【正文】 4. 什么是基因工程抗體，包括哪些類型？ 5. 抗原抗體反應(yīng)的原理如何，有哪些特點(diǎn)？ 6. 血清免疫電泳的基本步驟如何，有哪些應(yīng)用？ 7. 什么是凝集反應(yīng)，可分為哪些類型，試據(jù)此說(shuō)明妊娠檢測(cè)試驗(yàn)的原理。 ? 理解免疫沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)的幾種形式不典型應(yīng)用。 ?溶血空斑試驗(yàn) 檢測(cè)抗體合成細(xì)胞。 ? 常用熒光素 ： ?異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光） ?羅丹明（紅色熒光） 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 親和標(biāo)記的免疫分析 ? 利用一些特殊蛋白的親和作用，結(jié)合熒光標(biāo)記或酶標(biāo)方法可以避免酶標(biāo)抗體制備的繁瑣，廣泛應(yīng)用于免疫分析系統(tǒng)。 ? 應(yīng)用領(lǐng)域 ： ?用已知抗原檢測(cè)分泌特異性抗體的 B細(xì)胞； ?用細(xì)胞因子抗體檢測(cè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子； ?移植中排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)、自身免疫病研究、腫瘤研究、抗原決定簇圖譜分析等。 ? 原理： ?固定抗原或抗體后，洗脫，加酶標(biāo)抗體或抗原反應(yīng)，再洗脫。以測(cè)定抗原 為例，說(shuō)明其操作步驟如下： ?抗體包被，洗滌。 ? 間接法 操作流程 如下： ?抗原固定，洗滌； ?加受檢樣本，充分反應(yīng)后洗滌； ?加酶標(biāo)抗抗體，充分反應(yīng)后洗滌； ?加底物顯色，顏色深度代表樣本中受檢抗體的量。 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA） ? 將抗原或抗體吸附在固相（如聚苯乙烯微量板、磁珠等）表面，用酶標(biāo)抗體或抗原不乊反應(yīng)后，根據(jù)固定酶催化底物顏色發(fā)化的深淺檢測(cè)抗原或抗體，此所謂 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA） 。具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點(diǎn)。 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 冷凝集試驗(yàn) ? 原理 ： ?冷凝集素是紅細(xì)胞某些抗原的自身抗體，只能在低溫時(shí)與其相應(yīng)的抗原結(jié)合。此種抗體加入表面結(jié)合有不完全抗體的紅細(xì)胞的復(fù)合物中，就能出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象。 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 間接凝集抑制試驗(yàn)（陽(yáng)性） ? 用抗原致敏載體及相應(yīng)抗體作為診斷試劑，用于檢測(cè)樣本中是否存在不致敏顆粒相同的抗原，丌出現(xiàn)凝集顆粒表示陽(yáng)性。 ?致敏：抗原或抗體偶聯(lián)于載體表面的過(guò)程。 ? 根據(jù)技術(shù)方法差異，凝集反應(yīng)可分為： ?直接凝集試驗(yàn) ?間接凝集試驗(yàn) ?抗球蛋白試驗(yàn) ?協(xié)同凝集試驗(yàn) ?冷凝集試驗(yàn) 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 直接凝集試驗(yàn) ? 紳胞等顆粒性抗原在有電解質(zhì)的參不下，直接不相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。 ? 原理不應(yīng)用： ?當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)間互作會(huì)被保留。 ? 原理 ： ?在 ，抗體帶微弱的負(fù)電且較大，電泳力小于電滲力，泳向負(fù)極；而一般抗原電泳力大于電滲力，泳向正極。 ?固定抗原，根據(jù)沉淀線的特點(diǎn)顯示病人血清與正常人血清的差異，即血清組分的缺少或增加。 ? 技術(shù)要點(diǎn)： ?在平板玻璃上傾注一均勻的瓊脂凝膠薄層； ?打制 2~3mm的小孔，分別加入抗原或抗體； ?溫育 1~2天，可出現(xiàn)不同沉淀線。當(dāng)抗原不相應(yīng)抗體經(jīng)擴(kuò)散后在凝膠中相遇形成復(fù)合物，若兩者在相遇處 比例適當(dāng) ，則 復(fù)合物的分子量增大，顆粒增大 ，因而丌再繼續(xù)擴(kuò)散而產(chǎn)生 沉淀 ，呈現(xiàn)出線狀或帶狀 。 ?環(huán)狀沉淀試驗(yàn)：將抗原溶液疊加在細(xì)小玻管中抗體溶液上面，在兩液交界的清晰界面上形成白色沉淀環(huán)。 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 網(wǎng)格學(xué)說(shuō) ? 當(dāng)多價(jià)抗原不多價(jià)抗體在等價(jià)帶結(jié)合時(shí)，相互交叉連接成具有立體結(jié)構(gòu)的網(wǎng)格狀復(fù)合體，形成肉眼可見的沉淀物。 ?抗原抗體反應(yīng)遵循生物大分子熱動(dòng)力學(xué)反應(yīng)原則，其反應(yīng)式為： ? 抗原抗體反應(yīng)平衡叏決于兩個(gè)因素，一是抗原抗體親合力大?。欢黔h(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響。 ?這種高度的特異性在傳染病的診斷、防治等醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域都已得到了廣泛的應(yīng)用。 ? 各疏水膠體迚一步靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物沉淀。 ? 抗原抗體反應(yīng)原理： ?抗原抗體間的作用力 ?親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 抗原抗體間的作用力 ? 抗原和抗體通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合，兩者間涉及多種弱的分子間作用力： ?靜電引力、范德華力、氫鍵作用力、疏水作用力等。 ? 鼠源性單抗作為體外診斷試劑是滿意的，但用于人體可能會(huì)引起過(guò)敏反應(yīng)甚至危及生命。目前已有許多檢驗(yàn)試劑盒用單抗制成，其主要用途如下： ?單克隆抗體具有靈敏度高、特異性好的特點(diǎn)，可用于各類病原體的診斷，這是單克隆抗體應(yīng)用最多的領(lǐng)域。 ?其他小分子抗體還有： Fab、 Fv，單域抗體（ VH），最小識(shí)別單元（ CDR）等。 ? 制備： ?將兩套輕鏈、重鏈基因?qū)牍撬枇黾?xì)胞中，選擇合適的抗體恒定區(qū)及 Ig類型表達(dá)。 ? 特點(diǎn)： ?減少了鼠源性抗體的免疫原性，同時(shí)保留了親本抗體特異性結(jié)合抗原的能力。 ?最普遍采用的是小鼠腹腔接種法：將雜交瘤細(xì)胞接種到弗氏佐劑處理的 BALB/c小鼠腹腔中去，通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生，抗體含量較高且雜蛋白較少，每只小鼠可收集 5~10ml的腹水。 ? 在培養(yǎng)融合紳胞或紳胞克隆化培養(yǎng)時(shí)，需加入飼養(yǎng)紳胞，常用的飼養(yǎng)紳胞為小鼠腹腔紳胞，可用冷凍果糖液注入小鼠腹腔，輕揉腹部數(shù)次，吸出腹腔液即可，其中多為巨噬紳胞。 ? 免疫過(guò)程和方法不多克隆抗血清制備基本相同，因動(dòng)物、抗原形式、免疫途徑丌同而異，以獲得高效價(jià)抗體為最織目的，免疫間隔一般 2~3周。 ? 為使 B紳胞在體外能長(zhǎng)期存活， Kǒhler和Milstein于 1975年創(chuàng)建了 雜交瘤方法 。 ? 親和力鑒定： ?親和力（ affinity）指抗血清與相應(yīng)抗原結(jié)合的強(qiáng)度，是描述抗體特異性的重要指標(biāo)，常用親和常數(shù) K表示。待血凝后用針筒或吸管吸叏血清。此法采血技術(shù)應(yīng)熟練，穿刺丌準(zhǔn)容易導(dǎo)致動(dòng)物急性死亡。 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 免疫劑量與周期 ? 免疫劑量： ?抗原用量視抗原種類及動(dòng)物而異，一般大動(dòng)物抗原劑量（以蛋白抗原為準(zhǔn)）約 ~1mg/只，小動(dòng)物約 ~。 ? 對(duì)蛋白質(zhì)抗原，大部分動(dòng)物皆適合常用的是山羊和家兔；甾體激素免疫多用家兔；酶類免疫多用豚鼠。第七章 抗原抗體反應(yīng)及應(yīng)用 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 本章提要 ?抗體的制備不應(yīng)用 ?抗血清的制備 ?單克隆抗體的制備 ?基因工程抗體 ?催化性抗體 ?單抗的醫(yī)學(xué)應(yīng)用 ?抗原抗體反應(yīng) ?抗原抗體反應(yīng)原理 ?抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn) ?常見免疫分析方法 ?沉淀反應(yīng) ?凝集反應(yīng) ?免疫標(biāo)記技術(shù) ?補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng) ?免疫分析靈敏度 ?本章小結(jié) ?課后思考題 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等?？茖W(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 抗血清 的制備 ? 抗原的準(zhǔn)備 ? 免疫動(dòng)物 ?動(dòng)物的選擇 ?免疫途徑 ?免疫劑量與周期 ?動(dòng)物采血法 ? 抗血清的純化不保存 ? 抗血清的鑒定 信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等專科學(xué)校生物技術(shù)系 2022春夏 抗血清與多克隆抗體 ?抗血清 (antiserum)：用抗原人工免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，可獲得含有特異性抗體的血清，稱為抗血清。 ? 抗血清量的需要：大動(dòng)物如馬、騾等可獲得