瓊脂糖凝膠電泳準(zhǔn)備手冊(編輯修改稿)
2024-08-31 22:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 應(yīng)根據(jù)染料不同使用合適的光源和激發(fā)波長，如果激發(fā)波長不對，條帶則不易觀察，出現(xiàn)條帶模糊的現(xiàn)象。 瓊脂糖凝膠電泳注意事項(xiàng)和常見問題 (20091213 18:17:23)轉(zhuǎn)載標(biāo)簽： 雜談 核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團(tuán)全部解離，核酸分子因而帶負(fù)電荷，電泳時向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達(dá)到分離的目的。瓊脂糖凝膠電泳操作簡單、快速，通過調(diào)整其使用濃度，使得分辨率達(dá)到大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的要求，因此成為分離、鑒定、純化核酸分子的常用方法。但操作過程中仍有不少要注意的問題。1 凝膠制作1．1 凝膠濃度 配制凝膠的濃度據(jù)實(shí)驗(yàn)需要而變 ，一般在0．8％ ～2．0％之間，如果一次配制凝膠100 ml，沒用完的凝膠可以再次融化，但隨著融化次數(shù)的增加，水分丟失也越多，凝膠濃度則會越來越高，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定，補(bǔ)水辦法：一是在容器上標(biāo)記煮膠前的刻度，煮膠后補(bǔ)充相應(yīng)的水分至原刻度；二是在煮膠前稱重，煮膠后補(bǔ)充水至原重量。粗略一點(diǎn)的方法是通過多次較恒定的煮膠條件得出一個經(jīng)驗(yàn)補(bǔ)水值。以保證凝膠濃度基本維持在原濃度。核酸染色劑溴化乙錠(ethidium bromide)可加在融化的瓊脂糖中，終濃度為0．5 t*g／ml；也可在電泳結(jié)束后染色。2 梳板的選用 一般每個制膠模具均配有多個
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