chapter-3-外植體選擇和滅菌(文件)
【正文】 中對溫度的控制比光照更為重要 ，大所數(shù)植物最適溫度在 2332℃ 之間 。 因此 ， 培養(yǎng)室應(yīng)安裝空調(diào)機或其他的控溫設(shè)備 。 氧氣 離體培養(yǎng)的試管苗是需要氧氣的 ， 在固體培養(yǎng)或液體靜置培養(yǎng)時 ， 如果組織完全浸入培養(yǎng)基中 ， 與氧氣隔絕 ， 就會停止生長 。 要注意保持培養(yǎng)容器內(nèi)良好的通氣性。 ⑴ 基因型 某些植物酚類物質(zhì)含量較多。 （二） 褐變的防止措施 1 選擇適宜的外植體 一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。培養(yǎng)基中添加 1mg/L BA+1mg/L 2,4D 時，愈傷組織淺黃疏松，增殖也快。高濃度 CO2也會促進褐變，其原因是環(huán)境中的 CO2向細胞內(nèi)擴散，細胞內(nèi) CO2增多， 導(dǎo)致內(nèi)膜系統(tǒng)瓦解，酚類物質(zhì)與多酚氧化酶（ PPO） 相互接觸，產(chǎn)生褐變。 在培養(yǎng)基中加入偏二亞硫酸鈉、 L半胱氨酸、抗壞血酸、檸檬酸、二硫蘇糖醇等抗氧化劑都可以 與氧化產(chǎn)物醌 發(fā)生作用，使其重新還原為酚。 加活性炭， %活性炭 （三）玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施 玻璃化現(xiàn)象及其產(chǎn)生原因 玻璃化是在細胞生長過程中的環(huán)境產(chǎn)生變化，試管苗為了適應(yīng)變化了的環(huán)境而呈玻璃狀。 ⑷光照時間 一般要求 1012h，大于 15h玻璃苗增加。 ⑵ 增加培養(yǎng)基中的溶質(zhì)水平，以降低培養(yǎng)基的水勢（ 提高蔗糖和瓊脂濃度） ⑶降低細胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素比例， 可以考慮加入適量脫落酸 。 （ 7）培養(yǎng)基中加入間苯三酚、根皮苷或多效唑、矮壯素。 C 培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度 A 外植體 (1) 外植體種類及基因型 (2) 外植體供體植株和外植體的來源與生理狀態(tài) (3) 外植體大小 (4) 外植體的極性 B、培養(yǎng)基 a 培養(yǎng)基類型 : b 碳 源的影響 : C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì) a 細胞分裂素和生長素類 b 赤霉素類 c 乙烯及其生物合成抑制劑 d 其他有機化合物 細胞分裂素和生長素： （ CTK）可以形成 無根苗 合使用。 乙烯及其生物合成抑制劑： 具有促進和抑制兩方面的影響，但抑制作用多于促進作用。 。 AgNO3 、 CoCl、 AVG 其他有機化合物： 腺嘌呤衍生物具有促進器官分化作用。 d. 不同細胞分裂素對分化的作用效果不同 e. 苯基脲衍生物具有較高的細胞分裂素活性 （ 4PU、 CPPU 、 TDZ） 赤霉素類： 赤霉素與促進細胞伸長和開花反應(yīng)，組織培養(yǎng)條件下只在少數(shù)植物上對芽的誘導(dǎo)有促進作用。燈源強度： 40瓦的日光燈三根合在一起，離苗 45厘米高處照射，光強為 3千～ ， 100瓦的高壓汞燈離苗 80厘米處，光強為 ～ 1千勒克斯 ? 升汞處理方法： 升汞＋ Na2S－－－絮狀沉淀（至絮狀沉淀不再產(chǎn)生為止）－－＋ FeSO4（中和過多的 Na2S ） 接種外植體的生長過程： A 細胞分裂的啟動； B 細胞增殖； C 組織和器官的形成。 （ 5）適溫生長，熱擊處理防止玻璃化發(fā)生。 （ 6）離子水平 植物種類不同，離子形態(tài)比例量要求不同。 ⑵瓊脂濃度 瓊脂濃度低，玻璃化苗增加。在水稻細胞的培養(yǎng)基中，添加植酸 (PA)，可防止褐變， PA分子中眾多的羥基產(chǎn)生抗氧化作用，使生色物質(zhì)的含量下降或 PA與 PPO分子中的 Cu2 +結(jié)合，從而降低了其活力。 4 連續(xù)轉(zhuǎn)移。一般來說， 酸性環(huán)境 (pH值為 )不利于褐變過程的發(fā)生 。另外，其 pH值也與褐變程度有較大關(guān)系 （ 1） 適當?shù)臒o機鹽濃度 低濃度的無機鹽可促進外植體的生長與分化，減輕外植體褐變的程度。 ⑶ 培養(yǎng)基的成分 過高的無機鹽濃度 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當， BA過多 分生能力強的材料，氧化受
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