抗體的制備與應(yīng)用ppt課件(編輯修改稿)
2025-04-18 06:09 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 篩選： 免疫熒光 ELISA等 克隆化： 有限稀釋法 單個細(xì)胞顯微操作法 軟瓊脂培養(yǎng)法 配制方案： 雜交瘤細(xì)胞（（ 1～ 5） x106/ml) + 細(xì)胞凍存液(30%～ 40% 牛血清， 50%～ 60% RPMI1640培養(yǎng)液， 10%DMSO ) “慢凍 ” ： 分步冷凍， 30℃→ 70℃→ 液氮 “ 快融 ” ： 取出立即浸入 37℃ ～ 40℃ 水浴中，使其迅速融化、復(fù)蘇 5. 雜交瘤細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇 6. 單克隆抗體的生產(chǎn) 體內(nèi)： BALB/c小鼠體內(nèi)誘發(fā)含有單抗的腹水 體外：無血清培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)等 7. 單克隆抗體的純化 硫酸銨沉淀法 離子交換層析 A蛋白 Sepharose親和層析 單克隆抗體（ McAb）的優(yōu)缺點 ? 優(yōu)點： ? 成分、結(jié)構(gòu)均一，特異性強(qiáng)。一種 McAb分子的所有區(qū)域完全相同，只針對一種抗原決定基，避免了交叉反應(yīng)。 ? 效價高 ? 使用一種抗原免疫動物，可以獲得針對不同抗原決定基的不同特異性的 McAb。 ? 雜交瘤細(xì)胞能在體內(nèi)外無限繁殖、傳代，因此產(chǎn)量高，可連續(xù)生產(chǎn) ? 缺點： ? 制備 McAb成本昂貴，制備流程長，操作煩瑣，技術(shù)要求較高。 ? McAb為鼠源性，應(yīng)用于人體將產(chǎn)生人抗鼠抗體（ Human antimouse antibody, HAMA） , 治療中可能引起過敏反應(yīng)且療效大大降低。 ? 抗體為全 Ig，相對分子量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達(dá)不到有效殺傷濃度。 單克隆抗體在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （一）用作診斷試劑 ，區(qū)分不同分化 階段的淋巴細(xì)胞，鑒別淋巴細(xì)胞。 ，準(zhǔn)確診斷傳染病。 ，判 斷內(nèi)分泌的功能狀態(tài) （二）用作研究工具 1. 純化抗原 2. 分析和探查抗原結(jié)構(gòu) 3. 分析抗原決定基的功能 （三）用于疾病的治療 1. 抗細(xì)胞表面分子單抗，用于移植排斥反應(yīng)的防治 2. 抗細(xì)胞因子單抗用于自身免疫性疾病的治療 3. 抗腫瘤單抗用于腫瘤的導(dǎo)向治療 單克隆抗體用于免疫治療存在的問題 1. 單克隆抗體的特異性 由于腫瘤特異性抗原較少，缺乏對腫瘤有嚴(yán)格特異性的單抗，對正常組織有交叉反應(yīng) 2. 異種抗體反應(yīng) 鼠源性單抗用于人體，導(dǎo)致超敏反應(yīng) 3. 生產(chǎn)成本高 ,技術(shù)要求高，穩(wěn)定性差，難于普及應(yīng)用 第三節(jié) 基因工程抗體的制備與應(yīng)用 (geic engineering antibody， GeAb) ? 概念：利用基因工程及蛋白工程技術(shù)，對抗體基因進(jìn)行改造，按人們需要重新組裝抗體或抗體基因片段，并轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞后表達(dá)的規(guī)?；贵w。 ? 基本原理：利用分子生物學(xué)技術(shù)分離純化抗體基因或基因片段，在最大限度保留其抗原結(jié)合活性，降低其異源性的原則指導(dǎo)下，按臨床或科研需要對抗體基因進(jìn)行拼接組裝，在轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞表達(dá)，制備具有不同大小和不同功能的抗體。 基因工程抗體產(chǎn)生的時代背景 ? 單克隆抗體的毒副作用 ? 人雜交瘤技術(shù)未獲真正突破 :融合率低、建株難、不穩(wěn)定、產(chǎn)量低、人體不能隨意免疫 ? 現(xiàn)代免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的推動 ? 基因工程抗體的優(yōu)點 ?基因工程抗體的優(yōu)點： ? 易于獲得稀有抗體 。 ? 人抗鼠抗體反應(yīng)（ Human anti－ mouse antibody reaciton, HAMAR）低 。 ? 小分子抗體：滲透力強(qiáng)、 HAMAR低、親和性高、靶向性高、組織非特結(jié)合少等。 ?基因工程抗體的分類 ? 全抗體 ?（ 1）嵌和抗體（ chimeric antibody） ?（ 2）人源化抗體（ humanized antibody） ? 小分子抗體 ?（ 1） Fab ?（ 2） ScFv ?（ 3）單域抗體 ?（ 4）分子識別單位 其它抗體 ? 多價微型抗體 ? 雙鏈抗體（ diabody） ? 微型抗體 (minibody) ? 三鏈抗體 (triabody) ? 新型抗體分子 ? 新效能抗體 ? 雙特異性抗體（ bispecific antibody,BsAb） ? 胞內(nèi)抗體（ intrabody） ? 免疫黏連素（ immunoadhesin） ? 催化抗體（ catalytic antibody） 一、基因工程全抗體 基因工程全抗體研發(fā)的演變歷程 鼠抗體 100% 鼠源 鼠 /人
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