【文章內(nèi)容簡介】 tious hypodermal and hematopoietic necrosis virus（IHHNV）的核酸而得到少量dsDNA，克隆到Puc18，經(jīng)過限制性內(nèi)切酶分析。其中一個克隆，BQ31，用來構(gòu)建不同大小的DiGIIdUTP標(biāo)記的探針。在原位雜交中，探針使靶細(xì)胞形成顯著性標(biāo)記，特別是核內(nèi)Cowdry A型包含體。Arimoto等（1995）將中腸腺壞死桿狀病毒（Baculoviral midgut gland necrosis type viruses，BMHV）基因組DNA的部分BamhI酶切片段克隆。用P32CTP標(biāo)記制成探針，從而檢測病蝦的BMNV。結(jié)果證明脊尾白蝦（Exopalaemon carinicauda）在養(yǎng)殖對蝦暴發(fā)性流行病學(xué)上具有重要意義。Wongteerasupay等（1996）在患有白斑病的六種對蝦原位雜交中，Penaeus mondon baculovirus PmNOBII的DNA片段呈陽性雜交。九）點雜交（Dotblot hybridization）點雜交是將PCR產(chǎn)物固定到尼龍膜上或硝酸纖維素濾膜上，用標(biāo)記的與產(chǎn)物內(nèi)部部分或全長核苷酸系列互補的探針進行點雜交，將未雜交的探針洗掉，通過雜交斑點的放射自顯影，估計與樣品核酸雜交的量。根據(jù)放射性映象的強度確定每一斑點的探針濃度，并同一系列對照作比較以確定核酸的濃度。Wongteerasupay等（1996）用點雜交方法證明pmNOBII不與BP探針、IHHNVDNA探針和MBV探針雜交。Lo等（1996）用巢式PCR檢測蝦、蟹和其他節(jié)肢動物是否含WSSV時，在onestep PCR后，再用點雜交方法驗證PCR產(chǎn)物。核酸擴增后再進行探針雜交實驗，將是直接檢測對蝦病毒最敏感的方法。許多分子生物學(xué)技術(shù)都可以用來檢測對蝦的病毒，例如PTPCR等方法。采用分子生物學(xué)技術(shù)檢測對蝦病毒，雖然儀器費用和操作技術(shù)要求高，但是靈敏度高和特異性高。隨著分子生物學(xué)技術(shù)不斷的發(fā)展和完善，把它作為一種檢測對蝦病毒手段將會得到越來越普遍的使用。第五節(jié) 對蝦的病毒性疾病的防治引起對蝦大規(guī)模死亡的病害主要是病毒病，下面介紹幾種主要的病毒病但目前還沒有特效的治療方法，主要以防為主，預(yù)防方法參照本章第二節(jié)的步驟進行。一、對蝦桿狀病毒對蝦桿狀病毒（簡稱BP）是在甲殼動物中發(fā)現(xiàn)最早的一種病毒。BP呈桿狀，由囊膜和核衣殼組成，在宿主細(xì)胞核中形成可有多達100個大小不一的包含體。對蝦桿狀病毒感染肝胰腺和中腸上皮細(xì)胞核。BP對幼體的危害大，有發(fā)病急、死亡率高的特點，從無節(jié)幼體和糠蝦幼體開始，糠蝦期最為嚴(yán)重，累積死亡率達90%以上。到PL5期死亡率迅速下降，此時一般為亞急性或慢性發(fā)病，患病蝦攝食量減少，生長慢及體表和鰓的附著物增多。放養(yǎng)密度過高時，無論急性還是慢性病，都將造成對蝦大量死亡。 二、斑節(jié)對蝦桿狀病毒斑節(jié)對蝦桿狀病毒（簡稱MBV），最具代表性的有效種宿主是斑節(jié)對蝦。MBV主要感染肝胰腺和前中腸的上皮細(xì)胞核。