[高等教育]分子生物學在獲取中藥有效成分方面的研究與應用(編輯修改稿)
2024-10-16 14:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 境的惡化，藥材資源日趨枯竭。為保護利用這一珍稀中藥材， 增加產(chǎn)量，不少學者進行了石斛組織培養(yǎng)快速繁殖研究， 并取得了一定的進展 。但試管苗移栽成活率低， 產(chǎn)量低， 目前還沒能應用試管苗進行大面積栽培，不能滿足藥材市場的需求。因此石斛藥源一直處于相當 緊張狀態(tài)， 亟待解決[6,7]. 應用現(xiàn)代生物技術和現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術來解決才是長遠之計，本文以藥用石斛的分子生物學在提高其有效成分石斛堿這一方面作一介紹。 石斛堿為石斛主要藥用有效成分之一 ，目前已能進行人工合成， 但人工合成成本很高。因此石斛堿相關功能基因的獲得，為下一步通過基因工程大量生產(chǎn)石斛堿奠定基礎。研究人員利用理化因子定向誘導鐵皮石斛種胚原球莖已經(jīng)獲得穩(wěn)定的石斛堿缺失的突變體；運用 cDNA—AFLP技術、用差異顯示對突變體表達進行分析；以 mRNA—cD A克隆法構建鐵皮石斛差減cDNA文庫；以獲得的差異表達的mRNA的反義基因構建相應的載體， 轉(zhuǎn)化石斛，分析轉(zhuǎn)基因石斛的成分石斛堿的變化，對反義基因進行篩選 ，確定石斛堿功能基因； 并進行基閃的全長克隆，從而獲得石斛堿相關功能基因這些都為有效利用、開發(fā)、保護及開拓石斛資源創(chuàng)造條件。 Yang H H等從石斛中分離出了色素合成基因，并得到了高效表達。Kuehnle H 等用帶有植物表現(xiàn)Nos—NPrrⅡ基因和番木瓜病毒(PRV)膜蛋白(CP)基因的質(zhì)粒 pGA482 G G ／cpP RV4包被的微粒轟擊石斛的原球莖進行基因轉(zhuǎn)移實驗。通過4次雜交得到的近2 8 0個原球莖被粒子轟擊，轉(zhuǎn)化與否表現(xiàn)在組織是否變綠。培養(yǎng)基為 1／2 MS+2 ％ 蔗糖 +( 5 0 0—1 0 0 )mg ／L硫酸卡那霉素。PCR分析表明，由2次雜交得到了13株具有卡那霉素耐受性植株帶有 Nos — NPrr 基因，而只有1株帶有 PRVCP基因。這些結論表明用粒子轟擊的方法可以實現(xiàn)單子葉植物石斛的轉(zhuǎn)基因。此外，石斛屬植物轉(zhuǎn)基因組織和植物的篩選還可用熒光素酶基因做為標記。Chia等 用帶有 35S—luc嵌合基因質(zhì)粒包被的鎢顆粒( m) 轟擊石斛的原球莖，3周后，向轉(zhuǎn)化組織中 加入 1 mmoL／的熒光素，轉(zhuǎn)化細胞可通過低光視頻顯微鏡及其輔助圖像處理設備檢測生物性發(fā)光辨別。將轉(zhuǎn)化的組織切割下來培養(yǎng)生長，然后進行第2輪篩選。這樣經(jīng)過 3輪的生長和篩選后，表達熒光素酶的組織表明基因在該組織中轉(zhuǎn)化成功。同時Southern雜交也證明熒光素酶基因已結到植物基因組，該方法也可用于其他植物基 因轉(zhuǎn)化的檢測。除了用粒子轟擊的方法來進行石斛原
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