18醫(yī)藥基因工程-資料下載頁
2025-01-01 14:56本頁面
【正文】 體 核酸疫苗是通過疫苗載體 將抗原編碼基因?qū)霗C(jī)體而激發(fā)免疫 的。導(dǎo)入方式有⑴ 裸ＤＮＡ直接注射到肌肉內(nèi)； ⑵ 用脂質(zhì)體包裹ＤＮＡ后在注射； ⑶ 將ＤＮＡ用基因槍注入體內(nèi)； ⑷ 通過去毒的內(nèi)生細(xì)菌引導(dǎo)ＤＮＡ進(jìn)入體內(nèi)。 疫苗載體是一種 穿梭質(zhì)粒 載體，含有 真核表達(dá)系統(tǒng)的啟動(dòng)子 ，以及用于真核細(xì)胞的 選擇標(biāo)記 ；用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的載體還含有在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中 復(fù)制的病毒復(fù)制區(qū) ；為提高疫苗的免疫原性，載體中還加入具有強(qiáng)烈佐劑作用的ＣＧ序列。 典型的核酸疫苗載體有 pcＤＮＡ３ .１ ，以及在此基礎(chǔ)上去掉病毒復(fù)制單位并用于雙宿主可用的卡那霉素抗性基因替換氨芐青霉素抗性基因和新霉素抗體基因的改建載體 pＶＡＸ１ 。（圖１８－６） ３ .核酸疫苗的特點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： ⑴ 安全性好，沒有感染的危險(xiǎn) ； ⑵ 免疫效果好 ，核酸疫苗能在自身細(xì)胞中產(chǎn)生于自然抗原接近的外源性蛋白，能誘導(dǎo)產(chǎn)生類似自然抗原的免疫應(yīng)答； ⑶ 制備簡單 ，只需對(duì)編碼抗原的基因進(jìn)行克?。? ⑷核酸疫苗的本質(zhì)是核酸分子，因而不同于蛋白質(zhì)和活疫苗，可以 在室溫條件下保存 ，不存在疫苗的冷藏和低溫運(yùn)輸問題，從而保證ＤＮＡ疫苗的高效接種率； ⑸ 免疫應(yīng)答持久 ，外源基因的不斷表達(dá)可持續(xù)提供抗原。 三 .ＲＮＡ干擾 １ .ＲＮＡ干擾現(xiàn)象 ＲＡＮ干擾（ＲＮＡ i） 是指對(duì)應(yīng)于某種 mＲＮＡ的正義ＲＮＡ和反義ＲＮＡ組成的 雙鏈ＲＮＡ（ dsＲＮＡ） 分子使 mＲＮＡ發(fā)生特異性降解，導(dǎo)致其不能表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默（ＰＴＧＳ）現(xiàn)象。 ＲＮＡ i發(fā)揮作用包括兩個(gè)階段 ： ⑴起始階段 ：雙鏈ＲＮＡ分子進(jìn)入細(xì)胞后被稱為 Ｄ icer的核酸酶切割為２１～２３個(gè)核苷酸長的 小分子干擾ＲＮＡ片段（ siＲＮＡ）。Ｄ icer 核酸酶屬于ＲＮ aseⅢ 家族，能夠特異識(shí)別雙鏈ＲＮＡ，產(chǎn)生的小片段ＲＮＡ的３‘端都有２個(gè)突出堿基。然后雙鏈 siＲＡＮ與核酸酶結(jié)合形成 ＲＮＡ誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（ＲＩＳＣ）。 ⑵效應(yīng)階段 ： siＲＡＮ打開雙鏈從而激活ＲＩＳＣ，激活的ＲＩＳＣ通過堿基配對(duì)與對(duì)應(yīng)的 mＲＮＡ結(jié)合，并在距離 siＲＡＮ３’端１２個(gè)堿基的位置切割 mＲＮＡ。 