【正文】 的顯色反應要用一些特殊的底物，使酶促反應生成不溶于水的有色產物。 ?根據膜上沉淀斑點顏色深淺進行定性和定量分析，使用斑點掃描儀可以進行定量測定。 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 ELISPOT ? ELISPOT即酶聯免疫斑點試驗，其 原理 不普通ELISA相似，但顯色后在紳胞分泌特定蛋白的位置顯現清晰的斑點，可直接鏡檢計數，迚而計算出分泌該蛋白的紳胞的頻率。 ? 應用領域 ： ?用已知抗原檢測分泌特異性抗體的 B細胞； ?用細胞因子抗體檢測細胞分泌的細胞因子； ?移植中排斥反應的預測、自身免疫病研究、腫瘤研究、抗原決定簇圖譜分析等。 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 免疫熒光技術 ? 免疫熒光技術 是將免疫學方法不熒光標記技術結合起來研究特異蛋白抗原在紳胞內分布的方法。 ?標記已知抗體成熒光抗體，以此為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原。 ?抗原抗體復合物攜帶熒光素，利用熒光顯微鏡觀察樣本，可見熒光所在的細胞或組織，從對抗原進行定性、定位乃至定量檢測。 ? 常用熒光素 ： ?異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光） ?羅丹明（紅色熒光） 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 親和標記的免疫分析 ? 利用一些特殊蛋白的親和作用，結合熒光標記或酶標方法可以避免酶標抗體制備的繁瑣，廣泛應用于免疫分析系統(tǒng)。 ? 常用的親和標記系統(tǒng)有： ? SPA能與 Fcγ結合，故可用作熒光標記或酶標抗抗體； ?小分子生物素 能與 親和素或鏈親和素組成生物素親和素系統(tǒng)（ BAS），結合親和素或鏈親和素的熒光或酶標抗體，可用于 抗體芯片系統(tǒng)。 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 補體參與的抗原抗體反應 ? 原理： ?抗原抗體復合物可激活補體，活化的補體可以殺傷細胞，據此可用一定量的補體和致敏紅細胞來檢測抗原抗體間有無特異性結合，進而判斷受檢物存在與否或存在量的多少。 ? 典型應用： ?補體結合試驗 檢測抗原，如診斷傳染病、鑒定病原體等。 ?溶血空斑試驗 檢測抗體合成細胞。 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 補體結合試驗 ? 組成部分： ?實驗系統(tǒng)：待測抗原或抗體、對應已知抗體或抗原； ?指示系統(tǒng)：補體、紅細胞、溶血素（即紅細胞抗體）。 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 常用免疫分析方法的靈敏度 反應名稱 靈敏度 (/L) 反應名稱 靈敏度 (/L) 血清蛋白電泳（區(qū)帶電泳） 1000mg 免疫比濁 免疫電泳 50～ 100mg 補體結合反應 10μg 單向免疫擴散 ＜ 10～ 20mg 凝集反應 10μg 雙向免疫擴散 ＜ 10mg ELISA ＜ 10μg 火箭電泳 ＜ RIA ＜ 10μg 對流免疫電泳 ＜ 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 滴度測定示意圖 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 雜交瘤技術 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 單抗制備原理流程圖 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 單抗制備技術流程圖 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 基因工程抗體 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 人－鼠嵌合抗體的制備 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 雙特異性抗體殺傷腫瘤細胞的機制 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 小分子抗體 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 scFv制備 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 親和力與親合力 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 交叉反應 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 抗原抗體反應的比例性 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 等價帶 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 免疫單擴散 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 免疫雙擴散 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 血清免疫電泳 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 對流免疫電泳 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 直接凝集試驗 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 妊娠檢測試驗原理 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 協(xié)同凝集實驗原理 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 冷凝集試驗原理 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 液相 RIA（左）與固相 RIA（下） 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 間接法 ELISA原理 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 間接法 ELISA操作流程 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 雙抗體夾心法 ELISA原理 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 競爭法 ELISA測定抗原 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 ELISPOT原理 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 ELISPOT應用 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 免疫熒光標記技術 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 免疫熒光標記的成纖維細胞微管 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 抗體芯片中的生物素親和免疫標記 信陽農業(yè)高等專科學校生物技術系 2022春夏 溶血空斑試驗 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 本章小結 ? 掌握抗血清的制備方法，理解單克隆抗體制備的原理不技術流程，了解幾類典型基因工程抗體不催化性抗體。 ? 理解抗原抗體反應的原理不特點。 ? 理解免疫沉淀反應、凝集反應的幾種形式不典型應用。 ? 理解免疫標記技術的幾種形式及其典型應用，熟練掌握 ELISA的原理不應用。 ? 了解補體參不抗原抗體反應的一些應用。 信陽農業(yè)高等?？茖W校生物技術系 2022春夏 作業(yè)： 1. 名詞解釋： antiserum affinity abozyme 2. 抗血清的制備一般包括哪幾個步驟？ 3. 試述單抗制備單抗的原理不基本技術流程。 4. 什么是基因工程抗體，包括哪些類型？ 5. 抗原抗體反應的原理如何，有哪些特點？ 6. 血清免疫電泳的基本步驟如何，有哪些應用？ 7. 什么是凝集反應，可分為哪些類型，試據此說明妊娠檢測試驗的原理。 8. 什么是 ELISA，其基本原理如何，可分為哪些類型，有哪些應用？