MBV最先出現(xiàn)在蚤狀幼體Ⅱ期和糠蝦幼體期，主要致死階段在仔蝦期，致死率可達90%以上，成蝦可能帶毒，甚至感染程度嚴(yán)重，但只要養(yǎng)殖環(huán)境好，則對MBV感染耐受力強。MBV感染會引起攝食量減少、生長慢及體表和鰓的附著物增多，嚴(yán)重感染時，腺管大面積破壞或并發(fā)細(xì)菌感染，干擾和破壞宿主的消化與吸收功能，造成宿主大量死亡。另外，MBV感染還是造成斑節(jié)對蝦“公孫蝦”現(xiàn)象的原因之一。三、中腸腺壞死桿狀病毒中腸腺壞死桿狀病毒（簡稱BMNV）。BMNV主要感染肝胰腺和中腸上皮細(xì)胞核。BMNV對幼體危害大，也有發(fā)病急、死亡率高的特點，從無節(jié)幼體Ⅱ期和糠蝦期開始，仔蝦第10期最嚴(yán)重，累積死亡率達98﹪，第20期的仔蝦死亡率迅速下降。染病蝦苗通過腹部可見肝胰腺和中腸腺變白混濁，同時可能有革蘭氏陰性菌并發(fā)感染，其對成蝦的危害相對較小。四、肝胰腺細(xì)小病毒肝胰腺細(xì)小病毒（簡稱HPV）是1983年我國在中國對蝦中發(fā)現(xiàn)的第1種病毒。HPV主要感染肝胰腺和前中腸腺的上皮細(xì)胞核。其外部癥狀不特異，嚴(yán)重感染時，肝胰腺變白混濁，生長慢，厭食，體表和腮的附著物多，腹部肌肉混濁，易被弧菌或索蘭氏鐮刀菌等條件至病菌繼發(fā)感染。HPV很少單獨引起蝦的高死亡率。相對于成蝦來說，對幼蝦的影響更大。以上4種腸感染病毒有相似之處，在于它們對對蝦早期生活階段致死率高，而對成蝦的影響相對較小。五、傳染性皮下及造血組織壞死病毒傳染性皮下及造血組織壞死病毒（簡稱IHHNV）主要感染外胚層組織如鰓、表皮、前后腸上皮細(xì)胞、神經(jīng)索和神經(jīng)節(jié)，以及中胚層器官如造血組織、觸角腺、性腺、淋巴器官、結(jié)締組織和橫紋肌寫的宿主細(xì)胞核。成蝦對其有耐受性，但如養(yǎng)殖條件惡化也會致死?；技毙訧HHNV的幼蝦厭食，表皮上皮出現(xiàn)白色或淡黃色斑點，瀕死的斑節(jié)對蝦明顯變藍，腹部肌肉混濁，行為上它們會在池中慢慢升起，靜止一會兒翻滾，接著腹面朝上沉入池底，幾小時內(nèi)重復(fù)此過程知道筋疲力盡或被其它健康的蝦吃掉。而在南美白對蝦中常表現(xiàn)為典型的慢性病，所以又稱畸形發(fā)育不良綜合癥（RDS），病蝦額劍變形彎曲，觸角鞭節(jié)起皺，表皮粗糙，生長慢，處于慢性消耗狀態(tài)，導(dǎo)致個體小畸形。十、黃頭病毒黃頭病毒簡稱YHV，斑節(jié)對蝦YHV癥狀特異，幼蝦（生長50～70天）幾天內(nèi)攝食率驟增，1天內(nèi)完全停止攝食，第3天大量死亡，全池覆沒。瀕死蝦通體蒼白，頭胸部黃色腫大，鰓由白到淡黃到棕色，肝胰腺變?yōu)榈S色，所以有“黃頭病”之稱。YHV危害極大，在泰國和臺灣地區(qū)的養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦中引起嚴(yán)重蝦疫，印度尼西亞、馬來西亞、中國大陸、密西西比斑節(jié)對蝦也遭受嚴(yán)重打擊。YHV可感染斑節(jié)對蝦。刀額新對蝦和墨吉明對蝦對YHV在池中有抗性。十一、桃拉綜合癥病毒（簡稱TSV）南美白對蝦從仔蝦第1～14期到將入池時易發(fā)生TSV，因此，～5 g之間，更大的蝦也可能感染?？