【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 tious hypodermal and hematopoietic necrosis virus（IHHNV）的核酸而得到少量dsDNA，克隆到Puc18，經(jīng)過(guò)限制性內(nèi)切酶分析。其中一個(gè)克隆，BQ31，用來(lái)構(gòu)建不同大小的DiGIIdUTP標(biāo)記的探針。在原位雜交中，探針使靶細(xì)胞形成顯著性標(biāo)記，特別是核內(nèi)Cowdry A型包含體。Arimoto等（1995）將中腸腺壞死桿狀病毒（Baculoviral midgut gland necrosis type viruses，BMHV）基因組DNA的部分BamhI酶切片段克隆。用P32CTP標(biāo)記制成探針，從而檢測(cè)病蝦的BMNV。結(jié)果證明脊尾白蝦（Exopalaemon carinicauda）在養(yǎng)殖對(duì)蝦暴發(fā)性流行病學(xué)上具有重要意義。Wongteerasupay等（1996）在患有白斑病的六種對(duì)蝦原位雜交中，Penaeus mondon baculovirus PmNOBII的DNA片段呈陽(yáng)性雜交。九）點(diǎn)雜交（Dotblot hybridization）點(diǎn)雜交是將PCR產(chǎn)物固定到尼龍膜上或硝酸纖維素濾膜上，用標(biāo)記的與產(chǎn)物內(nèi)部部分或全長(zhǎng)核苷酸系列互補(bǔ)的探針進(jìn)行點(diǎn)雜交，將未雜交的探針洗掉，通過(guò)雜交斑點(diǎn)的放射自顯影，估計(jì)與樣品核酸雜交的量。根據(jù)放射性映象的強(qiáng)度確定每一斑點(diǎn)的探針濃度，并同一系列對(duì)照作比較以確定核酸的濃度。Wongteerasupay等（1996）用點(diǎn)雜交方法證明pmNOBII不與BP探針、IHHNVDNA探針和MBV探針雜交。Lo等（1996）用巢式PCR檢測(cè)蝦、蟹和其他節(jié)肢動(dòng)物是否含WSSV時(shí)，在onestep PCR后，再用點(diǎn)雜交方法驗(yàn)證PCR產(chǎn)物。核酸擴(kuò)增后再進(jìn)行探針雜交實(shí)驗(yàn)，將是直接檢測(cè)對(duì)蝦病毒最敏感的方法。許多分子生物學(xué)技術(shù)都可以用來(lái)檢測(cè)對(duì)蝦的病毒，例如PTPCR等方法。采用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)對(duì)蝦病毒，雖然儀器費(fèi)用和操作技術(shù)要求高，但是靈敏度高和特異性高。隨著分子生物學(xué)技術(shù)不斷的發(fā)展和完善，把它作為一種檢測(cè)對(duì)蝦病毒手段將會(huì)得到越來(lái)越普遍的使用。第五節(jié) 對(duì)蝦的病毒性疾病的防治引起對(duì)蝦大規(guī)模死亡的病害主要是病毒病，下面介紹幾種主要的病毒病但目前還沒(méi)有特效的治療方法，主要以防為主，預(yù)防方法參照本章第二節(jié)的步驟進(jìn)行。一、對(duì)蝦桿狀病毒對(duì)蝦桿狀病毒（簡(jiǎn)稱BP）是在甲殼動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)最早的一種病毒。