【正文】 代謝工程 發(fā)展基礎(chǔ) ? 相依網(wǎng)絡(luò) ：代謝網(wǎng)絡(luò)中各主節(jié)點(diǎn)集中于產(chǎn)物 ， 為了避免中間物的過(guò)量積累 ， 各分支的代謝流都必須保持平衡 ， 各分支的分流相等 ， 各節(jié)點(diǎn)的重要性相同 。 （二）分離篩選原理與技術(shù) 1. 篩選的指導(dǎo)思想 2. 分離篩選工作在實(shí)際中應(yīng)用的幾個(gè)方面 3. 新種分離篩選原理與技術(shù) 1. 篩選的兩種指導(dǎo)思想 ? 先分離純化，再結(jié)合工藝要求進(jìn)行篩選。 細(xì)菌分離：以乳酸菌為例 取未成熟的醬醪樣品 1g至無(wú)菌磨口瓶中 加麥芽汁至瓶口處 ， 封塞 ， 25℃ 培養(yǎng) 2448h 培養(yǎng)基中長(zhǎng)出絹絲狀波動(dòng)物 ， 鏡檢 桿狀 ， 陽(yáng)性染色 初步斷定乳酸菌 用選擇性培養(yǎng)基分批富集培養(yǎng) 23代 稀釋分離法分離單菌落 ， 培養(yǎng)基為含麥芽汁 、 CaCO3的瓊脂培養(yǎng)基 根據(jù)透明圈挑選菌落 性能測(cè)定 （ 鏡檢桿狀 ， 染色陽(yáng)性；乳酸紙層析鑒定 ） Rf值定性 （ 有機(jī)酸呈黃斑點(diǎn) ） 乳酸生成量測(cè)定 （ 滴定法 ） 放線(xiàn)菌的分離： 以產(chǎn)鏈霉素菌種的分離為例 （從退化菌種中篩選） 取工業(yè)發(fā)酵液 （ 含孢子 ） 樣品 1環(huán) 放入帶玻璃珠的裝有 10ml 無(wú)菌水的小三角瓶中 ， 搖勻 采用稀釋法制平板 ， 獲取單菌落 斜面保藏 高產(chǎn)菌恢復(fù) 根據(jù)高產(chǎn)菌的特點(diǎn) ， 選擇目的菌落 放大培養(yǎng) ， 發(fā)酵液性能測(cè)試 篩選模型：形態(tài)依據(jù) 真菌的分離篩選：以啤酒酵母的分離為例 取發(fā)酵液少許以 10倍稀釋成 101107 稀釋分離法 取 加入固體培養(yǎng)基鋪平皿 （ 2） 在麥芽汁固體培養(yǎng)基上 ， 25℃ 培養(yǎng) 4872h 形態(tài)篩選 根據(jù)正常株特點(diǎn)進(jìn)行挑選 ， 接種斜面?zhèn)溆? 純化 ， 采用平板分離法進(jìn)一步純化 ， 至少反復(fù)三次 ① 生成子囊孢子速度測(cè)定 ② 發(fā)酵力測(cè)定 性能測(cè)定 ③ 熱死溫度測(cè)定 ④ 凝集力測(cè)定 ⑤ 雙乙酰含量測(cè)定 菌種選育改良的具體目標(biāo) ? 提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量 ? 提高目標(biāo)產(chǎn)物的純度，減少副產(chǎn)物 ? 改良菌種性狀，改善發(fā)酵過(guò)程 ? 改變生物合成途徑，以獲得高產(chǎn)的新產(chǎn)品 發(fā)酵工業(yè)菌種改良方法 ? 常規(guī)育種 (誘變育種 ) ? 細(xì)胞工程育種 ? 基于代謝調(diào)節(jié)的育種技術(shù) ? 基因工程育種 ? 蛋白質(zhì)工程育種 ? 代謝工程育種 賴(lài)氨酸生產(chǎn)菌種的選育改良思路 ? 出發(fā)菌株 ：黃色短桿菌、谷氨酸棒桿菌、乳糖發(fā)酵短桿菌 ? 育種思路 —— 滲漏缺陷型的選育 —— 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的