獸藥殘留量的檢驗(yàn)要點(diǎn)(編輯修改稿)
2025-01-19 02:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 標(biāo)記物；底物溶液；反應(yīng)終止液 。 競爭性 ELISA檢測對蝦中氯霉素含量的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 3） 主要試劑： 氯霉素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 。 4） 主要儀器： 簡易的萃取設(shè)備 、 氮吹儀 、 離心機(jī)、 酶標(biāo)分析儀 。 競爭性 ELISA檢測對蝦中氯霉素含量的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 圖 42 酶標(biāo)儀 實(shí)驗(yàn)步驟 （ 1） 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 ① 從冰箱取出試劑盒 ， 將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液 、 濃縮萃取稀釋液 、 濃縮洗滌液 、 酶標(biāo)記物 、 底物溶液及微量測試孔條置于室溫下回溫 30 min。 ② 配制原倍萃取稀釋液及洗滌液：用蒸餾水將 10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別按 1:9的比例稀釋 。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 （ 2） 樣品制備 ① 將 3g蝦肉剪碎后放入 50mL帶塞離心管中 ， 加入 6mL乙酸乙酯 ， 用均質(zhì)機(jī)均質(zhì)約 1min， 再震蕩約 30s。 ② 離心 （ 3000rpm， 10 min） ， 取 2mL上清液至玻璃管中 ，于 50℃ 下氮?dú)獯蹈?。 ③ 于上述玻璃管中加入正己烷 2mL， 先將殘余物完全溶解后 ，再加入 1mL原倍萃取稀釋液 ， 震蕩約 30s。 ④ 離心 （ 3000rpm， 10min） ， 用吸管吸去上層液及中間乳化層部分 ， 棄掉 ， 取下層液備用 。 ⑤ 若乳化現(xiàn)象較嚴(yán)重 ， 則先將大部分上層液取出后 ， 再將玻璃管置入 80℃ 水中 ， 隔水加熱約 5～ 10min。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 （ 3） 操作步驟 ① 取一定的微量測試孔條 ， 于適當(dāng)微孔中分別加入 100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液 。 ② 在另外的微孔中加入 100μL已完成前處理的樣品溶液 。 ③ 在每一微孔中加入 50μL酶標(biāo)記物 。 ④ 輕敲盤子四周 ， 使其充分混合后室溫下避光靜置溫育 1h。 ⑤ 甩掉反應(yīng)液 ， 再將洗液加滿每一微孔后甩掉 ， 重復(fù) 3次 。 ⑥ 最后一次甩掉洗液后 ， 在吸水紙上拍干 。 ⑦ 每一微孔中加入底物溶液 100μL， 輕敲盤子四周 。 ⑧ 于室溫下避光靜置溫育 20min。 ⑨ 于每一微孔中加入 100μL反應(yīng)終止液 ， 用酶標(biāo)儀于波長450nm下判讀 。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 結(jié)果處理 ① 所測得的標(biāo)準(zhǔn)吸光值和樣品吸光值 （ B） 除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn) （ 零標(biāo)準(zhǔn) ） 的吸光值 （ B0） 再乘以 100。 ② 以 B/B0的百分?jǐn)?shù)值為縱坐標(biāo) ， 以標(biāo)樣濃度 （ ppb） 為橫坐標(biāo) ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)半對數(shù)曲線 。 ③ 根據(jù)每個(gè)樣品的 B/B0的百分?jǐn)?shù)值就可從曲線上讀出相對應(yīng)樣品的濃度 （ ppb） 。 ④ 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度乘以樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算出樣品中氯霉素的實(shí)際濃度 ， 最后的結(jié)果用 “ μg/kg”單位表示 。 對蝦中氯霉素含量的競爭性 ELISA法檢測 注意事項(xiàng) ? 使用前先將取出置于室溫下 ， 回溫 30min。 回溫后 ， 取出所需微量測試孔條 ， 將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好 ，置于 4℃ 保存 。 ? 濃縮萃
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