BP呈桿狀，由囊膜和核衣殼組成，在宿主細(xì)胞核中形成可有多達(dá)100個(gè)大小不一的包含體。對(duì)蝦桿狀病毒感染肝胰腺和中腸上皮細(xì)胞核。BP對(duì)幼體的危害大，有發(fā)病急、死亡率高的特點(diǎn)，從無(wú)節(jié)幼體和糠蝦幼體開(kāi)始，糠蝦期最為嚴(yán)重，累積死亡率達(dá)90%以上。到PL5期死亡率迅速下降，此時(shí)一般為亞急性或慢性發(fā)病，患病蝦攝食量減少，生長(zhǎng)慢及體表和鰓的附著物增多。放養(yǎng)密度過(guò)高時(shí)，無(wú)論急性還是慢性病，都將造成對(duì)蝦大量死亡。 二、斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒斑節(jié)對(duì)蝦桿狀病毒（簡(jiǎn)稱MBV），最具代表性的有效種宿主是斑節(jié)對(duì)蝦。MBV主要感染肝胰腺和前中腸的上皮細(xì)胞核。MBV最先出現(xiàn)在蚤狀幼體Ⅱ期和糠蝦幼體期，主要致死階段在仔蝦期，致死率可達(dá)90%以上，成蝦可能帶毒，甚至感染程度嚴(yán)重，但只要養(yǎng)殖環(huán)境好，則對(duì)MBV感染耐受力強(qiáng)。MBV感染會(huì)引起攝食量減少、生長(zhǎng)慢及體表和鰓的附著物增多，嚴(yán)重感染時(shí)，腺管大面積破壞或并發(fā)細(xì)菌感染，干擾和破壞宿主的消化與吸收功能，造成宿主大量死亡。另外，MBV感染還是造成斑節(jié)對(duì)蝦“公孫蝦”現(xiàn)象的原因之一。三、中腸腺壞死桿狀病毒中腸腺壞死桿狀病毒（簡(jiǎn)稱BMNV）。BMNV主要感染肝胰腺和中腸上皮細(xì)胞核。BMNV對(duì)幼體危害大，也有發(fā)病急、死亡率高的特點(diǎn)，從無(wú)節(jié)幼體Ⅱ期和糠蝦期開(kāi)始，仔蝦第10期最嚴(yán)重，累積死亡率達(dá)98﹪，第20期的仔蝦死亡率迅速下降。染病蝦苗通過(guò)腹部可見(jiàn)肝胰腺和中腸腺變白混濁，同時(shí)可能有革蘭氏陰性菌并發(fā)感染，其對(duì)成蝦的危害相對(duì)較小。四、肝胰腺細(xì)小病毒肝胰腺細(xì)小病毒（簡(jiǎn)稱HPV）是1983年我國(guó)在中國(guó)對(duì)蝦中發(fā)現(xiàn)的第1種病毒。HPV主要感染肝胰腺和前中腸腺的上皮細(xì)胞核。其外部癥狀不特異，嚴(yán)重感染時(shí)，肝胰腺變白混濁，生長(zhǎng)慢，厭食，體表和腮的附著物多，腹部肌肉混濁，易被弧菌或索蘭氏鐮刀菌等條件至病菌繼發(fā)感染。HPV很少單獨(dú)引起蝦的高死亡率。相對(duì)于成蝦來(lái)說(shuō)，對(duì)幼蝦的影響更大。以上4種腸感染病毒有相似之處，在于它們對(duì)對(duì)蝦早期生活階段致死率高，而對(duì)成蝦的影響相對(duì)較小。五、傳染性皮下及造血組織壞死病毒傳染性皮下及造血組織壞死病毒（簡(jiǎn)稱IHHNV）主要感染外胚層組織如鰓、表皮、前后腸上皮細(xì)胞、神經(jīng)索和神經(jīng)節(jié)，以及中胚層器官如造血組織、觸角腺、性腺、淋巴器官、結(jié)締組織和橫紋肌寫(xiě)的宿主細(xì)胞核。成蝦對(duì)其有耐受性，但如養(yǎng)殖條件惡化也會(huì)致死?；技毙訧HHNV的幼蝦厭食，表皮上皮出現(xiàn)白色或淡黃色斑點(diǎn)，瀕死的斑節(jié)對(duì)蝦明顯變藍(lán)，腹部肌肉混濁，行為上它們會(huì)在池中慢慢升起，靜止一會(huì)兒翻滾，接著腹面朝上沉入池底，幾小時(shí)內(nèi)重復(fù)此過(guò)程知道筋疲力盡或被其它健康的蝦吃掉。