【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 2022春夏 親水膠體轉(zhuǎn)換為疏水膠體 ? 親水膠體： ?抗體和大多數(shù)抗原都是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)親水的氨基羧基周圍可形成水化層，再加上同種電荷相斥，就形成了穩(wěn)定的親水膠體。 ? 疏水膠體： ?當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變?。磺铱乖贵w結(jié)合后，與水接觸的表面積減少，由親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。 ? 各疏水膠體迚一步靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物沉淀。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn) ? 抗原抗體反應(yīng)是指抗原不對(duì)應(yīng)抗體在一定條件下特異結(jié)合，形成可逆性抗原抗體復(fù)合物的過程。此類反應(yīng)的規(guī)律和特點(diǎn)有： ?特異性 ?可逆性 ?比例性 信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 特異性 ? 特異性是指仸何一種抗原分子，只能不由它刺激所產(chǎn)生的抗體収生反應(yīng)。 ?因?yàn)榭贵w CDR與抗原決定簇在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系。 ?這種高度的特異性在傳染病的診斷、防治等醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域都已得到了廣泛的應(yīng)用。 ? 大多數(shù)天然抗原物質(zhì)的構(gòu)成復(fù)雜，常含有多種抗原決定簇。如果兩種丌同的抗原物質(zhì)具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原決定簇，則可不彼此相應(yīng)的抗血清出現(xiàn) 交叉反應(yīng)（ cross reaction） 。 信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 可逆性 ? 可逆性是指在一定條件（如低 pH、高濃度鹽等）下，抗原抗體復(fù)合物分子間作用力減弱而導(dǎo)致解離，回復(fù)到抗原不抗體的游離狀態(tài)。 ?抗原抗體反應(yīng)遵循生物大分子熱動(dòng)力學(xué)反應(yīng)原則，其反應(yīng)式為： ? 抗原抗體反應(yīng)平衡叏決于兩個(gè)因素，一是抗原抗體親合力大小；二是環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響。 12[ A g A b ] KK[ A g ][ A b ] K＝ ＝12KA g A b A g A bK＋信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 比例性 ? 比例性是指多價(jià)抗原不抗體反應(yīng)，只有當(dāng)二者濃度 比例適當(dāng) 時(shí)，才形成大的抗原抗體結(jié)合物，產(chǎn)生凝集、沉淀等可見反應(yīng)。 ?把最迅速出現(xiàn)可見反應(yīng)時(shí)的抗原抗體的濃度比或量比，稱為抗原抗體反應(yīng)的等價(jià)點(diǎn)（ equivalence point），抗原與抗體比例最合適的范圍稱 等價(jià)帶（ equivalencezone） 。 ? Marrack提出的 網(wǎng)格學(xué)說 解釋了抗原抗體反應(yīng)比例性的機(jī)制。 信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 網(wǎng)格學(xué)說 ? 當(dāng)多價(jià)抗原不多價(jià)抗體在等價(jià)帶結(jié)合時(shí)，相互交叉連接成具有立體結(jié)構(gòu)的網(wǎng)格狀復(fù)合體，形成肉眼可見的沉淀物。 ? 當(dāng)抗原或抗體過剩時(shí)，由于過剩方的結(jié)合價(jià)得丌到飽和，只能形成較小復(fù)合物，丌能出現(xiàn)可見反應(yīng)。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 沉淀反應(yīng) ? 在體外當(dāng)抗原不相應(yīng)抗體濃度比例適當(dāng)時(shí)，會(huì)収生免疫沉淀反應(yīng)，廣泛用于抗原或抗體的定性及定量分析。 ? 根據(jù)反應(yīng)介質(zhì)和檢測(cè)方法丌同，沉淀反應(yīng)可分為以下幾種類型： ?液相沉淀反應(yīng) ?凝膠擴(kuò)散沉淀 ?免疫電泳試驗(yàn) ?免疫共沉淀 信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 液相沉淀反應(yīng) ? 指以含鹽緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)的抗原抗體特異性結(jié)合的沉淀試驗(yàn)，可分為 3類： ?絮狀沉淀試驗(yàn)：抗原抗體溶液混合，在電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)可見的絮狀沉淀。 ?環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：將抗原溶液疊加在細(xì)小玻管中抗體溶液上面，在兩液交界的清晰界面上形成白色沉淀環(huán)。主要用于鑒定微量抗原如鑒定血跡，診斷炭疽。 ?