chapter-3-外植體選擇和滅菌-免費(fèi)閱讀
【正文】 因此在某些植物種類(lèi)，乙烯抑制劑可以促進(jìn)芽的形成。 （ 8）降低培養(yǎng)溫度，進(jìn)行變溫培養(yǎng)，有助于減輕試管苗玻璃化現(xiàn)象的發(fā)生； (作物對(duì)紅光和藍(lán)紫光吸收能力最強(qiáng)，所以燈源以日光燈、高壓汞燈、弧氙氣燈為好。 ⑸通風(fēng)條件 培養(yǎng)瓶容量小，氣體交換不良，玻璃化苗多。由于其作用過(guò)程均為消耗性的，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)注意添加量，其中 L半胱氨酸和抗壞血酸均對(duì)外植體無(wú)毒副作用，在生產(chǎn)應(yīng)用中可不受限制。 （ 3） 培養(yǎng)基的 pH值 在水稻體細(xì)胞培養(yǎng)中， pH值為 時(shí)MS液體培養(yǎng)基可保持愈傷組織處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)，其表面呈黃白色，而 pH值為 ，愈傷組織嚴(yán)重褐變。 ⑵外植體的生理狀態(tài) 幼年的材料培養(yǎng)含醌類(lèi)物質(zhì)較少。 因此 ， 接種時(shí)要有部分組織合空氣接觸 。 培養(yǎng)室溫度是 25177。 培養(yǎng)條件是離體培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵 。 （三）工作人員 ：洗手，戴帽、口罩， 70%酒精擦手。 第二節(jié) 外植體無(wú)菌接種 污染來(lái)源 ：空氣中微生物，接種工具、材料、工作人員帶菌 一、接種室的消毒 新潔爾滅擦地板、墻壁 :使用前 %新潔爾滅擦地板、墻壁 甲醛熏蒸 ：在接種前一天進(jìn)行，按每立方米體積 26mL甲醛，倒入燒杯中，取甲醛一半量的高錳酸鉀倒入燒杯中，利用高錳酸鉀的強(qiáng)氧化性而使甲醛揮發(fā)達(dá)到殺菌目的） （ 紫外線(xiàn)照射 ：接種前 1小時(shí)進(jìn)行，打開(kāi)紫外燈照射 20－ 30分鐘，利用臭氧（ O3）殺菌，停 15－ 20分鐘后開(kāi)始接種 ） 酒精噴霧 二 外植體的接種 — 無(wú)菌接種 外植體的接種是把經(jīng)過(guò)表面滅菌后的植物材料切碎或分離出器官、組織、細(xì)胞、轉(zhuǎn)放到無(wú)菌培養(yǎng)基上的全部操作過(guò)程。 ⑴ 細(xì)菌污染特點(diǎn) 菌斑呈黏液狀，接種后12天發(fā)現(xiàn)。 （ 2） 操作期間雙手和臺(tái)面常用 70%酒精或消毒劑擦拭 。 外植體的大小 ， 過(guò)大的外植體容易污染， 過(guò)小存活率很低。 材料取材 ⑴ 材料選擇 培養(yǎng)材料應(yīng)選擇有代表性的主要植物 、 選擇性狀優(yōu)良的種質(zhì)或特殊的基因型 。 自然環(huán)境生長(zhǎng)植株 溫室控制條件下生長(zhǎng)植株 已離體培養(yǎng)植株 多數(shù)情況下，應(yīng)盡量使用溫室或人工氣候室控制培養(yǎng)的植物材料作為外植體來(lái)源，減少培養(yǎng)過(guò)程中的微生物感染概率。 (三 )取材季節(jié) 取材的季節(jié)以早春為好 ? 不同植物的取材季節(jié)要求各有不同。 b. 木本植物較難誘導(dǎo)。 c. 存在基因型差異（如番茄 29%~63%） d. 開(kāi)始生長(zhǎng)季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。對(duì)大多數(shù)植物而言，應(yīng)在其生長(zhǎng)開(kāi)始的季節(jié)采樣 。同時(shí)，生長(zhǎng)在控制條件下的植物可以保持培養(yǎng)料間的一致性，提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，也便于培養(yǎng)技術(shù)的規(guī)范。 快速繁殖時(shí)應(yīng)在植株生長(zhǎng)的最適時(shí)期取材 ， 花藥培養(yǎng)應(yīng)在花粉發(fā)育到單核期取材 。 外植體的大小 外植體的來(lái)源 生理學(xué)上的年齡 取材的季節(jié) 選材 ?外植體的選擇有什么要求 ? 二、外植體的滅菌 滅菌： 是指用物理或化學(xué)方法將所有致病和非致病的微生物全部殺滅。 超凈工作臺(tái)使用前必須用紫外燈照射殺菌 ， 然后開(kāi)啟風(fēng)機(jī) 。 污染途徑： 外植體帶菌 培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底 操作人員未遵守操作規(guī)程 ⑵ 真菌污染的特點(diǎn) 污染部分長(zhǎng)有不同顏色的霉菌，接種后 310天發(fā)現(xiàn)。整個(gè)過(guò)程均需無(wú)菌操作。 （四）無(wú)菌操作 ：燒烤瓶口，換濾紙，消毒剪刀，在酒精燈下方操作等。 在培養(yǎng)基條件適宜的基礎(chǔ)上 ， 影響試管苗生長(zhǎng)的主要因素有光照 、 溫度 、 濕度 、 氧氣 。 2℃ 。 振蕩培養(yǎng)是解決通氣的良好辦法 。 ⑶ 培養(yǎng)基的成分 過(guò)高的無(wú)機(jī)鹽濃度 生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)， BA過(guò)多 分生能力強(qiáng)的材料，氧化受抑制，褐變也被抑制 培養(yǎng)條件不適宜，溫度過(guò)高或光照過(guò)強(qiáng)，褐變加速。一般來(lái)說(shuō)， 酸性環(huán)境 (pH值為 )不利于褐變過(guò)程的發(fā)生 。在水稻細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加植酸 (PA)，可防止褐變， PA分子中眾多
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