【正文】 ２ .基因治療的工作原理 ： ⑴離體法 ：也稱間接體外法，從機(jī)體內(nèi)取出靶細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過(guò)載體系統(tǒng)導(dǎo)入目的基因，獲得“基因工程化的細(xì)胞”，經(jīng)過(guò)體外的擴(kuò)增后輸回體內(nèi)； ⑵直接體外法 ：直接將目的基因安裝于特定的真核載體導(dǎo)入人體內(nèi)。針對(duì)不同目的基因的脫氧核酶已經(jīng)在體外和體內(nèi)發(fā)生了酶學(xué)反應(yīng)。 ２ .反義ＤＮＡ ? 反義ＤＮＡ的定義 ：也稱反義寡核苷酸或反義脫氧核苷酸，是一種人工合成的，能與 mＲＮＡ互補(bǔ)的，用于抑制翻譯的短小反義核酸分子。對(duì)于殺傷缺少相應(yīng)表面抗原的腫瘤細(xì)胞有一定意義，可減少腫瘤的免疫逃逸。 三 .基因工程抗體的種類 １ .單克隆抗體的人源化 為了解決鼠源抗體的免疫原性問(wèn)題，應(yīng)改造抗體，構(gòu)建人－鼠嵌合抗體和人源化抗體。 ? 利用酵母細(xì)胞表達(dá)ＨＢ sＡ g存在 缺點(diǎn) ：⑴酵母細(xì)胞不能分泌ＨＢ sＡ g 顆粒；⑵酵母細(xì)胞對(duì)ＨＢ sＡ g 蛋白的糖激化與哺乳動(dòng)物的不同，使得獲得的酵母ＨＢ sＡ g 可能具有與血液ＨＢ sＡ g 不同的免疫原性； ⑶在酵母中裝配２２nmＨＢ sＡ g 顆粒不穩(wěn)定；⑷酵母細(xì)胞產(chǎn)生的 ＨＢ sＡ g需要化學(xué)方法處理才能與血液的ＨＢ sＡ g相同，在這過(guò)程中可能改變ＨＢ sＡ g分子的結(jié)構(gòu)，從而減?。龋?sＡ g抗原性。 四、基因工程疫苗 疫苗的定義 ：由 滅活或減毒 的 病原體 做成的可預(yù)防相應(yīng)病原物引起疾病的藥物，通過(guò)接種人或動(dòng)物在其體內(nèi)建立抗感染免疫反應(yīng)而產(chǎn)生保護(hù)作用。 。 ２ .從基因工程到蛋白質(zhì)工程 隨著技術(shù)的進(jìn)步，人們通過(guò)蛋白質(zhì)工程可獲得修改了氨基酸序列的蛋白質(zhì)或多肽。 ? 基因工程藥物 是將藥物蛋白或多肽的編碼基因通過(guò)特定的受體細(xì)胞中，通過(guò)受體生物或者細(xì)胞表達(dá)出藥物蛋白或多肽，最后將其純化并制成藥劑的過(guò)程。 ? 至１９７６年第一個(gè)以基因工程制藥為對(duì)象的美國(guó)Ｇ enentech公司成立以來(lái)，有藥物進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)的生物技術(shù)公司已有約５００個(gè)。由于糖基化的問(wèn)題，目前只利用脊椎動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)來(lái)生產(chǎn)人紅細(xì)胞生成素，其糖基化特性與人體中自然產(chǎn)生的糖基化特性最相近。 。 ? 在臨床上，抗體可用于 抗腫瘤、抗感染、抗器官移植排斥反應(yīng)、抗血栓形成和解毒 ，以及 構(gòu)建獨(dú)特型疫苗、治療自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)疾病 ，此外還可用于 體外診斷和發(fā)揮體內(nèi)藥物導(dǎo)向作用 。 ２ .