華中科技大學(xué)發(fā)酵工程 第二章 工業(yè)用微生物菌種(文件)
【正文】 產(chǎn)生菌 （ 克雷白氏菌 ） 協(xié)同 I II 無(wú)試樣時(shí) （ 不含棒酸時(shí) ） ， I對(duì) II菌作用不大 有試樣時(shí) （ 含棒酸時(shí) ） ， I對(duì) II菌恢復(fù)藥效 ， 棒酸抑制水解酶活性 ? 固體培養(yǎng)篩選 試驗(yàn)菌 代表微生物類型 金黃色葡萄球菌 209p 革蘭氏陽(yáng)性球菌 枯草桿菌 6633 革蘭氏陽(yáng)性桿菌 大腸桿菌 革蘭氏陰性腸道細(xì)菌 恥垢分枝桿菌 607 結(jié)核桿菌 白色念珠菌 酵母狀真菌 青霉菌 絲狀真菌 藥理活性化合物產(chǎn)生菌的篩選 ? 藥理活性化合物是指能抑制人類代謝中某一個(gè)關(guān)鍵酶的微生物產(chǎn)物即酶抑制劑 ， 從而達(dá)到治療的目的 。 代謝工程 發(fā)展基礎(chǔ) ? 代謝網(wǎng)絡(luò)理論：是把細(xì)胞的生化反應(yīng)以網(wǎng)絡(luò)整體 ， 而不是孤立地來(lái)考慮 。 剛性節(jié)點(diǎn) ：其下游各分支的比例不易改變 。 （ 1）加速限速反應(yīng) （ 2）改變分支代謝途徑流向： 提高代謝分支點(diǎn)的某一分支代謝途徑酶系的活力，在與另外的分支代謝途徑的競(jìng)爭(zhēng)中占有優(yōu)勢(shì)，可以提高目的代謝末端產(chǎn)物的產(chǎn)量。 2)構(gòu)建新的代謝途徑 : 利用基因工程手段 ， 通過(guò)克隆少數(shù)基因?qū)⒃瓉?lái)細(xì)胞中無(wú)關(guān)的兩條代謝途徑橋連在一起 ， 形成新的代謝途徑 。 （ 2） 使原來(lái)的代謝途徑向前延伸 ， 可以利用新的原料生物合成代謝末端產(chǎn)物 。 ? 獨(dú)立網(wǎng)絡(luò) ：代謝網(wǎng)絡(luò)的主節(jié)點(diǎn)不集中 ， 可以通過(guò)對(duì)代謝的修飾來(lái)影響產(chǎn)物的產(chǎn)量 ,其對(duì)代謝修飾的應(yīng)答能力 ，取決于各節(jié)點(diǎn)的剛?cè)嵝约捌湮恢?。 ? 根據(jù)節(jié)點(diǎn)下游分支的可變程度 ， 節(jié)點(diǎn)分為： 柔性節(jié)點(diǎn) ： 解除一個(gè)分支的反饋抑制可提高該分支下游產(chǎn)物的產(chǎn)量 。 細(xì)菌分離：以乳酸菌為例 取未成熟的醬醪樣品 1g至無(wú)菌磨口瓶中 加麥芽汁至瓶口處 ， 封塞 ， 25℃ 培養(yǎng) 2448h 培養(yǎng)基中長(zhǎng)出絹絲狀波動(dòng)物 ， 鏡檢 桿狀 ， 陽(yáng)性染色 初步斷定乳酸菌 用選擇性培養(yǎng)基分批富集培養(yǎng) 23代 稀釋分離法分離單菌落 ， 培養(yǎng)基為含麥芽汁 、 CaCO3的瓊脂培養(yǎng)基 根據(jù)透明圈挑選菌落 性能測(cè)定 （ 鏡檢桿狀 ， 染色陽(yáng)性；乳酸紙層析鑒定 ） Rf值定性 （ 有機(jī)酸呈黃斑點(diǎn) ） 乳酸生成量測(cè)定 （ 滴定法 ） 放線菌的分離： 以產(chǎn)鏈霉素菌種的分離為例 （從退化菌種中篩選） 取工業(yè)發(fā)酵液 （ 含孢子 ） 樣品 1環(huán) 放入帶玻璃珠的裝有 10ml 無(wú)菌水的小三角瓶中 ， 搖勻 采用稀釋法制平板 ， 獲取單菌落 斜面保藏 高產(chǎn)菌恢復(fù) 根據(jù)高產(chǎn)菌的特點(diǎn) ， 選擇目的菌落 放大培養(yǎng) ， 發(fā)酵液性能測(cè)試 篩選模型：形態(tài)依據(jù) 真菌的分離篩選：以啤酒酵母的分離為例 取發(fā)酵液少許以 10倍稀釋成 101107 稀釋分離法 取 加入固體培養(yǎng)基鋪平皿 （ 2）
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