chapter-3-外植體選擇和滅菌(完整版)
【正文】 培養(yǎng)的植物 自然環(huán)境中生長的植株 ， 一般帶有微生物 ，甚至與某些微生物具有寄生關(guān)系 ， 使植株具有 內(nèi)生菌 。 C、流水沖洗外植體； D、外植體切割、分離及滅菌處理； E、外植體接種于誘導培養(yǎng)基。 167。 對于大多數(shù)植物來講，莖尖是最好的部位 ，由于其形態(tài)已基本建成，生長速度快，遺傳性穩(wěn)定，也是獲得無病毒苗的重要途徑， 但莖尖往往受到材料來源的限制，而采用莖段可解決培養(yǎng)材料不足的困難。 ? 在母株生長旺盛的季節(jié)取材，不僅成活率高，而且增殖率也大。對于培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)內(nèi)生菌污染的材料，應盡量取生長旺盛期的生長點部位作為起始培養(yǎng)的材料。 外植體極性： 當外植體以形態(tài)學的基部接種于培養(yǎng)基上時，從遠離基部的表面誘導出芽、苗數(shù)目較多。（選擇消毒劑，濃度、時間） 藥劑：能自動分解成低毒性或容易除去的藥劑，如次氯酸鈉能分解成殺菌的氯氣，并易散失，是常用的，低濃度氯化汞效果好但難除；多次無菌水沖洗，用鑷子翻動使藥液均勻。 （ 4）外植體放入超凈工作臺內(nèi) 置 7075%酒精中 560 秒 材料消毒前常用 70%酒精漂洗： 70%具較強穿透力和殺菌力，濕潤表面，驅(qū)盡茸毛間氣泡，使藥劑殺菌效果好。無糖營養(yǎng)液或自來水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。 原則 ：殺菌又不傷害活細胞。 （ 2） 將培養(yǎng)基放入超凈工作臺內(nèi) ， 火焰灼燒培養(yǎng)基瓶口 ， 然后打開培養(yǎng)瓶口 ， 置培養(yǎng)瓶為斜角 ， 避免灰塵落入平中 。 光照強度 、 光質(zhì)以及光照時間 ， 對細胞的增殖 、 器官的分化都有很大影響 。 因此 ， 培養(yǎng)室應安裝空調(diào)機或其他的控溫設備 。 要注意保持培養(yǎng)容器內(nèi)良好的通氣性。 （二） 褐變的防止措施 1 選擇適宜的外植體 一般來說，最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。高濃度 CO2也會促進褐變，其原因是環(huán)境中的 CO2向細胞內(nèi)擴散，細胞內(nèi) CO2增多， 導致內(nèi)膜系統(tǒng)瓦解，酚類物質(zhì)與多酚氧化酶（ PPO） 相互接觸，產(chǎn)生褐變。 加活性炭， %活性炭 （三）玻璃化現(xiàn)象及其預防措施 玻璃化現(xiàn)象及其產(chǎn)生原因 玻璃化是在細胞生長過程中的環(huán)境產(chǎn)生變化，試管苗為了適應變化了的環(huán)境而呈玻璃狀。 ⑵ 增加培養(yǎng)基中的溶質(zhì)水平，以降低培養(yǎng)基的水勢（ 提高蔗糖和瓊脂濃度） ⑶降低細胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素比例， 可以考慮加入適量脫落酸 。 C 培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度 A 外植體 (1) 外植體種類及基因型 (2) 外植體供體植株和外植體的來源與生理狀態(tài) (3) 外植體大小 (4) 外植體的極性 B、培養(yǎng)基 a 培養(yǎng)基類型 : b 碳 源的影響 : C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì) a 細胞分裂素和生長素類 b 赤霉素類 c 乙烯及其生物合成抑制劑 d 其他有機化合物 細胞分裂素和生長素： （ CTK）可以形成 無根苗 合使用。 。 d. 不同細胞分裂素對分化的作用效果不同 e. 苯基脲衍生物具有較高的細胞分裂素活性 （ 4PU、 CPPU 、 TDZ） 赤霉素類： 赤霉素與促進細胞伸長和開花反應，組織培養(yǎng)條件下只在少數(shù)植物上對芽的誘導有促進作用。 （ 5）適溫生長，熱擊處理防止玻璃化發(fā)生。 ⑵瓊脂濃度 瓊脂濃度低，玻璃化苗增加。 4 連續(xù)轉(zhuǎn)移。另外，其 pH值也與褐變程度有較大關(guān)系 （ 1） 適當?shù)臒o機鹽濃度 低濃度的無機鹽可促進外植體的生長與分化，減輕外植體褐變的程度。 第四節(jié) 外植體的褐變及其防止措施 一、 褐變的原因及防止措施 褐變是指外植體在培養(yǎng)過程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細胞內(nèi)的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，這種褐變物向外擴散致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，抑制其它酶的活性，
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