蓪⑵鋮^(qū)分為急性發(fā)病期和恢復(fù)(或慢性發(fā)病)期。在急性發(fā)病期，瀕死蝦全身淡棕紅，尾扇和后足明顯發(fā)紅(因此又稱“紅尾病”)，一般在蛻皮時死亡，暗示蛻皮對其發(fā)病機現(xiàn)的重要性，典型殼軟，空腸，幾乎全體表、所有附器、鰓、胃、后腸、食管的表皮上皮多病灶壞死。而在恢復(fù)(慢性發(fā)病)期，病蝦舉止與攝食和正常蝦一樣。養(yǎng)殖蝦累積死亡率80%～95%，而其幸存者存活率有的可達60%或更高。十二、白斑綜合癥病毒(簡稱WSSV)白斑綜合癥病毒至少有4個種株，它們是：①皮下及造血組織壞死桿狀病毒，在中國對蝦中發(fā)現(xiàn)，以稱中國病毒，引起對蝦暴發(fā)性流行??；②日本對蝦桿狀核病毒；③系統(tǒng)性外胚層和中胚層桿狀病毒，在斑節(jié)對蝦中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致紅體病或白斑?。虎馨装邨U狀病毒。WSSV引起系統(tǒng)感染，主要感染真皮、前后腸上皮、造血組織、結(jié)締組織、鰓、觸角腺、血細(xì)胞、神經(jīng)和橫紋肌等。急性感染引起蝦攝食量驟減，頭胸甲與腹節(jié)甲殼易于被揭開而不粘著真皮，～2 mm的白斑，可能是表皮非正常Ca2+鹽的沉積。在許多病例中，WSSV瀕死蝦顯示出通體淡紅色到棕紅色(因此又名“紅體病”)，可能由于表皮色素細(xì)胞擴散所致，有些也有少量白斑。WSSV毒力較強，起始癥狀出現(xiàn)3～10天內(nèi)累積死亡率達100%。WSSV的控制是一個系統(tǒng)而復(fù)雜的工程，涉及的方面很多。隨著對WSSV流行病的認(rèn)識的加深和新技術(shù)的發(fā)展，對WSSV的控制措施的操作性也逐漸加強?？傮w上來說WSSV的控制采取以“預(yù)防為主，治療為輔”的方針。1 消除生產(chǎn)中垂直傳播的傳染源WSSV垂直傳播的傳染源是攜帶WSSV的親蝦。目前已有眾多分子生物學(xué)方法，如PCR、核酸探針和免疫學(xué)方法，如單克隆抗體和多克隆抗體技術(shù)檢測WSSV，這些方法敏感性高、特異性強，因而在親蝦選育中可采用這些方法選育沒有攜帶WSSV的蝦作為親蝦，從而切斷WSSV的垂直傳播途徑，但在實際操作過程中，因不同種類蝦而有所不同。除此之外，建立無WSSV對蝦品種，這在我國大陸已能進行全人工繁殖的對蝦品種中是可行的，如中國明對蝦、日本囊對蝦、凡納濱對蝦等，而對于南方主要養(yǎng)殖品種之一的斑節(jié)對蝦目前尚無法實現(xiàn)。主要原因是斑節(jié)對蝦在我國尚沒有用于生產(chǎn)的大規(guī)模的全人工繁殖技術(shù)，因而無法建立無WSSV品系，因而急需加強開展斑節(jié)對蝦全人工繁殖的攻關(guān)研究。消除WSSV垂直傳播傳染源的另一種方法是建立抗WSSV的品種，由于WSSV弱毒株的產(chǎn)生和WSSV總體上致病力有所下降，從而為建立抗WSSV的對蝦品種成為可能（何建國等，2001）。2 切斷WSSV垂直傳播的傳染途徑育苗期仔蝦的WSSV檢測是目前切斷WSSV進入對蝦養(yǎng)殖期的主要手段。世界上多采用PCR檢測法，一般為套式PCR法，也有用核酸探針的檢測方法和單克隆抗體的檢測方法。雖然上述WSSV的檢測方法在國內(nèi)都有應(yīng)用，但普及率比較低，同時，由于檢測育苗期仔蝦數(shù)量的局限性，無法完全準(zhǔn)確地判斷一批數(shù)量較大的蝦苗是否完全攜帶WSSV的仔蝦，因而在一些國家也是常用的對蝦苗檢測和選購參考的手段。