同時(shí)， siＲＡＮ可作為引物并以 mＲＡＮ為摸板合成新的 dsＲＮＡ；這樣又進(jìn)入上述循環(huán)，繼續(xù)對(duì)目的 mＲＮＡ進(jìn)行切割，從而使目的基因沉默，產(chǎn)生ＲＮＡ i現(xiàn)象。（圖１８－７） 四 .基因治療 １ .基因治療的思想 基因治療 是將目的基因放進(jìn)特定載體中導(dǎo)入靶細(xì)胞或組織，通過 替換或補(bǔ)償 引起疾病的基因，或者 關(guān)閉或抑制 異常表達(dá)的基因來克服疾病的治療方法。 目的基因?qū)氚屑?xì)胞之后， 或者 與細(xì)胞染色體整和，穩(wěn)定長期表達(dá)導(dǎo)入基因， 或者 位于細(xì)胞染色體外，短暫地表達(dá)導(dǎo)入基因。 基因治療策略 ： ⑴ 通過導(dǎo)入正?；虻姆椒▉硇迯?fù)缺陷基因的功能或者加強(qiáng)某些原有基因的功能； ⑵ 通過導(dǎo)入抗體，抗原或細(xì)胞因子的編碼基因到患者體內(nèi)，改變患者免疫狀態(tài)，達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。 ２ .基因治療的工作原理 ： ⑴離體法 ：也稱間接體外法，從機(jī)體內(nèi)取出靶細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過載體系統(tǒng)導(dǎo)入目的基因，獲得“基因工程化的細(xì)胞”，經(jīng)過體外的擴(kuò)增后輸回體內(nèi)； ⑵直接體外法 ：直接將目的基因安裝于特定的真核載體導(dǎo)入人體內(nèi)。 腺病毒廣泛存在，主要感染胃腸道和呼吸道病毒粒子為無囊膜二十面體結(jié)構(gòu)，直徑為７０～９０ nm；基因組為雙鏈ＤＮＡ，約３６ kb?；蚪M兩端各有一個(gè)１００～１６０ bp的 反向末端重復(fù)序列（ＩＴＲ）， ５’末端是病毒的包裝信號(hào) ，ＩＴＲ和包裝信號(hào)是病毒基因組復(fù)制和包裝必不可少的順式功能元件，長度不到１ kb，是病毒的基本結(jié)構(gòu)。 ３ .重組人 p５３腺病毒基因治療藥物 ? 重組人 p５３腺病毒基因治療藥物 是我國也是世界上第一個(gè)獲得國家批準(zhǔn)的基因治療藥物，是一種經(jīng)過改造，具有感染活性的腺病毒顆粒，以注射液形式存在，主要用來 治療頭頸鱗癌，前列腺癌和非小細(xì)胞肺癌等。 ? 該腺病毒ＤＮＡ有載體和目的基因兩部分組成： ：稱為 p５３基因的抑癌基因； p５３蛋白是一個(gè)調(diào)節(jié)因子，半衰期甚短，而且極不穩(wěn)定，能調(diào)控細(xì)胞周期中的增殖細(xì)胞，能控制Ｇ ０ 或Ｇ １ 期細(xì)胞進(jìn)入Ｓ期，從而抑制細(xì)胞的增殖。 ：載體源于腺病毒５的ＤＮＡ，可以有效地將 p５３基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，特異地引起腫瘤細(xì)胞程序性死亡或者抑制腫瘤細(xì)胞的活性。但對(duì)正常細(xì)胞基本無影響。而且該改造腺病毒在體內(nèi)對(duì)細(xì)胞只發(fā)生一次感染，不能繁殖，安全性高。 思考題 １ .基因工程藥物包含哪些種類？ ２ .基因工程蛋白多肽藥物的生產(chǎn)方式有哪些？ ３ .核酸藥物有哪些類型，如何制成藥物？ ４ .基因工程抗體有哪些表現(xiàn)形式，各有何特點(diǎn)？ 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1