基因擴增(pcr)實驗室(編輯修改稿)
2025-09-01 04:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 排風裝置、排風扇或其它可行的方式進行。 試劑貯存和準備區(qū)、樣品處理區(qū)應設微正壓，以防止外界核酸氣溶膠的進入，造成污染，可以通過空氣進風風量的大于排風量達到正壓效果。 核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)應設微負壓，防止含核酸的氣溶膠擴散出去而污染試劑與樣品，造成假陽性結果，可以通過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果。 PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，若需要一般采用凈化級別8或9級（即萬級或十萬級）。 PCR實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)及壓力控制為避免各個實驗區(qū)域間交叉感染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時要嚴格控制送排風的比例，以保證各實驗區(qū)的壓力要求。 試劑儲存和準備區(qū)：因為該區(qū)主要進行的操作為儲存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備，對于氣流壓力的控制，本區(qū)沒有嚴格要求，但宜采用微正壓。 標本制備區(qū)：該區(qū)域主要進行的操作為標本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、儲存即加入至擴增反應管和測定RNA和DNA的合成體。本區(qū)的壓力梯度要求與相對相鄰近區(qū)域為正壓，是為避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)氣溶膠污染。 擴增區(qū)：擴增反應混合物配制和擴增反應，該區(qū)域主要進行的操作為DNA和CDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的CDNA（來自標本制備區(qū)）的加入和主反應混合液（來自試劑儲存和制備區(qū)）制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。在巢式PCR測試中，通常在第一輪擴增后必須打開反應管，因為巢式擴增有較高的危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。因此，本區(qū)壓力梯度要求為相對鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)瀉出。 擴增產(chǎn)物分析區(qū)：該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定（根據(jù)所使用的分析儀器的不同此區(qū)域與擴增區(qū)可以合并為一個區(qū)），本區(qū)是主要擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)域的壓力梯度要求相對于鄰近區(qū)域應為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)域擴散至其他區(qū)域。4. PCR實驗室污染的預防與控制PCR實驗室設計的核心問題是如何避免實驗室污染。常見的污染有以下幾種：天然基因組DNA的污染、試劑的污染以及標本間（樣品）的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直至查到污染源為止，而且實驗結果必須作廢，需重新進行實驗，不僅浪費人力、物力，而且也延長了實驗結果的報告時間。實驗室一旦發(fā)生污染，尋查污染源是一件很繁瑣的事情，因此要避免污染，首先是預防污染的發(fā)生，而不是發(fā)生了再研究如何排除。避免污染的發(fā)生，應注意： 各個區(qū)域的合理設置 各個試驗區(qū)域須有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地面顏色），以避免各個不同的實驗區(qū)域設備、物品、試劑等發(fā)生混淆。 合理的系統(tǒng)設置 合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設置，應盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)（擴增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)更為重要）。 嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)域內(nèi)不同的壓力梯度。 嚴格保證合理的氣流流程工藝，保證核酸擴增后區(qū)的氣流不逆向流入核酸擴增前區(qū)。 嚴格的實驗室配套設施完備的實驗室配套實施是保證實驗工作的必備條件，應根據(jù)各個區(qū)域功能配備相應的設備和儀器，如生物安全柜、超凈工作臺、離心機等。避免PCR實驗室的污染除了實驗室在設計上應注意工作區(qū)域的嚴格劃分、合理的系統(tǒng)設置、完備的配套設施外，規(guī)范的操作和嚴格的管理也同樣重要。5. 裝飾材料 吊頂與隔墻：采用彩鋼夾心板等材料要符合國家關于實驗室的消防規(guī)范。應結構牢固、氣密性好；所有陰角應采用弧形線條過渡，墻體內(nèi)壁光潔不吸附、易清潔消毒、耐腐蝕。功能相近的實驗室隔墻設置比例適宜的透視窗，透視窗以雙面玻璃為好，這樣能保持與墻體齊平，~。 地面：實驗室建議采用PVC卷材或環(huán)氧樹脂整體地面，地面與墻交界處應圓弧過渡上墻120mm150mm（需用水沖刷房間），使用進口橡膠卷材（片）更佳。地面材料與其他圍護結構交界處應安全平齊過渡，無縫隙和裂紋，地面鋪設前采用自流平處理，地面平整性好、易清潔、耐腐蝕。 門：彩鋼板門框為冷軋槽鋼，外加鋁型材，配專用密封條，優(yōu)質閉門器，設可視窗，門單向鎖定。緩沖間的門與主實驗室的門有互鎖功能。：各實驗室區(qū)間設不銹鋼互鎖功能傳遞窗并具有消毒功能，試劑和標本通過傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。 給排水系統(tǒng)：給排水管宜設在緩沖區(qū)。給水管路最好采用薄壁不銹鋼鋼管，管上安裝逆止閥。緩沖區(qū)設洗手盆，手動水龍頭；標本制備區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)設洗手盆，水龍頭（感應、腳踏、手動）和洗眼器。如果設置地漏，地漏采用不銹鋼密閉地漏。：燈具要選用凈化燈具，便于清洗不積塵。 6 安全與自動系統(tǒng) 疏散出口（專用走廊）設置專用疏散指示燈（標識）及應急照明。 送排風系統(tǒng)采用變頻控制，并聯(lián)動互鎖，即工作時先啟動排風機后啟動送風機。停機時相反，并設事故自動報警裝置。，自動控制系
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