微生物工程第一章菌種與種子擴大培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-01-15 15:41 本頁面
【文章內容簡介】 50 (leu , Thr , AEC r) g/l 基因的直接進化 (directed evolution) ? 突變 基因突變庫的建立 ? 篩選 基因突變庫的篩選 ? 基因復制與遺傳 步驟： 在分子水平上，對目標基因直接處理，然后通過高通量的篩選方法，提高目標蛋白的性能。 七 、 生產(chǎn)用菌種的保藏與復壯 （ 一 ） 、 菌種保藏 概念：根據(jù)菌種的生理生化特點 ， 人工地創(chuàng)造條件 ， 使其代謝活動處于不活潑狀態(tài) 。 不同情況 、 不同菌種采用不同方法 。 ?斜面低溫保藏法 （ 如 酵母菌 ） ?石蠟油封保藏法 （ 如 酵母菌 ） ?砂土保藏法 （ 如放線菌 ） ?硅膠保藏法 ?冷凍干燥保藏法 （ 如一般細菌 ） ?液氮超低溫凍結法（如真菌） （ 二 ） 、 防止菌種衰退的措施 （ 1） 、 菌種的衰退 ?發(fā)酵力的下降 ?繁殖力的下降 ?發(fā)酵產(chǎn)品的得率降低 （ 2） 、 衰退的原因 ?菌種保藏不妥 ?菌種生長的要求沒有得到滿足 遇到不利的條件 失去某些必要的條件 ?發(fā)生回復突變 （ 3） 、 防止衰退的方法 ?做好菌種的保藏工作 ?盡可能滿足生長條件 ?盡量減少傳代次數(shù) （ 4） 、 菌種的分離復壯 ?普通方法：稀釋平板法或平板劃線法分離單細胞菌落 ?芽孢桿菌：先將菌液沸水處理數(shù)分鐘 ， 再用平板進行分離 ?改變培養(yǎng)條件：如單細胞分離仍效果不佳，可考慮改變培養(yǎng)溫度條件，以利高產(chǎn)菌株生長而不利低產(chǎn)菌株生長 返回 第二節(jié) 種子的擴大培養(yǎng) 種子擴大培養(yǎng)的目的與要求 工業(yè)微生物的培養(yǎng)類型 種子制備的技術概要及種子制備實例 影響種子質量的因素 種子擴大培養(yǎng)是指將保存在砂土管 、 冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后 ， 再經(jīng)過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養(yǎng) ,最終獲得一定數(shù)量和質量的純種過程 。 這些純種培養(yǎng)物稱為種子 。 一、 種子擴大培養(yǎng)的目的與要求 種子擴大培養(yǎng)的概念 : 種子擴培的目的 ? 接種量的需要 ? 菌種的馴化 ? 縮短發(fā)酵時間、保證生產(chǎn)水平 種子的要求： ? 總量及濃度能滿足要求 ? 生理狀況穩(wěn)定，個體與群體 ? 活力強，移種至發(fā)酵后，能夠迅速生長 ? 無雜菌污染 二、工業(yè)微生物的培養(yǎng)類型 培養(yǎng)類型 靜置培養(yǎng) 通氣培養(yǎng) 種子擴大培養(yǎng) 液體培養(yǎng) 表層培養(yǎng) 固態(tài)培養(yǎng) 大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn) 嫌氣性發(fā)酵 好氣性發(fā)酵 酒精、丙酮、丁醇、乳酸等 固體培養(yǎng) 液體深層培養(yǎng) 載體培養(yǎng) 兩步法液體深層培養(yǎng) 返回 三、 影響種子質量的因素 （一）、種子制備的過程 （一）、種子制備的過程 實驗室階段： 不用種子罐，所用的設備為培養(yǎng)箱、搖床等實驗室常見設備，在工廠這些培養(yǎng)過程一般都在菌種室完成，因此現(xiàn)象地將這些培養(yǎng)過程稱為實驗室階段的種子培養(yǎng)。 生產(chǎn)車間階段 ： 種子培養(yǎng)在種子罐里面進行，一般在工程歸為發(fā)酵車間管理，因此形象地稱這些培養(yǎng)過程為生產(chǎn)車間階段 。 （二）、實驗室階段 培養(yǎng)物選擇的原則 目的：種子擴培到一定的量和質，根據(jù)菌種的特點最終的培養(yǎng)物可分為兩類： ? 對于不產(chǎn)孢子和芽胞的微生物 ——獲得一定數(shù)量和質量的菌體 對于不產(chǎn)芽孢和孢子的微生物，實驗室階段的種子擴培最終是獲得一定數(shù)量和質量的菌體，如谷氨酸的種子培養(yǎng)。 ? 獲得一定數(shù)量和質量的孢子 菌絲體培養(yǎng)步驟少，因而更容易獲得量和質穩(wěn)定的種子，但操作繁瑣。 ? 對于產(chǎn)孢子的微生物 ? 獲得一定數(shù)量和質量的菌絲體 便于操作，但需要更仔細的控制。 培養(yǎng)基選擇的原則 培養(yǎng)基的選擇應該是有利于菌體的生長，對孢子培養(yǎng)基應該是有利于孢子的生長 。 在原料方面，實驗室種子培養(yǎng)階段，規(guī)模一般比較小，因此為了保證培養(yǎng)基的質量，培養(yǎng)基的原料一般都比較精細。 起始接種物的傳代問題 ? 細菌 保藏斜面 → 活化斜面 ? 產(chǎn)孢子 保藏 → 母斜面 → 子斜面 目的 ：使菌種的傳代次數(shù)盡可能的少。
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