工業(yè)微生物菌種保藏技術(shù)(編輯修改稿)
2025-01-19 15:32 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 需進(jìn)行冷凍保藏，便于運(yùn)輸。培養(yǎng)物的凍干過程冷凍真空干燥操作流程安培瓶配制保護(hù)劑滅菌菌種培養(yǎng)制備菌懸液分裝安培瓶洗凈烘干裝標(biāo)簽加棉塞預(yù)凍真空干燥測定水分熔封管口檢查真空度包藏(三 )凍干菌種的保藏與再生1．保藏：冷凍干燥后的培養(yǎng)物在低于 5℃ 下保藏。較低的保藏溫度 (20～ 70℃) 對于培養(yǎng)物的長期穩(wěn)定更好。2．復(fù)蘇：(1)在超凈工作臺中用 70％酒精棉球擦洗安瓿，然后用砂輪在安瓿中銼一道溝。(2)用無菌紗布或無菌毛巾包好安瓿，然后用手掰開安瓿。(3)在安瓿中加入 ～ 1ml營養(yǎng)液體培養(yǎng)基，慢慢旋轉(zhuǎn)安瓿，使凍干菌種復(fù)水。然后將此轉(zhuǎn)接到一含有再生培養(yǎng)基的無菌試管中，或直接接種瓊脂斜面或涂布平板。(4)在指管中凍干的菌種通常為絮粉狀，可以將此直接振落入盛有 l～ 2ml液體培養(yǎng)基的試管中，輕輕振蕩 5～ l0min，然后用此懸液接種適宜的再生培養(yǎng)基。將菌種定期在新鮮瓊脂培養(yǎng)基上傳代，然后在一定的生長溫度下生長和保存的傳代保藏方法?？捎糜趯嶒炇抑腥舾删N的保藏。此法最為簡單和經(jīng)濟(jì)，且不要求任何特殊的設(shè)備。但此方法易發(fā)生培養(yǎng)基干枯、菌體自溶、基因突變。 傳代培養(yǎng)法實驗原理：保藏的菌種通過斜面、穿刺或皰肉培養(yǎng)基（用于 厭氧細(xì)菌）培養(yǎng)好后，置 4C?冰箱中存放，定期 進(jìn)行傳代培養(yǎng)、再存放。 可用膠塞代替棉塞或在斜面上覆蓋一層無菌液體 石蠟來進(jìn)一步延長保存期。操作方法 斜面保藏法 將菌種轉(zhuǎn)接在適宜固體斜面培養(yǎng)基上，待其充分生長后，用牛皮紙將棉塞部分包扎好（棉塞換成膠塞效果更好），置4C?冰箱中包藏。 保藏時間依微生物的種類而定。霉菌、放線菌及芽孢菌保存 2－ 4個月移種一次，酵母菌間隔兩個月，普通細(xì)菌一個月，假單胞菌兩周傳代一次。 此法優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、使用方便，缺點(diǎn)是保藏時間短、易被污染。液體石蠟保藏法 將無菌石蠟加在已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端 1CM為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕。 將試管直立，置低溫或室溫下保存。 此法實用且效果較好。霉菌、放線菌、芽孢菌可保藏兩年以上，酵母菌可保藏 1－ 2年，普通細(xì)菌也可保藏 1年左右。穿刺保藏法 按穿刺接種方式培養(yǎng)菌種，菌種長好后用膠塞封嚴(yán)，置4℃ 冰箱存放。礦物油中浸沒保藏將瓊脂斜面或液體培養(yǎng)物浸入礦物油中于室溫下保藏，此方法簡便有效?？捎糜诮z狀真菌、酵母、細(xì)菌和放線菌的保藏。特別對難于冷凍干燥的絲狀真菌和難以在固體培養(yǎng)基上形成孢子的擔(dān)子菌等的保藏更為有效。浸沒保藏的操作要點(diǎn)是首先讓待保藏菌種在適宜的培養(yǎng)基上生長，然后注入經(jīng) 170℃ 下滅菌 12h的礦物油，礦物油的用量以高出培養(yǎng)物 1cm為宜。以液體石蠟作為保藏方法時，應(yīng)對需保藏的菌株預(yù)先作試驗。因為某些菌株在液體石蠟下生長還十分明顯，有些菌株如某些假絲酵母還會同化液體石蠟，也有的對液體石蠟保藏敏感。所有這些菌株都不能
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