而在南美白對(duì)蝦中常表現(xiàn)為典型的慢性病，所以又稱畸形發(fā)育不良綜合癥（RDS），病蝦額劍變形彎曲，觸角鞭節(jié)起皺，表皮粗糙，生長(zhǎng)慢，處于慢性消耗狀態(tài)，導(dǎo)致個(gè)體小畸形。十、黃頭病毒黃頭病毒簡(jiǎn)稱YHV，斑節(jié)對(duì)蝦YHV癥狀特異，幼蝦（生長(zhǎng)50～70天）幾天內(nèi)攝食率驟增，1天內(nèi)完全停止攝食，第3天大量死亡，全池覆沒(méi)。瀕死蝦通體蒼白，頭胸部黃色腫大，鰓由白到淡黃到棕色，肝胰腺變?yōu)榈S色，所以有“黃頭病”之稱。YHV危害極大，在泰國(guó)和臺(tái)灣地區(qū)的養(yǎng)殖斑節(jié)對(duì)蝦中引起嚴(yán)重蝦疫，印度尼西亞、馬來(lái)西亞、中國(guó)大陸、密西西比斑節(jié)對(duì)蝦也遭受嚴(yán)重打擊。YHV可感染斑節(jié)對(duì)蝦。刀額新對(duì)蝦和墨吉明對(duì)蝦對(duì)YHV在池中有抗性。十一、桃拉綜合癥病毒（簡(jiǎn)稱TSV）南美白對(duì)蝦從仔蝦第1～14期到將入池時(shí)易發(fā)生TSV，因此，～5 g之間，更大的蝦也可能感染?？蓪⑵鋮^(qū)分為急性發(fā)病期和恢復(fù)(或慢性發(fā)病)期。在急性發(fā)病期，瀕死蝦全身淡棕紅，尾扇和后足明顯發(fā)紅(因此又稱“紅尾病”)，一般在蛻皮時(shí)死亡，暗示蛻皮對(duì)其發(fā)病機(jī)現(xiàn)的重要性，典型殼軟，空腸，幾乎全體表、所有附器、鰓、胃、后腸、食管的表皮上皮多病灶壞死。而在恢復(fù)(慢性發(fā)病)期，病蝦舉止與攝食和正常蝦一樣。養(yǎng)殖蝦累積死亡率80%～95%，而其幸存者存活率有的可達(dá)60%或更高。十二、白斑綜合癥病毒(簡(jiǎn)稱WSSV)白斑綜合癥病毒至少有4個(gè)種株，它們是：①皮下及造血組織壞死桿狀病毒，在中國(guó)對(duì)蝦中發(fā)現(xiàn)，以稱中國(guó)病毒，引起對(duì)蝦暴發(fā)性流行??；②日本對(duì)蝦桿狀核病毒；③系統(tǒng)性外胚層和中胚層桿狀病毒，在斑節(jié)對(duì)蝦中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致紅體病或白斑病；④白斑桿狀病毒。WSSV引起系統(tǒng)感染，主要感染真皮、前后腸上皮、造血組織、結(jié)締組織、鰓、觸角腺、血細(xì)胞、神經(jīng)和橫紋肌等。急性感染引起蝦攝食量驟減，頭胸甲與腹節(jié)甲殼易于被揭開(kāi)而不粘著真皮，～2 mm的白斑，可能是表皮非正常Ca2+鹽的沉積。在許多病例中，WSSV瀕死蝦顯示出通體淡紅色到棕紅色(因此又名“紅體病”)，可能由于表皮色素細(xì)胞擴(kuò)散所致，有些也有少量白斑。WSSV毒力較強(qiáng)，起始癥狀出現(xiàn)3～10天內(nèi)累積死亡率達(dá)100%。WSSV的控制是一個(gè)系統(tǒng)而復(fù)雜的工程，涉及的方面很多。隨著對(duì)WSSV流行病的認(rèn)識(shí)的加深和新技術(shù)的發(fā)展，對(duì)WSSV的控制措施的操作性也逐漸加強(qiáng)?？傮w上來(lái)說(shuō)WSSV的控制采取以“預(yù)防為主，治療為輔”的方針。