工業(yè)微生物菌種保藏技術(編輯修改稿)
2025-01-19 15:32 本頁面
【文章內容簡介】 需進行冷凍保藏，便于運輸。培養(yǎng)物的凍干過程冷凍真空干燥操作流程安培瓶配制保護劑滅菌菌種培養(yǎng)制備菌懸液分裝安培瓶洗凈烘干裝標簽加棉塞預凍真空干燥測定水分熔封管口檢查真空度包藏(三 )凍干菌種的保藏與再生1．保藏：冷凍干燥后的培養(yǎng)物在低于 5℃ 下保藏。較低的保藏溫度 (20～ 70℃) 對于培養(yǎng)物的長期穩(wěn)定更好。2．復蘇：(1)在超凈工作臺中用 70％酒精棉球擦洗安瓿，然后用砂輪在安瓿中銼一道溝。(2)用無菌紗布或無菌毛巾包好安瓿，然后用手掰開安瓿。(3)在安瓿中加入 ～ 1ml營養(yǎng)液體培養(yǎng)基，慢慢旋轉安瓿，使凍干菌種復水。然后將此轉接到一含有再生培養(yǎng)基的無菌試管中，或直接接種瓊脂斜面或涂布平板。(4)在指管中凍干的菌種通常為絮粉狀，可以將此直接振落入盛有 l～ 2ml液體培養(yǎng)基的試管中，輕輕振蕩 5～ l0min，然后用此懸液接種適宜的再生培養(yǎng)基。將菌種定期在新鮮瓊脂培養(yǎng)基上傳代，然后在一定的生長溫度下生長和保存的傳代保藏方法?？捎糜趯嶒炇抑腥舾删N的保藏。此法最為簡單和經濟，且不要求任何特殊的設備。但此方法易發(fā)生培養(yǎng)基干枯、菌體自溶、基因突變。 傳代培養(yǎng)法實驗原理：保藏的菌種通過斜面、穿刺或皰肉培養(yǎng)基（用于 厭氧細菌）培養(yǎng)好后，置 4C?冰箱中存放，定期 進行傳代培養(yǎng)、再存放。 可用膠塞代替棉塞或在斜面上覆蓋一層無菌液體 石蠟來進一步延長保存期。操作方法 斜面保藏法 將菌種轉接在適宜固體斜面培養(yǎng)基上，待其充分生長后，用牛皮紙將棉塞部分包扎好（棉塞換成膠塞效果更好），置4C?冰箱中包藏。 保藏時間依微生物的種類而定。霉菌、放線菌及芽孢菌保存 2－ 4個月移種一次，酵母菌間隔兩個月，普通細菌一個月，假單胞菌兩周傳代一次。 此法優(yōu)點是操作簡單、使用方便，缺點是保藏時間短、易被污染。液體石蠟保藏法 將無菌石蠟加在已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端 1CM為準，使菌種與空氣隔絕。 將試管直立，置低溫或室溫下保存。 此法實用且效果較好。霉菌、放線菌、芽孢菌可保藏兩年以上，酵母菌可保藏 1－ 2年，普通細菌也可保藏 1年左右。穿刺保藏法 按穿刺接種方式培養(yǎng)菌種，菌種長好后用膠塞封嚴，置4℃ 冰箱存放。礦物油中浸沒保藏將瓊脂斜面或液體培養(yǎng)物浸入礦物油中于室溫下保藏，此方法簡便有效。可用于絲狀真菌、酵母、細菌和放線菌的保藏。特別對難于冷凍干燥的絲狀真菌和難以在固體培養(yǎng)基上形成孢子的擔子菌等的保藏更為有效。浸沒保藏的操作要點是首先讓待保藏菌種在適宜的培養(yǎng)基上生長，然后注入經 170℃ 下滅菌 12h的礦物油，礦物油的用量以高出培養(yǎng)物 1cm為宜。以液體石蠟作為保藏方法時，應對需保藏的菌株預先作試驗。因為某些菌株在液體石蠟下生長還十分明顯，有些菌株如某些假絲酵母還會同化液體石蠟，也有的對液體石蠟保藏敏感。所有這些菌株都不能
醫(yī)療健康相關推薦
鄂ICP備17016276號-1