華中科技大學(xué)發(fā)酵工程第二章工業(yè)用微生物菌種(編輯修改稿)
2025-01-16 14:40 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 和建立快速靈敏專一的篩選方法，從隨機(jī)分離的菌落中篩選出所需的目的菌。 ? 技術(shù) 關(guān)鍵：產(chǎn)物合成條件的選擇與控制及相應(yīng)篩選方法的確定。 ? 隨機(jī)分離技術(shù)舉例 ? 抗生素產(chǎn)生菌的篩選 ? 藥理活性化合物產(chǎn)生菌的篩選 ? 生長因子產(chǎn)生菌的篩選 ? 多糖產(chǎn)生菌的篩選 高產(chǎn)培養(yǎng)基設(shè)計(jì)的幾個(gè)原則 ? 制備一系列的培養(yǎng)基 ， 其中有各種類型的養(yǎng)分成為生長限制因素； ? 使用一聚合或復(fù)合形式的生長限制養(yǎng)分； ? 避免使用容易同化的碳源或氮源 ， 防止分解代謝物阻遏； ? 確定含有所需的輔因子 （ Co2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+） ； ? 使 用 pH緩沖劑以減少 pH變化； ? 前體 、 促進(jìn)劑及抑制劑的采用 。 抗生素產(chǎn)生菌的篩選 ? 篩選模型： 試驗(yàn)菌 ? 篩選方法： 鋪菌法 復(fù)印平板法 ?液體培養(yǎng)篩選 ?抗藥性 篩選 篩選模型： 氨芐青霉素 和 β 內(nèi)酰胺酶 產(chǎn)生菌 （ 克雷白氏菌 ） 協(xié)同 I II 無試樣時(shí) （ 不含棒酸時(shí) ） ， I對(duì) II菌作用不大 有試樣時(shí) （ 含棒酸時(shí) ） ， I對(duì) II菌恢復(fù)藥效 ， 棒酸抑制水解酶活性 ? 固體培養(yǎng)篩選 試驗(yàn)菌 代表微生物類型 金黃色葡萄球菌 209p 革蘭氏陽性球菌 枯草桿菌 6633 革蘭氏陽性桿菌 大腸桿菌 革蘭氏陰性腸道細(xì)菌 恥垢分枝桿菌 607 結(jié)核桿菌 白色念珠菌 酵母狀真菌 青霉菌 絲狀真菌 藥理活性化合物產(chǎn)生菌的篩選 ? 藥理活性化合物是指能抑制人類代謝中某一個(gè)關(guān)鍵酶的微生物產(chǎn)物即酶抑制劑 ， 從而達(dá)到治療的目的 。 ? 篩選模型：目標(biāo)酶 生長因子產(chǎn)生菌的篩選 ? 篩選模型：營養(yǎng)缺陷型試驗(yàn)菌 ? 篩選方法：利用被分離的微生物產(chǎn)物能否促進(jìn)營養(yǎng)缺陷型試驗(yàn)菌生長 氨基酸產(chǎn)生菌的篩選 樣品 預(yù)處理 初篩 （ 除真菌 ） 在分離平板上生長獲得多個(gè)單菌落 復(fù)印平板 （ copy 法 ） 平板培養(yǎng) ， 其中有產(chǎn)生氨基酸 的菌落分泌氨基酸 對(duì)應(yīng)到 copy前相應(yīng) 位置 ， 找到目的菌落 再鋪上一層含營養(yǎng)缺陷型試驗(yàn)菌的瓊脂 培養(yǎng)后 產(chǎn)氨基酸菌落周圍有生長圈 目的菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)， 對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定 篩選產(chǎn)物含量高的菌株 多糖產(chǎn)生菌的篩選 ? 取樣特點(diǎn)：碳水化合物工業(yè)的廢棄物 ? 篩選方案：從菌落外觀判斷，選擇外觀呈粘液狀的菌落，然后根據(jù)液體培養(yǎng)測(cè)定多糖含量來篩選高產(chǎn)菌。 細(xì)菌分離：以乳酸菌為例 取未成熟的醬醪樣品 1g至無菌磨口瓶中 加麥芽汁至瓶口處 ， 封塞 ， 25℃ 培養(yǎng) 2448h 培養(yǎng)基中長出絹絲狀波動(dòng)物 ， 鏡檢 桿狀 ， 陽性染色 初步斷定乳酸菌 用選擇性培養(yǎng)基分批富集培
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