18醫(yī)藥基因工程(存儲版)
【正文】 其分為 反義ＲＮＡ，反義ＤＮＡ，肽核酸和核酶。 ? 反義ＤＮＡ與 mＲＮＡ結(jié)合后還可以誘導(dǎo)ＲＮ aseＨ的產(chǎn)生，降解ＤＮＡ－ＲＮＡ復(fù)合物中的ＲＮＡ，從而大大縮短了 mＲＮＡ的半衰期?？捎糜谒幬锏拈_發(fā)，抑制特定基因的表達(dá)。 二 .核酸疫苗 １ .核酸疫苗的工作方式 核酸疫苗又稱 基因疫苗或ＤＮＡ疫苗 ，是利用基因重組技術(shù)將編碼抗原的基因裝入載體，然后直接導(dǎo)入動物體內(nèi)，通過機(jī)體細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)合成蛋白，產(chǎn)生的蛋白作為抗原誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，即通過細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)產(chǎn)生抗體，從而達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。Ｄ icer 核酸酶屬于ＲＮ aseⅢ 家族，能夠特異識別雙鏈ＲＮＡ，產(chǎn)生的小片段ＲＮＡ的３‘端都有２個突出堿基。 腺病毒廣泛存在，主要感染胃腸道和呼吸道病毒粒子為無囊膜二十面體結(jié)構(gòu)，直徑為７０～９０ nm；基因組為雙鏈ＤＮＡ，約３６ kb。而且該改造腺病毒在體內(nèi)對細(xì)胞只發(fā)生一次感染，不能繁殖，安全性高。 基因治療策略 ： ⑴ 通過導(dǎo)入正常基因的方法來修復(fù)缺陷基因的功能或者加強(qiáng)某些原有基因的功能； ⑵ 通過導(dǎo)入抗體，抗原或細(xì)胞因子的編碼基因到患者體內(nèi)，改變患者免疫狀態(tài)，達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。 三 .ＲＮＡ干擾 １ .ＲＮＡ干擾現(xiàn)象 ＲＡＮ干擾（ＲＮＡ i） 是指對應(yīng)于某種 mＲＮＡ的正義ＲＮＡ和反義ＲＮＡ組成的 雙鏈ＲＮＡ（ dsＲＮＡ） 分子使 mＲＮＡ發(fā)生特異性降解，導(dǎo)致其不能表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默（ＰＴＧＳ）現(xiàn)象。該寡核苷酸含一個由１５個核苷酸組成的催化域，兩側(cè)是７～８個核苷酸的臂，與目標(biāo)ＲＮＡ互補(bǔ)配對。 ４ .核酶 ? 核酶 是一類具有催化活性的ＲＮＡ分子，具有核苷酸水解活性 ,可特異性剪切ＲＮＡ分子， 相當(dāng)于ＲＮＡ酶 。通過這些載體可用于研發(fā)新型，高特異性和高效的反義治療藥物，在治療艾滋病和麻疹以及惡性腫瘤方面起到了一定作用。 ５ .基因工程抗體的產(chǎn)生 ⑴ 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng) ⑵ 酵母表達(dá)系統(tǒng) ⑶ 哺乳動物表達(dá)系統(tǒng) ⑷ 植物表達(dá)系統(tǒng) ⑸ 昆蟲表達(dá)系統(tǒng) 第四節(jié) 核酸類藥物 一 .反義核酸藥物 ? 反義核酸 是一些人工合成的單鏈反義分子，可以通過堿基互補(bǔ)原則與被感染細(xì)胞內(nèi)的某個靶標(biāo) mＲＮＡ或ＤＮＡ結(jié)合，抑制或封閉該基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，或切割 mＲＮＡ使其喪失功能。 ? 將人細(xì)胞受體或黏附分子與抗體的恒定區(qū)（主要是Ｆ c片段）的Ｎ段連接，形成 免疫黏連素 ，既可發(fā)揮抗體的效應(yīng)功能，又能發(fā)揮細(xì)胞黏附功能。