瓊脂糖凝膠電泳準(zhǔn)備手冊(cè)-免費(fèi)閱讀
【正文】 電泳時(shí)凝膠上所加電壓一般不超過5 v／cm(指的是正負(fù)電極之間的距離，而不是凝膠的長度)，電泳時(shí)間一般為3O～60 min，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要也可作適當(dāng)調(diào)整，電壓增高，電泳時(shí)間縮短，核酸條帶相對(duì)來說不夠整齊，不夠清晰；相反，電壓降低，電泳時(shí)間較長，核酸條帶整齊清晰。另外，每次制膠時(shí)都要注意梳齒與底板的距離至少要1 mm，否則，拔梳板時(shí)易損壞凝膠孑L底層，導(dǎo)致點(diǎn)樣后樣品滲漏。瓊脂糖凝膠電泳操作簡單、快速，通過調(diào)整其使用濃度，使得分辨率達(dá)到大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的要求，因此成為分離、鑒定、純化核酸分子的常用方法。如果選擇λDNA/HindIII或者λDNA/EcoRI的酶切Marker，需要預(yù)先65℃加熱5min，冰上冷卻后使用。在上樣前不要對(duì)DNA樣品加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋可以防止DNA變性。電泳時(shí)使用新制的緩沖液可以明顯提高電泳效果。瓊脂糖凝膠電泳準(zhǔn)備手冊(cè) 準(zhǔn)備干凈的配膠板和電泳槽 注意DNA酶污染的儀器可能會(huì)降解DNA，造成條帶信號(hào)弱、模糊甚至缺失的現(xiàn)象。注意電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，PH值上升，緩沖性能下降，可能使DNA電泳產(chǎn)生條帶模糊和不規(guī)則的DNA帶遷移的現(xiàn)象。 DNA的上樣 正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。從而避免HindIII或EcoRI酶切造成的粘性接頭導(dǎo)致的片段連接不規(guī)則或條帶信號(hào)弱等現(xiàn)象。但操作過程中仍有不少要注意的問題。當(dāng)然，點(diǎn)樣孑L的破壞還與拔梳板的時(shí)間和方法有關(guān)，一般凝膠需冷卻30 min以上方可拔梳板，應(yīng)急的情況下可以將成型的凝
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