1 消除生產(chǎn)中垂直傳播的傳染源WSSV垂直傳播的傳染源是攜帶WSSV的親蝦。目前已有眾多分子生物學(xué)方法，如PCR、核酸探針和免疫學(xué)方法，如單克隆抗體和多克隆抗體技術(shù)檢測(cè)WSSV，這些方法敏感性高、特異性強(qiáng)，因而在親蝦選育中可采用這些方法選育沒(méi)有攜帶WSSV的蝦作為親蝦，從而切斷WSSV的垂直傳播途徑，但在實(shí)際操作過(guò)程中，因不同種類蝦而有所不同。除此之外，建立無(wú)WSSV對(duì)蝦品種，這在我國(guó)大陸已能進(jìn)行全人工繁殖的對(duì)蝦品種中是可行的，如中國(guó)明對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦、凡納濱對(duì)蝦等，而對(duì)于南方主要養(yǎng)殖品種之一的斑節(jié)對(duì)蝦目前尚無(wú)法實(shí)現(xiàn)。主要原因是斑節(jié)對(duì)蝦在我國(guó)尚沒(méi)有用于生產(chǎn)的大規(guī)模的全人工繁殖技術(shù)，因而無(wú)法建立無(wú)WSSV品系，因而急需加強(qiáng)開(kāi)展斑節(jié)對(duì)蝦全人工繁殖的攻關(guān)研究。消除WSSV垂直傳播傳染源的另一種方法是建立抗WSSV的品種，由于WSSV弱毒株的產(chǎn)生和WSSV總體上致病力有所下降，從而為建立抗WSSV的對(duì)蝦品種成為可能（何建國(guó)等，2001）。2 切斷WSSV垂直傳播的傳染途徑育苗期仔蝦的WSSV檢測(cè)是目前切斷WSSV進(jìn)入對(duì)蝦養(yǎng)殖期的主要手段。世界上多采用PCR檢測(cè)法，一般為套式PCR法，也有用核酸探針的檢測(cè)方法和單克隆抗體的檢測(cè)方法。雖然上述WSSV的檢測(cè)方法在國(guó)內(nèi)都有應(yīng)用，但普及率比較低，同時(shí)，由于檢測(cè)育苗期仔蝦數(shù)量的局限性，無(wú)法完全準(zhǔn)確地判斷一批數(shù)量較大的蝦苗是否完全攜帶WSSV的仔蝦，因而在一些國(guó)家也是常用的對(duì)蝦苗檢測(cè)和選購(gòu)參考的手段。3 消除WSSV的水平傳播的傳染源和傳播途徑WSSV的宿主種類多，已發(fā)現(xiàn)和確定的有近40種，每一個(gè)種類在WSSV的水平傳播的傳染源。在WSSV暴發(fā)流行初始階段，主要是受WSSV保存宿主的影響，已知的保存宿主為養(yǎng)殖的對(duì)蝦野生的東方白蝦、長(zhǎng)臂蝦、日本櫻蝦等和大量的蟹類。因而，在清塘?xí)r一定要將上述幾種生物消除掉。何建國(guó)等（1999a）在上萬(wàn)畝蝦場(chǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，上述消除水平傳播傳染源的措施起到較好的養(yǎng)殖效果。與此同時(shí)，要切斷對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中的WSSV的水平傳播途徑，在蝦塘進(jìn)水口安裝過(guò)濾網(wǎng)，由蝦塘內(nèi)至外的濾網(wǎng)分別為60、20目絹網(wǎng)，這樣既可以不影響進(jìn)排水，又可以防止較大型生物進(jìn)入養(yǎng)殖池中，從而減少了WSSV的傳播。經(jīng)對(duì)蝦養(yǎng)殖實(shí)踐，效果還是比較理想。