【正文】 C、流水沖洗外植體； D、外植體切割、分離及滅菌處理； E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。 ⑵ 注意防病 尤其是真菌和細(xì)菌病害的侵染，取自感病植株的外植體，在培養(yǎng)中的污染率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于來自健康植株的外植體，必要時(shí)需使用化學(xué)藥劑防治病害。 表面滅菌 （ 1） 操作人員穿戴滅菌過的工作服 、 口罩 。 （ 2）外植體的滅菌 多次滅菌法，次氯酸鈉 無菌水 次氯酸鈉 多種藥液交替浸泡法，肥皂水 酒精 次氯酸鈉 無菌水。 （ 5）工作人員操作時(shí)禁止不必要的談話。因此，培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)室一般要求相對濕度保持在 7080%，相對濕度過低影響培養(yǎng)物生長和分化，應(yīng)向室內(nèi)噴灑水，以提高濕度；過高雜菌滋生，大量污染，應(yīng)及時(shí)地通風(fēng)除濕。 （ 2 ） 適當(dāng)和適量的激素 王異星在荔枝的組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中添加 1 mg/L BA + ,4D時(shí)，愈傷組織較堅(jiān)硬，增殖緩慢，易產(chǎn)生褐變。 ⑶ 溫度 低溫易形成玻璃化苗。 如馬鈴薯、甜菜、櫻桃等。 （二）影響外植體起始培養(yǎng)的因素： 影響外植體起始的因素 A 外植體的遺傳基礎(chǔ)及生理影響 B 培養(yǎng)基組成成分：礦物鹽類、微量有機(jī)成分、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、碳源、瓊脂、活性炭、酚類化合物、多胺等。 陳學(xué)森等在對植酸在銀杏組織培養(yǎng)中應(yīng)用的研究中也證實(shí)了植酸具有抑制多酚氧化酶活性的作用。 ⑷材料轉(zhuǎn)移時(shí)間 時(shí)間過長引起材料褐變。 低于 15℃ 時(shí) ， 培養(yǎng)的組織生長停頓 ，高于 35℃ 對生長也不利 。 （ 1） 借助接種用工具將材料切割分離 。 污染途徑： 周圍環(huán)境不清潔 超凈工作臺過濾裝置失效 培養(yǎng)瓶的口徑過大 污染的預(yù)防措施 ⑴防止材料帶菌的措施 莖尖作外植體時(shí)，進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)（無糖）或暗培養(yǎng)。 ? 常用滅菌方法 : 干熱滅菌 : 150度， 40’ 1２ 0度， 120 ’ 濕熱滅菌 :高壓滅菌鍋，壓力達(dá) ， 壓力達(dá) kg /cm2,121度 ,1630’ 射線滅菌 :紫外燈 過濾滅菌 :細(xì)菌過濾器（孔徑 ） 熏蒸滅菌 :每立方米體積 28mL甲醛 ＋甲醛一半量的高錳酸鉀 火燒滅菌： 酒精燈 藥劑滅菌 ：外植體 (一 )外植體的滅菌 原則 ：殺菌又不傷害活細(xì)胞。 某些多年生植物或特殊材料，必須取自自然生長的植物，就需要盡可能避免使用那些生長過于 潮濕和不潔凈 環(huán)境中的植物。 外植體種類及基因型 (二 )外植體的部位 常用的外植體種類： ① 莖尖 （園藝植物組織培養(yǎng)中應(yīng)用最多，繁殖率高，不易發(fā)生遺傳變異，但取材有限） ② 莖段 （采用嫩莖的切段促進(jìn)腋芽萌發(fā)，取材容易） ③ 葉 （幼嫩葉片組織通過愈傷組織或不定芽分化產(chǎn)生植株，取材容易，操作方便，但易發(fā)生變異）； ④ 花球和花蕾 ⑤ 種子、根、塊根、塊莖、花瓣、胚等。 F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長。 ⑶控制濕度 給供體植株澆水時(shí)應(yīng)從根部給水，避免從上部澆水，以免上部形成易于病原侵染的濕度環(huán)境；盡可能降低溫室濕度；取材前盡可能保持植株干爽。 進(jìn)入接種室前雙手用洗滌劑清洗干凈， 操作前再用 70%酒精或消毒劑擦洗雙手 。 ? （ 3）嚴(yán)格按照操作程序。 第三節(jié) 外植體的培養(yǎng) 接種只是完成了離體培養(yǎng)的第一步 ， 植物離體培養(yǎng)和栽培植物一樣 ， 生長過程中也受到各種環(huán)境因素的影響 。 氧氣 離體培養(yǎng)的試管苗是需要氧氣的 ， 在固體培養(yǎng)或液體靜置培養(yǎng)時(shí) ， 如果組織完全浸入培養(yǎng)基中 ， 與氧氣隔絕 ， 就會停止生長 。培養(yǎng)基中添加 1mg/L BA+1mg/L 2,4D 時(shí)，愈傷組織淺黃疏松，增殖也快。 ⑷光照時(shí)間