其大小僅為完整抗體的１／６，免疫原性弱，藥物動力學(xué)優(yōu)于Ｆ ab片段和完整抗體，能有效到達(dá)完整抗體無法達(dá)到的靶部位。 ? 單克隆抗體在臨床中的問題 ：⑴單克隆抗體具有 免疫原性 ；⑵雜交瘤制備的單克隆抗體在人體內(nèi)的半衰期只有５～６h，不利于藥效發(fā)揮作用；⑶吸收差，抗體相對分子質(zhì)量大，很難通過血管進(jìn)入細(xì)胞間隙，大大降低治療效果；⑷生產(chǎn)復(fù)雜，價格較高。 第三節(jié) 基因工程抗體 一 .抗體的結(jié)構(gòu) ? 抗體分子是由４條多肽鏈組成的四聚體，即由 ２條相同的輕鏈（Ｌ）和２條相同的重鏈（Ｈ） 組成，重鏈之間以及輕鏈之間通過二硫鍵連接，呈Ｙ字型結(jié)構(gòu)（圖１８－２）。⑶在酵母細(xì)胞中 終止ＨＢ sＡ g轉(zhuǎn)錄的ＤＮＡ序列。 ２ .重組乙型肝炎疫苗 ? 乙型肝炎的定義 ：由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）引起的、以肝為主要病變并可累及多器官損害的一種傳染病。 ? 利用基因工程生產(chǎn)干擾素： ； ； mＲＮＡ，反轉(zhuǎn)錄成 cＤＮＡ； ，導(dǎo)入大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)可產(chǎn)生大量干擾素； 。經(jīng)過一系列細(xì)胞培養(yǎng)和蛋白質(zhì)純化等工藝制備過程，產(chǎn)生有生物學(xué)活性的重組人ＥＰＯ。（圖１８ — １） ３ .基因工程胰島素的生產(chǎn)方式 主要有兩種生產(chǎn)方式 ： ，分別表達(dá)胰島素Ａ鏈和Ｂ鏈，再分別提取和純化產(chǎn)生的Ａ鏈和Ｂ鏈，最后利用化學(xué)方法使兩條鏈之間形成二硫鍵，從而得到胰島素。 ? 我國共有２２種基因工程藥物和疫苗，其中４種為具有自主知識產(chǎn)權(quán)的”一類“新藥，進(jìn)入臨床研究的大約有１５０種，銷售收入超過３億人民幣。 動植物生物反應(yīng)器 為基因工程藥物的開發(fā)帶來美好的前途。 ? 從１９８２年最早的基因工程藥物－－胰島素上市到2023年底，已經(jīng)有１００多種基因工程藥物通過審查并上市，另外還有３００多種基因工程藥物進(jìn)入二期及三期臨床實驗，涉及治療１５０多種疾病。 ? 基因工程藥物生產(chǎn)的過程與其他基因工程產(chǎn)品的基本原理是相通的， 基本過程 都包括了載體構(gòu)建，工程菌或細(xì)胞培養(yǎng)，目的產(chǎn)物的分離純化與鑒定等。 真核生物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) ，利用離體培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞和脊椎動物（如哺乳動物和鳥類）細(xì)胞表達(dá)蛋白多肽類藥物。 ? 在2023年，超過８０種基因工程藥物獲準(zhǔn)在美國和歐盟使用，７５０中正在進(jìn)行臨床實驗，市場份額超過１５０億美元。 ? 胰島素是經(jīng)過 去掉信號肽序列 后形成 胰島素原 ，去掉連接序列 后剩下的Ａ鏈和Ｂ鏈通過二硫鍵結(jié)合，形成了胰島素。 ? 方法 ：通過將 編碼人紅細(xì)胞生成素的基因 裝入哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染二氫葉酸還原酶缺陷的ＣＨＯ細(xì)胞（ＣＨＯ－
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