3 消除WSSV的水平傳播的傳染源和傳播途徑WSSV的宿主種類多，已發(fā)現(xiàn)和確定的有近40種，每一個種類在WSSV的水平傳播的傳染源。在WSSV暴發(fā)流行初始階段，主要是受WSSV保存宿主的影響，已知的保存宿主為養(yǎng)殖的對蝦野生的東方白蝦、長臂蝦、日本櫻蝦等和大量的蟹類。因而，在清塘?xí)r一定要將上述幾種生物消除掉。何建國等（1999a）在上萬畝蝦場的實驗結(jié)果，上述消除水平傳播傳染源的措施起到較好的養(yǎng)殖效果。與此同時，要切斷對蝦養(yǎng)殖過程中的WSSV的水平傳播途徑，在蝦塘進水口安裝過濾網(wǎng)，由蝦塘內(nèi)至外的濾網(wǎng)分別為60、20目絹網(wǎng)，這樣既可以不影響進排水，又可以防止較大型生物進入養(yǎng)殖池中，從而減少了WSSV的傳播。經(jīng)對蝦養(yǎng)殖實踐，效果還是比較理想。4加強水質(zhì)的監(jiān)控從WSSV潛伏感染到急性感染，一方面與對蝦個體大小有關(guān)，而另一個重要方面是受水體理化因子和大的氣候影響，這方面的研究可以通過MBV與理化因子的關(guān)系得到佐證。因而水質(zhì)的監(jiān)控在養(yǎng)殖過程中至關(guān)重要。日常監(jiān)測指標(biāo)應(yīng)包括鹽度、pH、溫度、SNH3N、NO2N等。溫度是病毒暴發(fā)流行的前提條件之一。也是在養(yǎng)殖過程中目前較難控制的因素。對斑節(jié)對蝦個體MBV病毒感染度與水體理化因子的關(guān)系研究揭示： Y=＋＋＋式中，Y為病毒感染度；X1為鹽度；X2為氨氮（181。gL1）；X3為硝酸氨（181。gL1）。養(yǎng)殖對蝦在低鹽、低氨氮、低亞硝酸氮的條件下，對蝦個體內(nèi)潛伏病毒數(shù)量會減少，而不易暴發(fā)病毒病。為防病應(yīng)提倡低鹽度養(yǎng)殖對蝦。同時，通過增加氧氣、改善水質(zhì)，減少氨氮和亞硝酸氮。本式是一個簡化公式，去除了pH與氨氮協(xié)同作用，促進氨氮毒性增強，故陰天、雨后、臺風(fēng)過后，水體pH的調(diào)節(jié)至關(guān)重要，一般1 。通過上述措施的處理，減少WSSV的暴發(fā)流行。5 采用低鹽度和增氧方法養(yǎng)殖。從抗WSSV來看，凡納濱對蝦養(yǎng)殖最適宜鹽度為1020‰，斑節(jié)對蝦養(yǎng)殖最適宜鹽度為28‰（未發(fā)表）。6 采用淡水添加式的養(yǎng)殖模式所謂淡水添加式的養(yǎng)殖模式，實際上是在對蝦養(yǎng)殖初始進海水，養(yǎng)殖過程中利用淡水添加，直至養(yǎng)成上市。至養(yǎng)成上市時對蝦養(yǎng)殖水鹽度以2～3為好，一方面切斷WSSV從海水傳染的水平傳播途徑，另一方面低鹽度養(yǎng)殖對蝦WSSV不易暴發(fā)流行。7 采用深池養(yǎng)殖對蝦深池（水深）受氣候等因子影響小，在遇到臺風(fēng)、雨水、陰天、寒潮等不利于對蝦養(yǎng)殖的環(huán)境下，水質(zhì)調(diào)控能力強，再配有充氧等措施，水質(zhì)環(huán)境相對穩(wěn)定。8 采用少量多次換水方式根據(jù)調(diào)查結(jié)果，一次換水量超過40%，導(dǎo)致WSSV暴發(fā)流行的可能性很大。