4加強(qiáng)水質(zhì)的監(jiān)控從WSSV潛伏感染到急性感染，一方面與對(duì)蝦個(gè)體大小有關(guān)，而另一個(gè)重要方面是受水體理化因子和大的氣候影響，這方面的研究可以通過(guò)MBV與理化因子的關(guān)系得到佐證。因而水質(zhì)的監(jiān)控在養(yǎng)殖過(guò)程中至關(guān)重要。日常監(jiān)測(cè)指標(biāo)應(yīng)包括鹽度、pH、溫度、SNH3N、NO2N等。溫度是病毒暴發(fā)流行的前提條件之一。也是在養(yǎng)殖過(guò)程中目前較難控制的因素。對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦個(gè)體MBV病毒感染度與水體理化因子的關(guān)系研究揭示： Y=＋＋＋式中，Y為病毒感染度；X1為鹽度；X2為氨氮（181。gL1）；X3為硝酸氨（181。gL1）。養(yǎng)殖對(duì)蝦在低鹽、低氨氮、低亞硝酸氮的條件下，對(duì)蝦個(gè)體內(nèi)潛伏病毒數(shù)量會(huì)減少，而不易暴發(fā)病毒病。為防病應(yīng)提倡低鹽度養(yǎng)殖對(duì)蝦。同時(shí)，通過(guò)增加氧氣、改善水質(zhì)，減少氨氮和亞硝酸氮。本式是一個(gè)簡(jiǎn)化公式，去除了pH與氨氮協(xié)同作用，促進(jìn)氨氮毒性增強(qiáng)，故陰天、雨后、臺(tái)風(fēng)過(guò)后，水體pH的調(diào)節(jié)至關(guān)重要，一般1 。通過(guò)上述措施的處理，減少WSSV的暴發(fā)流行。5 采用低鹽度和增氧方法養(yǎng)殖。從抗WSSV來(lái)看，凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖最適宜鹽度為1020‰，斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖最適宜鹽度為28‰（未發(fā)表）。6 采用淡水添加式的養(yǎng)殖模式所謂淡水添加式的養(yǎng)殖模式，實(shí)際上是在對(duì)蝦養(yǎng)殖初始進(jìn)海水，養(yǎng)殖過(guò)程中利用淡水添加，直至養(yǎng)成上市。至養(yǎng)成上市時(shí)對(duì)蝦養(yǎng)殖水鹽度以2～3為好，一方面切斷WSSV從海水傳染的水平傳播途徑，另一方面低鹽度養(yǎng)殖對(duì)蝦WSSV不易暴發(fā)流行。7 采用深池養(yǎng)殖對(duì)蝦深池（水深）受氣候等因子影響小，在遇到臺(tái)風(fēng)、雨水、陰天、寒潮等不利于對(duì)蝦養(yǎng)殖的環(huán)境下，水質(zhì)調(diào)控能力強(qiáng)，再配有充氧等措施，水質(zhì)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。8 采用少量多次換水方式根據(jù)調(diào)查結(jié)果，一次換水量超過(guò)40%，導(dǎo)致WSSV暴發(fā)流行的可能性很大。國(guó)內(nèi)外也有大量的報(bào)道，蝦池一次換水量過(guò)大，加速患病蝦的死亡。一次換水量過(guò)大，較大地影響水體理化因子，容易引發(fā)WSS的暴發(fā)流行。根據(jù)生產(chǎn)上的經(jīng)驗(yàn)，建議蝦池?fù)Q水采用少量多次的方式進(jìn)行，一次換水量最好不要超過(guò)10%。