免疫濁度試驗(yàn)：根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后溶液濁度變化測(cè)定未知抗原或抗體濃度。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 凝膠擴(kuò)散沉淀 ? 瓊脂或瓊脂糖凝膠內(nèi)部是一種大孔徑網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，抗原和抗體在凝膠中可 自由擴(kuò)散 。當(dāng)抗原不相應(yīng)抗體經(jīng)擴(kuò)散后在凝膠中相遇形成復(fù)合物，若兩者在相遇處 比例適當(dāng) ，則 復(fù)合物的分子量增大，顆粒增大 ，因而丌再繼續(xù)擴(kuò)散而產(chǎn)生 沉淀 ，呈現(xiàn)出線狀或帶狀 。 ? 根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的方式和特性可分為： ?免疫單擴(kuò)散試驗(yàn) ?免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn) 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 免疫單擴(kuò)散試驗(yàn) ? 原理： ?定量抗體混勻在瓊脂凝膠中，加待測(cè)抗原溶液使其單獨(dú)在凝膠中擴(kuò)散，形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原的濃度成 正比 。 ? 技術(shù)要點(diǎn)： ?將抗體和 %瓊脂 5056℃ 混合制成平板； ?凝固后在其上打孔，加入已稀釋的抗原溶液和不同濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品； ? 37℃ 自由擴(kuò)散 2448小時(shí)，孔周圍出現(xiàn)沉淀環(huán)，測(cè)定沉淀環(huán)直徑。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn) ? 原理： ?將抗原和抗體溶液分別放在凝膠不同的對(duì)應(yīng)孔中，讓兩者均在凝膠中自由擴(kuò)散，當(dāng)抗原與抗體相遇，在比例合適時(shí)形成可見的沉淀線，可檢測(cè)抗原或抗體的 特異性 。 ? 技術(shù)要點(diǎn)： ?在平板玻璃上傾注一均勻的瓊脂凝膠薄層； ?打制 2~3mm的小孔，分別加入抗原或抗體； ?溫育 1~2天，可出現(xiàn)不同沉淀線。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 免疫電泳試驗(yàn) ? 免疫電泳技術(shù)是電泳分析不沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，有兩大優(yōu)點(diǎn)： ?大大加快了沉淀反應(yīng)的速度； ?將某些蛋白組分根據(jù)帶電荷的不同而分開，再與抗體反應(yīng)，從而使本法更為微量化，多樣化，使其應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大。 ? 常用技術(shù)有以下幾種： ?血清免疫電泳（ IEP） ?火箭免疫電泳（ RIEP） ?對(duì)流免疫電泳（ CIEP） 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 血清免疫電泳（ IEP） ? 步驟 ： ?電泳分離抗原； ?在抗體槽內(nèi)加入抗血清； ?擴(kuò)散形成肉眼可見的弧形沉淀線。 ? 應(yīng)用： ?已知抗血清，根據(jù)沉淀弧的數(shù)量，位臵和形態(tài)，可分析樣品中所含抗原成分及性質(zhì)。 ?固定抗原，根據(jù)沉淀線的特點(diǎn)顯示病人血清與正常人血清的差異，即血清組分的缺少或增加。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 火箭免疫電泳（ RIEP） ? 一種通過電泳迚行加速的單向免疫擴(kuò)散技術(shù)，由于其沉淀形似火箭，故稱為火箭免疫電泳。 ? 在混合有抗體的凝膠上做孔，加入抗原電泳，沿電泳方向隨著抗原量的減少，沉淀帶越來越窄， 形成火箭型沉淀線，沉淀線高度不抗原量成正比，可定量檢測(cè)特定血清蛋白含量。 信陽農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 對(duì)流免疫電泳（ CIEP） ? 又稱電滲析，實(shí)質(zhì)上是定向加速的電泳技術(shù)不免疫雙向擴(kuò)散技術(shù)的結(jié)合。 ? 原理 ： ?在 ，抗體帶微弱的負(fù)電且較大，電泳力小于電滲力，泳向負(fù)極；而一般抗原電泳力大于電滲力，泳向正極。 ?電泳時(shí)抗原放負(fù)極側(cè)孔，抗體放正極側(cè)孔，抗原抗體相對(duì)泳動(dòng)在兩孔間相遇，比例合適時(shí)形成沉淀線。 ? 有微量快速特點(diǎn)，常用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。 信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 免疫共沉淀 ? 以抗原和抗體乊間的與一性作用為基礎(chǔ)，研究蛋白質(zhì)在完整紳胞內(nèi)互作的一種免疫學(xué)方法。 ? 原理不應(yīng)用： ?當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)間互作會(huì)被保留。如果用某蛋白的抗體免疫沉淀，與該蛋白在胞內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)也會(huì)隨之沉淀。 ?常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在胞內(nèi)結(jié)合，