（ＰＳ－ＯＤＮ）。 １ .反義ＲＮＡ ? 機(jī)理： 利用 反義ＲＮＡ可以與 mＲＮＡ結(jié)合 形成互補(bǔ)雙鏈，阻斷 核酸蛋白體同 mＲＮＡ的結(jié)合，從而 抑制 了 mＲＮＡ翻譯成蛋白質(zhì)的過(guò)程。（圖１８－５） ? 通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠，可使小鼠產(chǎn)生人源性單克隆抗體 。但親和力低，穩(wěn)定性不高，實(shí)際應(yīng)用有很大局限性。７０％序列來(lái)自人源抗體，３０％序列來(lái)自鼠源抗體；可保留抗體的特異性結(jié)合位點(diǎn)，也可減弱其免疫原性。 ? Ｖ區(qū)以外的部分稱為 框架區(qū)（ＦＲ）， 其氨基酸序列相對(duì)保守，不與抗原分子直接結(jié)合，可維持抗體的空間構(gòu)型。 ? 優(yōu)點(diǎn)： ⑴ ＣＨＯ乙型肝炎疫苗產(chǎn)生的ＨＢ sＡ g的糖基化與血液ＨＢＶ顆粒的糖基化一樣； ⑵ 產(chǎn)生的ＨＢ sＡ g顆粒是以自然方式裝配的，而不需要其他的化學(xué)處理； ⑶ 裝配的２２ nmＨＢ sＡ g顆粒最后會(huì)被分泌到培養(yǎng)基中，不需要裂解細(xì)胞，簡(jiǎn)化了純化步驟； ⑷ 成本不高，有利于那些負(fù)擔(dān)不起現(xiàn)有的高價(jià)疫苗的患者。疫苗的制備一般選定具有免疫原性的乙型肝炎表面抗原基因片段，將起插入表達(dá)載體，并引入到與表達(dá)載體相對(duì)應(yīng)的宿主細(xì)胞，構(gòu)成重組體。指用病原體的組分制成的疫苗，包括病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和細(xì)菌的脫毒毒素蛋白，其中病毒的結(jié)構(gòu)蛋白是指病毒組成成分中能引起人體對(duì)病毒顆粒產(chǎn)生免疫反應(yīng)且不致病的蛋白組分；細(xì)菌脫毒毒素蛋白是利用ＤＮＡ重組技術(shù)在基因水平上對(duì)細(xì)菌的毒素蛋白進(jìn)行脫毒所獲得的基因工程疫苗。 干擾素是一類多功能細(xì)胞因子，按其結(jié)構(gòu)和功能的差異可以分為三類， 即干擾素 α 、 干擾素 β和干擾素 γ。 二 .基因工程人紅細(xì)胞生成素 １ .人紅細(xì)胞生成素的組成和生物活性 成熟的人紅細(xì)胞生成素（ＥＰＯ） 是一種由１６５個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，多肽結(jié)構(gòu)中由４個(gè)半胱氨酸形成２條二硫鍵，相對(duì)分子質(zhì)量為３４ １０ ３ ＥＰＯ又稱 促紅細(xì)胞生成素 或 紅細(xì)胞生產(chǎn)刺激因子 ，是一類造血生長(zhǎng)因子，刺激和調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞的生成，維持外周血紅細(xì)胞處于正常水平。而對(duì)于胰島功能完全消失的 Ⅰ 型糖尿病患者，不注射胰島素就無(wú)法維持生命。 ３ .從蛋白藥物到核酸藥物 傳統(tǒng)藥物 是通過(guò)增加某些人體內(nèi)源性的 有益蛋白多肽 或者 破
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