小分子抗體 為了解決穿透性問(wèn)題，對(duì)抗體改造，保留抗原結(jié)合位點(diǎn)，成為小分子抗體，分為下面５種： ab抗體 抗體的Ｆ ab片段由重鏈的Ｖ區(qū)和Ｃ m區(qū)與輕鏈以二硫鍵相連，能發(fā)揮抗體的抗原結(jié)合功能，大小為完整抗體的１／３。將小鼠的全套抗體基因敲除掉，同時(shí)將人的大部分輕鏈和重鏈基因插入到小鼠的染色體中，當(dāng)用抗原刺激小鼠時(shí)就可產(chǎn)生人源性抗體。以 ２－氨基乙基甘氨酸為骨架 ，４種堿基為側(cè)鏈，堿基通過(guò)亞甲碳基與骨架相連，保持與天然核酸中相鄰堿基以及堿基與骨架間相近的鍵數(shù)目，相鄰堿基間間隔６個(gè)鍵，堿基與骨架間為２～３個(gè)鍵。 典型的核酸疫苗載體有 pcＤＮＡ３ .１ ，以及在此基礎(chǔ)上去掉病毒復(fù)制單位并用于雙宿主可用的卡那霉素抗性基因替換氨芐青霉素抗性基因和新霉素抗體基因的改建載體 pＶＡＸ１ 。 ：載體源于腺病毒５的ＤＮＡ，可以有效地將 p５３基因轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，特異地引起腫瘤細(xì)胞程序性死亡或者抑制腫瘤細(xì)胞的活性。 ⑵效應(yīng)階段 ： siＲＡＮ打開(kāi)雙鏈從而激活ＲＩＳＣ，激活的ＲＩＳＣ通過(guò)堿基配對(duì)與對(duì)應(yīng)的 mＲＮＡ結(jié)合，并在距離 siＲＡＮ３’端１２個(gè)堿基的位置切割 mＲＮＡ。 底物結(jié)合域 可通過(guò)堿基互補(bǔ)與靶序列結(jié)合，相當(dāng)于反義ＲＮＡ；而 催化域 可在特定位點(diǎn)剪切目的ＲＮＡ。 ? 反義ＲＮＡ在細(xì)胞核中與 mＲＮＡ結(jié)合后會(huì) 干擾其加工和剪切 ，如加帽和加 poly（Ａ）尾，還會(huì) 干擾 mＲＮＡ轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì) 。 將兩種不同抗體的Ｖ Ｈ 區(qū)和Ｖ Ｌ 區(qū)通過(guò)連接肽（５～１０個(gè)氨基酸）連接，形成“雜交”的單鏈抗體稱作雙體抗體（ diabody），也稱雙特異性抗體。 ? 抗體分子含有多個(gè)功能區(qū)，除Ｖ區(qū)外，每一條輕鏈含有１個(gè) 保守區(qū)（Ｃ區(qū)） Ｃ Ｌ ，每一個(gè)重鏈含有３個(gè)保守區(qū)（Ｃ Ｈ１ 、Ｃ Ｈ２ 、Ｃ Ｈ ３ ）。重組體像一個(gè)加工廠，可以表達(dá)、加工、生產(chǎn)出乙型肝炎表面抗原，即得到基因工程疫苗。干擾素α 含有２３種不同的亞型，干擾素 β和干擾素 γ都只有１種亞型。 ２ .胰島素的結(jié)構(gòu) ? 胰島素是一種由兩條多肽鏈（Ａ鏈和Ｂ鏈）組成的蛋白質(zhì)。 ２ .按照作用方式分類： 基因水平作用藥物，轉(zhuǎn)錄水平作用藥物和蛋白質(zhì)水平作用藥物。 第一節(jié) 基因工程藥 物的開(kāi)發(fā)狀況 一 .基因工程藥物的分類 １ .按照結(jié)構(gòu)組成不同分類： 蛋白多肽類藥物，基因工程疫苗和核酸類藥物三類。而對(duì)于胰島功能完全消失的 Ⅰ 型糖尿病患者，不注射胰島素就無(wú)法維持生命。 干擾素是一類多功能細(xì)胞因子，按其結(jié)構(gòu)和功能的差異可以分為三類， 即干擾素 α 、 干擾素 β和干擾素 γ。疫苗的制備一般選定具有免疫原性的乙型肝炎表面抗原基因片段，將起插入表達(dá)載體，并引入到與表達(dá)載體相對(duì)應(yīng)