18醫(yī)藥基因工程-資料下載頁
2025-01-01 14:56本頁面
【正文】 體 核酸疫苗是通過疫苗載體 將抗原編碼基因導入機體而激發(fā)免疫 的。導入方式有⑴ 裸ＤＮＡ直接注射到肌肉內； ⑵ 用脂質體包裹ＤＮＡ后在注射； ⑶ 將ＤＮＡ用基因槍注入體內； ⑷ 通過去毒的內生細菌引導ＤＮＡ進入體內。 疫苗載體是一種 穿梭質粒 載體，含有 真核表達系統(tǒng)的啟動子 ，以及用于真核細胞的 選擇標記 ；用于動物實驗的載體還含有在哺乳動物細胞中 復制的病毒復制區(qū) ；為提高疫苗的免疫原性，載體中還加入具有強烈佐劑作用的ＣＧ序列。 典型的核酸疫苗載體有 pcＤＮＡ３ .１ ，以及在此基礎上去掉病毒復制單位并用于雙宿主可用的卡那霉素抗性基因替換氨芐青霉素抗性基因和新霉素抗體基因的改建載體 pＶＡＸ１ 。（圖１８－６） ３ .核酸疫苗的特點 ? 優(yōu)點： ⑴ 安全性好，沒有感染的危險 ； ⑵ 免疫效果好 ，核酸疫苗能在自身細胞中產生于自然抗原接近的外源性蛋白，能誘導產生類似自然抗原的免疫應答； ⑶ 制備簡單 ，只需對編碼抗原的基因進行克?。? ⑷核酸疫苗的本質是核酸分子，因而不同于蛋白質和活疫苗，可以 在室溫條件下保存 ，不存在疫苗的冷藏和低溫運輸問題，從而保證ＤＮＡ疫苗的高效接種率； ⑸ 免疫應答持久 ，外源基因的不斷表達可持續(xù)提供抗原。 三 .ＲＮＡ干擾 １ .ＲＮＡ干擾現象 ＲＡＮ干擾（ＲＮＡ i） 是指對應于某種 mＲＮＡ的正義ＲＮＡ和反義ＲＮＡ組成的 雙鏈ＲＮＡ（ dsＲＮＡ） 分子使 mＲＮＡ發(fā)生特異性降解，導致其不能表達的轉錄后基因沉默（ＰＴＧＳ）現象。 ＲＮＡ i發(fā)揮作用包括兩個階段 ： ⑴起始階段 ：雙鏈ＲＮＡ分子進入細胞后被稱為 Ｄ icer的核酸酶切割為２１～２３個核苷酸長的 小分子干擾ＲＮＡ片段（ siＲＮＡ）。Ｄ icer 核酸酶屬于ＲＮ aseⅢ 家族，能夠特異識別雙鏈ＲＮＡ，產生的小片段ＲＮＡ的３‘端都有２個突出堿基。然后雙鏈 siＲＡＮ與核酸酶結合形成 ＲＮＡ誘導沉默復合體（ＲＩＳＣ）。 ⑵效應階段 ： siＲＡＮ打開雙鏈從而激活ＲＩＳＣ，激活的ＲＩＳＣ通過堿基配對與對應的 mＲＮＡ結合，并在距離 siＲＡＮ３’端１２個堿基的位置切割 mＲＮＡ。 同時， siＲＡＮ可作為引物并以 mＲＡＮ為摸板合成新的 dsＲＮＡ；這樣又進入上述循環(huán)，繼續(xù)對目的 mＲＮＡ進行切割，從而使目的基因沉默，產生ＲＮＡ i現象。（圖１８－７） 四 .基因治療 １ .基因治療的思想 基因治療 是將目的基因放進特定載體中導入靶細胞或組織，通過 替換或補償 引起疾病的基因，或者 關閉或抑制 異常表達的基因來克服疾病的治療方法。 目的基因導入靶細胞之后， 或者 與細胞染色體整和，穩(wěn)定長期表達導入基因， 或者 位于細胞染色體外，短暫地表達導入基因。 基因治療策略 ： ⑴ 通過導入正常基因的方法來修復缺陷基因的功能或者加強某些原有基因的功能； ⑵ 通過導入抗體，抗原或細胞因子的編碼基因到患者體內，改變患者免疫狀態(tài)，達到預防和治療疾病的目的。 ２ .基因治療的工作原理 ： ⑴離體法 ：也稱間接體外法，從機體內取出靶細胞進行體外培養(yǎng)，通過載體系統(tǒng)導入目的基因，獲得“基因工程化的細胞”，經過體外的擴增后輸回體內； ⑵直接體外法 ：直接將目的基因安裝于特定的真核載體導入人體內。 腺病毒廣泛存在，主要感染胃腸道和呼吸道病毒粒子為無囊膜二十面體結構，直徑為７０～９０ nm；基因組為雙鏈ＤＮＡ，約３６ kb?；蚪M兩端各有一個１００～１６０ bp的 反向末端重復序列（ＩＴＲ）， ５’末端是病毒的包裝信號 ，ＩＴＲ和包裝信號是病毒基因組復制和包裝必不可少的順式功能元件，長度不到１ kb，是病毒的基本結構。 ３ .重組人 p５３腺病毒基因治療藥物 ? 重組人 p５３腺病毒基因治療藥物 是我國也是世界上第一個獲得國家批準的基因治療藥物，是一種經過改造，具有感染活性的腺病毒顆粒，以注射液形式存在，主要用來 治療頭頸鱗癌，前列腺癌和非小細胞肺癌等。 ? 該腺病毒ＤＮＡ有載體和目的基因兩部分組成： ：稱為 p５３基因的抑癌基因； p５３蛋白是一個調節(jié)因子，半衰期甚短，而且極不穩(wěn)定，能調控細胞周期中的增殖細胞，能控制Ｇ ０ 或Ｇ １ 期細胞進入Ｓ期，從而抑制細胞的增殖。 ：載體源于腺病毒５的ＤＮＡ，可以有效地將 p５３基因轉入腫瘤細胞內，特異地引起腫瘤細胞程序性死亡或者抑制腫瘤細胞的活性。但對正常細胞基本無影響。而且該改造腺病毒在體內對細胞只發(fā)生一次感染，不能繁殖，安全性高。 思考題 １ .基因工程藥物包含哪些種類？ ２ .基因工程蛋白多肽藥物的生產方式有哪些？ ３ .核酸藥物有哪些類型，如何制成藥物？ ４ .基因工程抗體有哪些表現形式，各有何特點？ 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
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