chapter-3-外植體選擇和滅菌-文庫吧
2025-07-21 00:28 本頁面
【正文】 澆水時應(yīng)從根部給水，避免從上部澆水，以免上部形成易于病原侵染的濕度環(huán)境；盡可能降低溫室濕度；取材前盡可能保持植株干爽。 材料取材 ⑴ 材料選擇 培養(yǎng)材料應(yīng)選擇有代表性的主要植物 、 選擇性狀優(yōu)良的種質(zhì)或特殊的基因型 。 快速繁殖時應(yīng)在植株生長的最適時期取材 ， 花藥培養(yǎng)應(yīng)在花粉發(fā)育到單核期取材 。 (五 )外植體大小 外植體大小： 外植體越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。 外植體極性： 當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時，從遠離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。 選取材料的大小一般在 。胚胎培養(yǎng)或脫毒在 。 材料太大易污染 ， 材料太小難于成活 。 外植體取材方法 確定大小 取大小適中的莖段、芽體進行清洗、滅菌，大了容易污染，小了不易成活。 外植體的大小 ， 過大的外植體容易污染， 過小存活率很低。 外植體的大小 外植體的來源 生理學(xué)上的年齡 取材的季節(jié) 選材 ?外植體的選擇有什么要求 ? 二、外植體的滅菌 滅菌： 是指用物理或化學(xué)方法將所有致病和非致病的微生物全部殺滅。 ? 常用滅菌方法 : 干熱滅菌 : 150度， 40’ 1２ 0度， 120 ’ 濕熱滅菌 :高壓滅菌鍋，壓力達 ， 壓力達 kg /cm2,121度 ,1630’ 射線滅菌 :紫外燈 過濾滅菌 :細菌過濾器（孔徑 ） 熏蒸滅菌 :每立方米體積 28mL甲醛 ＋甲醛一半量的高錳酸鉀 火燒滅菌： 酒精燈 藥劑滅菌 ：外植體 (一 )外植體的滅菌 原則 ：殺菌又不傷害活細胞。（選擇消毒劑，濃度、時間） 藥劑：能自動分解成低毒性或容易除去的藥劑，如次氯酸鈉能分解成殺菌的氯氣，并易散失，是常用的，低濃度氯化汞效果好但難除；多次無菌水沖洗，用鑷子翻動使藥液均勻。 預(yù)處理 先對植物材料進行修剪整理，去掉不需要部分，將準(zhǔn)備使用的植物材料（外植體）在流水中沖洗 2060分鐘，備用。如特別不潔的外植體，可先用加有洗滌劑的水清洗 1015分鐘，再用流水沖洗干凈。 表面滅菌 （ 1） 操作人員穿戴滅菌過的工作服 、 口罩 。 進入接種室前雙手用洗滌劑清洗干凈， 操作前再用 70%酒精或消毒劑擦洗雙手 。 （ 2） 操作期間雙手和臺面常用 70%酒精或消毒劑擦拭 。 超凈工作臺使用前必須用紫外燈照射殺菌 ， 然后開啟風(fēng)機 。 （ 3）接種用工具（解剖刀、剪刀、鑷子）可放入 7075%酒精中，使用時需火焰灼燒滅菌，冷卻后使用。 （ 4）外植體放入超凈工作臺內(nèi) 置 7075%酒精中 560 秒 材料消毒前常用 70%酒精漂洗： 70%具較強穿透力和殺菌力，濕潤表面，驅(qū)盡茸毛間氣泡，使藥劑殺菌效果好。但時間太長會損傷材料。 ? 幼穗、花蕾、花藥 ：飽和漂白粉上清液 1020分鐘 ? 莖段、莖尖 ： %升汞 510分鐘 ? 成熟胚： 次氯酸鈉 1530分 （活性氯 %）（＞ = % ） ? 厚種皮種子： %升汞 30分 60分，幻胚次氯酸鈉 90120分 ? 表面活性劑，抽氣、攪拌或超聲振動，使消毒劑與材料充分接觸。 (二 )污染原因和預(yù)防措施 污染原因 污染是指在組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。 病原菌：細菌及真菌兩大類。 ⑴ 細菌污染特點 菌斑呈黏液狀，接種后12天發(fā)現(xiàn)。 污染途徑： 外植體帶菌 培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底 操作人員未遵守操作規(guī)程 ⑵ 真菌污染的特點 污染部分長有不同顏色的霉菌，接種后 310天發(fā)現(xiàn)。 污染途徑： 周圍環(huán)境不清
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