基因工程的工具酶(存儲版)
【正文】 POH POHOHOHOHOH連接酶連接酶連接酶 堿性磷酸酶2 P i寄主修復(fù)缺口載體自連或產(chǎn)生二具體等 [γ32P]ATP ATP 5’ P OH 3’ 5’ 32P OH 3’ 3’ HO P 5’ 3’ HO 32P 5’ I II 5’ P OH3’ 5’ HO OH3’ 5’ P OH 3’ 3’ HO P 5’ 3’ HO OH5’ 3’ HO P 5’ 堿性磷酸酶 (I)與磷酸激酶 (II)活性 磷酸激酶的交換反應(yīng) T4 多聚核苷酸激酶 1. 催化反應(yīng)類型 1) 激酶活性（ 5’ 磷酸化酶）：可將 ATP中的 γ位的磷酸基轉(zhuǎn)移到 ssDNA， dsDNA和 RNA分子的 5’ 羥基端，在這反應(yīng)過程中可有兩種方式進(jìn)行（ ） ⅰ .轉(zhuǎn)移反應(yīng)； ⅱ .交換反應(yīng) 2) 3’ 磷酸酶活性（ pH 56） 2. 用途 1) 5’ 端末端標(biāo)記 2) 分子克隆過程中以獲得 5’ 磷酸基末端，便于連接酶反應(yīng) 核酸酶 SI的特性 這是一種從米曲霉（ Aspergillus oryzae）中分離的可以降解單鏈 DNA或 RNA的外切酶 。 ? 常用于標(biāo)記探針的標(biāo)識物： 同位素 ： 32P , 35S , 3HdNTP等； 非同位素 ：地高辛 dNTP ，生物素 dNTP。 。 :47:2411:47:24January 23, 2023 ? 1意志堅強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 :47:2411:47Jan2323Jan23 ? 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 2023年 1月 23日星期一 11時 47分 24秒 11:47:2423 January 2023 ? 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 , January 23, 2023 ? 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 :47:2411:47Jan2323Jan23 ? 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 :47:2411:47:24January 23, 2023 ? 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 分類 ? 基因組 DNA探針；病毒 DNA等 ? cDNA探針（最常用） ? 寡核苷酸探針： 1050bp ? RNA探針 探針的標(biāo)記物 ? 理想的標(biāo)記物： 敏感度高；特異性強(qiáng)；不影響探針分子的主要理化特性；標(biāo)記、檢測方法簡單、保存時間長；對環(huán)境無污染、對人體無損害；價格低廉。 3 ’ AAAAAAAA A A A A A A A A5 ’ T T T T T T T T TAAAAAAAAT T T T T T T T T5 ’ T T T T T T T T T3 ’ AAAAAAAA Taq DNA聚合酶和 PCR 5’ 3’ 變性 3’ 5’ 5’ 3’ 引物 3’ 5’ 復(fù)性 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 引物 3’ 5’ 5’ 3’ 延伸 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 總結(jié) 1. 堿性磷酸酶 2. 核酸外切酶 3. 核酸酶 S1（ nuclease S1 ） 4. DNase 5. RNase 6. T4多聚核苷酸激酶 7. 末端轉(zhuǎn)移酶（ terminal transferase） 其他 DNA修飾酶 堿性磷酸酶的特性 從 細(xì)菌 中分離的堿性磷酸酶簡稱 BAP（ Bacterial Alkaline Phosphatase），從 小牛腸 中分離的簡稱 CAP（ Calf Alkaline Phosphatase） .其主要功能是將 DNA或RNA5′端的磷酸切除。 Klenow片段 Klenow片段 大腸桿菌聚合酶 I全酶經(jīng) 枯草桿菌蛋白酶 處理后產(chǎn)生的大片段酶分子，它仍然有 5′→3′ 的聚合酶活性和 3′→ 5 ′ 的核酸外切酶活性，但失去了 5′→3′ 的外切酶活性。它是一種多功能性的酶，包括 3種不同的酶活力： A. 5′ 3′聚合酶活性 以雙鏈 DNA為模板，催化單核苷酸結(jié)合到引物的 3′末端，并不斷延伸。使用時只須將銜接物和目的片段的 5′ 端用 多核苷酸激酶 處理使之磷酸化，然后用 T4DNA連接酶進(jìn)
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