chapter-3-外植體選擇和滅菌(編輯修改稿)
2024-09-01 00:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 潔 超凈工作臺過濾裝置失效 培養(yǎng)瓶的口徑過大 污染的預防措施 ⑴防止材料帶菌的措施 莖尖作外植體時，進行預培養(yǎng)（無糖）或暗培養(yǎng)。無糖營養(yǎng)液或自來水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。 晴天取材，下午取材，經(jīng)日曬過可殺死部分細菌或真菌。 接種時除去外部韌皮組織，只接內(nèi)部的分生組織。 （ 2）外植體的滅菌 多次滅菌法，次氯酸鈉 無菌水 次氯酸鈉 多種藥液交替浸泡法，肥皂水 酒精 次氯酸鈉 無菌水。 ? （ 3）嚴格按照操作程序。 第二節(jié) 外植體無菌接種 污染來源 ：空氣中微生物，接種工具、材料、工作人員帶菌 一、接種室的消毒 新潔爾滅擦地板、墻壁 :使用前 %新潔爾滅擦地板、墻壁 甲醛熏蒸 ：在接種前一天進行，按每立方米體積 26mL甲醛，倒入燒杯中，取甲醛一半量的高錳酸鉀倒入燒杯中，利用高錳酸鉀的強氧化性而使甲醛揮發(fā)達到殺菌目的） （ 紫外線照射 ：接種前 1小時進行，打開紫外燈照射 20－ 30分鐘，利用臭氧（ O3）殺菌，停 15－ 20分鐘后開始接種 ） 酒精噴霧 二 外植體的接種 — 無菌接種 外植體的接種是把經(jīng)過表面滅菌后的植物材料切碎或分離出器官、組織、細胞、轉(zhuǎn)放到無菌培養(yǎng)基上的全部操作過程。整個過程均需無菌操作。 燒烤瓶口，換濾紙，消毒剪刀，在酒精燈下方操作等。 原則 ：殺菌又不傷害活細胞。（選擇消毒劑，濃度、時間） 藥劑：能自動分解成低毒性或容易除去的藥劑，如次氯酸鈉能分解成殺菌的氯氣，并易散失，是常用的，低濃度氯化汞效果好但難除；多次無菌水沖洗，用鑷子翻動使藥液均勻。 ? 幼穗、花蕾、花藥 ：飽和漂白粉上清液 1020分鐘 ? 莖段、莖尖 ： %升汞 510分鐘 ? 成熟胚： 次氯酸鈉 1530分 （活性氯 %）（＞ = % ） ? 厚種皮種子： %升汞 30分 60分，幻胚次氯酸鈉 90120分 升汞處理方法： 升汞＋ Na2S－－－絮狀沉淀（至絮狀沉淀不再產(chǎn)生為止）－－＋ FeSO4（中和過多的 Na2S ） ? 材料消毒前常用 70%酒精漂洗： 70%具較強穿透力和殺菌力，濕潤表面，驅(qū)盡茸毛間氣泡，使藥劑殺菌效果好。但時間太長會損傷材料。 ? 表面活性劑，抽氣、攪拌或超聲振動，使消毒劑與材料充分接觸。 （三）工作人員 ：洗手，戴帽、口罩， 70%酒精擦手。 （四）無菌操作 ：燒烤瓶口，換濾紙，消毒剪刀，在酒精燈下方操作等。 （ 1） 借助接種用工具將材料切割分離 。 （ 2） 將培養(yǎng)基放入超凈工作臺內(nèi) ， 火焰灼燒培養(yǎng)基瓶口 ， 然后打開培養(yǎng)瓶口 ， 置培養(yǎng)瓶為斜角 ， 避免灰塵落入平中 。 （ 3） 迅速將切割分離下的所需組織 、 細胞 、器官 ， 放入培養(yǎng)基上 ， 及時蓋上瓶蓋 。 （ 4） 工具用后應(yīng)及時滅菌 ， 避免交叉污染 。 （ 5）工作人員操作時禁止不必要的談話。 第三節(jié) 外植體的培養(yǎng) 接種只是完成了離體培養(yǎng)的第一步 ， 植物離體培養(yǎng)和栽培植物一樣 ， 生長過程中也受到各種環(huán)境因素的影響 。 培養(yǎng)條件是離體培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵 。 在培養(yǎng)基條件適宜的基礎(chǔ)上 ， 影響試管苗生長的主要因素有光照 、 溫度 、 濕度 、 氧氣 。 外植體的培養(yǎng)條件 光照 光照對植物生長發(fā)育有重要作用 ， 是離體培養(yǎng)中非常重要的環(huán)境因素 。 光照強度 、 光質(zhì)以及光照時間 ， 對細胞的增殖 、 器官的分化都有很大影響 。除特殊要求外 ， 一般都采用日光燈作光源 ， 光照強度 10005000Lx， 根據(jù)不同植物或器官需要 ， 可以每天連續(xù)光照 1216小時 。 ? 馬鈴薯連續(xù)光照，葡萄要求短日照。 ? 光質(zhì)也影響芽的再生，藍光有利于器官發(fā)生，煙草實驗，而紅光有利于根的發(fā)生。 溫度
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