9 在大規(guī)模對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中，實(shí)行統(tǒng)一管理，減少WSSV的傳播研究結(jié)果表明，攜帶WSSV死亡對(duì)蝦在海水中WSSV失去感染活性的時(shí)間約為3 d。因此，養(yǎng)殖對(duì)蝦在暴發(fā)WSS后，實(shí)行毒池，殺死所有攜帶WSSV的生物，再過(guò)7 d后排水，所排之水和生物不再攜帶有活性WSSV，因而也就不具有傳播的作用。10 適當(dāng)采用水體消毒劑雖然水體消毒劑不能防止WSSV的傳播，但是有些消毒劑(如氯制劑)可殺死游離病毒、降低細(xì)菌和調(diào)節(jié)水質(zhì)的作用，有時(shí)也能減少氨氮，從而相對(duì)減少WSSV的暴發(fā)流行。11 采用過(guò)濾的相對(duì)獨(dú)立的對(duì)蝦養(yǎng)殖模式海水經(jīng)過(guò)過(guò)濾(有多種方式)和消毒后，一方面可以過(guò)濾掉大部分生物，包含了WSSV的宿主生物；另一方面改善了水質(zhì)，有利于WSSV的控制。同時(shí)，經(jīng)過(guò)消毒處理后，殺死所有WSSV的宿主生物，在經(jīng)過(guò)7 d的靜止，宿主攜帶的WSSV已經(jīng)不具有感染性。12 采用地膜養(yǎng)殖模式地膜養(yǎng)殖模式能較好的控制對(duì)蝦主要病害WSS的暴發(fā)流行。WSSV宿主范圍廣，包括養(yǎng)殖對(duì)蝦、野生海水蝦、蟹、橈足類、蝦蛄等甲殼動(dòng)物，蟹類是WSSV宿主之一，可以攜帶WSSV過(guò)冬，傳染給第二年的養(yǎng)殖蝦，引發(fā)WSSV的暴發(fā)流行。蟹不能在地膜中寄居，而在養(yǎng)殖池沒(méi)有蟹類或很少蟹類，也就減少了WSSV的傳染源。因此地膜養(yǎng)蝦模式暴發(fā)WSS的機(jī)會(huì)就少一些。同時(shí)依賴于土質(zhì)的細(xì)菌性疾病也不會(huì)在地膜養(yǎng)蝦模式中發(fā)生，養(yǎng)殖池不存在老化問(wèn)題，因而細(xì)菌病相對(duì)減少，從而提高了對(duì)蝦養(yǎng)殖的成功率。地膜可以完全隔絕池底對(duì)蝦池的不良影響，如果能配合水體處理或適當(dāng)換水，效果更為理想。十三、其它病毒另外，還有淋巴器官細(xì)小樣病毒、淋巴器官空泡化病毒、對(duì)蝦彈狀病毒、類呼腸孤病毒等。第六節(jié) 對(duì)蝦的細(xì)菌性疾病細(xì)菌性疾病在對(duì)蝦養(yǎng)殖中最為常見(jiàn)、而且是危害較大的一類疾病。與病毒性疾病不同，病原可以進(jìn)行培養(yǎng)，在光學(xué)顯微鏡下一般可見(jiàn)，而且用化學(xué)藥物可以進(jìn)行防治，從形態(tài)上，細(xì)菌可以分為球菌、桿菌和螺旋菌三大類。有些細(xì)菌是條件致病菌，即平時(shí)生活在海水中、底泥中或健康的蝦體上，并不導(dǎo)致對(duì)蝦發(fā)病，但在蝦體受傷或在環(huán)境條件對(duì)蝦不利時(shí)，就能侵入蝦體并引起疾病。一、紅腿?。t肢?。┎≡簢?guó)外又稱“敗血病”。病原主要是副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、鰻弧菌（V．a(chǎn)nguilarum）和溶藻弧菌（V．a(chǎn)lginolyticus）癥狀與病理變化：本病是由弧菌侵入蝦體血液而引起的全身性疾