國內(nèi)外也有大量的報道，蝦池一次換水量過大，加速患病蝦的死亡。一次換水量過大，較大地影響水體理化因子，容易引發(fā)WSS的暴發(fā)流行。根據(jù)生產(chǎn)上的經(jīng)驗，建議蝦池?fù)Q水采用少量多次的方式進行，一次換水量最好不要超過10%。9 在大規(guī)模對蝦養(yǎng)殖過程中，實行統(tǒng)一管理，減少WSSV的傳播研究結(jié)果表明，攜帶WSSV死亡對蝦在海水中WSSV失去感染活性的時間約為3 d。因此，養(yǎng)殖對蝦在暴發(fā)WSS后，實行毒池，殺死所有攜帶WSSV的生物，再過7 d后排水，所排之水和生物不再攜帶有活性WSSV，因而也就不具有傳播的作用。10 適當(dāng)采用水體消毒劑雖然水體消毒劑不能防止WSSV的傳播，但是有些消毒劑(如氯制劑)可殺死游離病毒、降低細(xì)菌和調(diào)節(jié)水質(zhì)的作用，有時也能減少氨氮，從而相對減少WSSV的暴發(fā)流行。11 采用過濾的相對獨立的對蝦養(yǎng)殖模式海水經(jīng)過過濾(有多種方式)和消毒后，一方面可以過濾掉大部分生物，包含了WSSV的宿主生物；另一方面改善了水質(zhì)，有利于WSSV的控制。同時，經(jīng)過消毒處理后，殺死所有WSSV的宿主生物，在經(jīng)過7 d的靜止，宿主攜帶的WSSV已經(jīng)不具有感染性。12 采用地膜養(yǎng)殖模式地膜養(yǎng)殖模式能較好的控制對蝦主要病害WSS的暴發(fā)流行。WSSV宿主范圍廣，包括養(yǎng)殖對蝦、野生海水蝦、蟹、橈足類、蝦蛄等甲殼動物，蟹類是WSSV宿主之一，可以攜帶WSSV過冬，傳染給第二年的養(yǎng)殖蝦，引發(fā)WSSV的暴發(fā)流行。蟹不能在地膜中寄居，而在養(yǎng)殖池沒有蟹類或很少蟹類，也就減少了WSSV的傳染源。因此地膜養(yǎng)蝦模式暴發(fā)WSS的機會就少一些。同時依賴于土質(zhì)的細(xì)菌性疾病也不會在地膜養(yǎng)蝦模式中發(fā)生，養(yǎng)殖池不存在老化問題，因而細(xì)菌病相對減少，從而提高了對蝦養(yǎng)殖的成功率。地膜可以完全隔絕池底對蝦池的不良影響，如果能配合水體處理或適當(dāng)換水，效果更為理想。十三、其它病毒另外，還有淋巴器官細(xì)小樣病毒、淋巴器官空泡化病毒、對蝦彈狀病毒、類呼腸孤病毒等。第六節(jié) 對蝦的細(xì)菌性疾病細(xì)菌性疾病在對蝦養(yǎng)殖中最為常見、而且是危害較大的一類疾病。與病毒性疾病不同，病原可以進行培養(yǎng)，在光學(xué)顯微鏡下一般可見，而且用化學(xué)藥物可以進行防治，從形態(tài)上，細(xì)菌可以分為球菌、桿菌和螺旋菌三大類。有些細(xì)菌是條件致病菌，即平時生活在海水中、底泥中或健康的蝦體上，并不導(dǎo)致對蝦發(fā)病，但在蝦體受傷或在環(huán)境條件對蝦不利時，就能侵入蝦體并引起疾病。一、紅腿?。t肢?。┎≡簢庥址Q“敗血病”。病原主要是副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、鰻弧菌（V．a(chǎn)nguilarum）和溶藻弧菌（V．a(chǎn)lginolyticus）癥狀與病理變化：本病是由弧菌侵入蝦體血液而引起的全身性疾