chapter-3-外植體選擇和滅菌-wenkub
2022-09-02 00:28:49 本頁面
【正文】 五 )外植體大小 外植體大?。? 外植體越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。 ⑵ 注意防病 尤其是真菌和細(xì)菌病害的侵染，取自感病植株的外植體，在培養(yǎng)中的污染率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于來自健康植株的外植體，必要時(shí)需使用化學(xué)藥劑防治病害。 某些多年生植物或特殊材料，必須取自自然生長的植物，就需要盡可能避免使用那些生長過于 潮濕和不潔凈 環(huán)境中的植物。 外植體狀態(tài)： 2 外植體的來源 生長在自然環(huán)境下的植物 有目的地培育在溫室控制條件下生長的植物 無菌環(huán)境下已經(jīng)過離體培養(yǎng)的植物 自然環(huán)境中生長的植株 ， 一般帶有微生物 ，甚至與某些微生物具有寄生關(guān)系 ， 使植株具有 內(nèi)生菌 。 ? 在生長末期或已進(jìn)入休眠期時(shí)取樣，則外植體可能對誘導(dǎo)反應(yīng)遲鈍或無反應(yīng)，較難成活。 C、流水沖洗外植體； D、外植體切割、分離及滅菌處理； E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。 外植體種類及基因型 (二 )外植體的部位 常用的外植體種類： ① 莖尖 （園藝植物組織培養(yǎng)中應(yīng)用最多，繁殖率高，不易發(fā)生遺傳變異，但取材有限） ② 莖段 （采用嫩莖的切段促進(jìn)腋芽萌發(fā)，取材容易） ③ 葉 （幼嫩葉片組織通過愈傷組織或不定芽分化產(chǎn)生植株，取材容易，操作方便，但易發(fā)生變異）； ④ 花球和花蕾 ⑤ 種子、根、塊根、塊莖、花瓣、胚等。 167。 外植體的選擇和滅菌 一 外植體的選擇 (一 ) 外植體的基因型 ? 不同種類的植物 ? 同一植物的不同器官 對誘導(dǎo)條件反應(yīng)是不一致的， 有的部位誘導(dǎo)分化的成功率高，有的部位卻很難脫分化，或者再分化頻率很低 a. 單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。 對于大多數(shù)植物來講，莖尖是最好的部位 ，由于其形態(tài)已基本建成，生長速度快，遺傳性穩(wěn)定，也是獲得無病毒苗的重要途徑， 但莖尖往往受到材料來源的限制，而采用莖段可解決培養(yǎng)材料不足的困難。 F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長。 ? 在母株生長旺盛的季節(jié)取材，不僅成活率高，而且增殖率也大。 取自這些植物的外植體 ， 在培養(yǎng)過程中會(huì)有微生物滋生 ， 從而影響培養(yǎng)效果 。對于培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)內(nèi)生菌污染的材料，應(yīng)盡量取生長旺盛期的生長點(diǎn)部位作為起始培養(yǎng)的材料。 ⑶控制濕度 給供體植株澆水時(shí)應(yīng)從根部給水，避免從上部澆水，以免上部形成易于病原侵染的濕度環(huán)境；盡可能降低溫室濕度；取材前盡可能保持植株干爽。 外植體極性： 當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時(shí)，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。 外植體取材方法 確定大小 取大小適中的莖段、芽體進(jìn)行清洗、滅菌，大了容易污染，小了不易成活。（選擇消毒劑，濃度、時(shí)間） 藥劑：能自動(dòng)分解成低毒性或容易除去的藥劑，如次氯酸鈉能分解成殺菌的氯氣，并易散失，是常用的，低濃度氯化汞效果好但難除；多次無菌水沖洗，用鑷子翻動(dòng)使藥液均勻。 進(jìn)入接種室前雙手用洗滌劑清洗干凈， 操作前再用 70%酒精或消毒劑擦洗雙手 。 （ 4）外植體放入超凈工作臺內(nèi) 置 7075%酒精中 560 秒 材料消毒前常用 70%酒精漂洗： 70%具較強(qiáng)穿透力和殺菌力，濕潤表面，驅(qū)盡茸毛間氣泡，使藥劑殺菌效果好。 病原菌：細(xì)菌及真菌兩大類。無糖營養(yǎng)液或自來水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。 ? （ 3）嚴(yán)格按照操作程序。 原則 ：殺菌又不傷害活細(xì)胞。 ? 表面活性劑，抽氣、攪拌或超聲振動(dòng)，使消毒劑與材料充分接觸。 （ 2） 將培養(yǎng)基放入超凈工作臺內(nèi) ， 火焰灼燒培養(yǎng)基瓶口 ， 然后打開培養(yǎng)瓶口 ， 置培養(yǎng)瓶為斜角 ， 避免灰塵落入平中 。 第三節(jié) 外植體的培養(yǎng) 接種只是完成了離體培養(yǎng)的第一步 ， 植物離體培養(yǎng)和栽培植物一樣 ， 生長過程中也受到各種環(huán)境因素的影響 。 光照強(qiáng)度 、 光質(zhì)以及光照時(shí)間 ， 對細(xì)胞的增殖 、 器官的分化都有很大影響 。 溫度 離體培養(yǎng)
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