盤(pán)狀聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)-免費(fèi)閱讀
【正文】 8．結(jié)果觀(guān)察與繪圖 四、實(shí)驗(yàn)建議 電泳時(shí)，電泳儀與電泳槽間正、負(fù)極不能接錯(cuò)，以免樣品反方向移動(dòng)。 先恒流 ：開(kāi)始用 1～ 2 mA／管，電泳 30 min后調(diào)至恒壓 ，電壓為 290～ 300 V(即 50 V／管 )。開(kāi)始顯 淡黃色 ，5～ 6 min后逐漸轉(zhuǎn) 乳白色 ，表明聚合開(kāi)始，繼續(xù)光照 20～ 30 min，使聚合完全。電泳后，取出凝膠柱作固定和染色處理，顯示特定蛋白質(zhì)的位置。 ?分子篩效應(yīng) ：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)夾在快慢離子間通過(guò)隔層進(jìn)入分離膠時(shí)，尾隨離子由于 凝膠的 pH值與孔徑的突變 導(dǎo)致進(jìn)一步解離而增速以至超過(guò)蛋白的泳動(dòng)率，使 高電區(qū)梯度 不復(fù)存在。濃縮膠是核黃素催化聚合而成的大孔膠，分離膠是由 AP催化聚而成的小孔膠，T=7． O％～ 7． 5％， C=％。 2．核黃素一 TEMED 光聚合 作用 TEMED可加速凝膠的聚合，但不加也可聚合。 二、實(shí)驗(yàn)原理 聚丙烯酰胺凝膠是由 單體 (monomer)丙烯酰胺 (acrylamide，簡(jiǎn)稱(chēng) Acr)和 交聯(lián)劑(crosslinker)又稱(chēng)為共聚體的 N， N一甲叉雙丙烯酰胺 (methyleme— bisacrylamide，簡(jiǎn)稱(chēng) Bis)在 加速劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。由于這種凝膠具有 分子篩 的性質(zhì)，所以對(duì)樣品的分離作用不僅決定于樣品的各組分所帶的電荷的多少，而且也與分子的大小有關(guān)。光聚合作用通常需要 痕量氧原子 存在才能發(fā)生，因?yàn)楹它S素在 TEMED及光照條件下，還原成無(wú)色核黃素，后者被氧再氧化形成自由基，從而引發(fā)聚合作用。 凝膠緩沖液 為 Tris— HCl，大部分血清中各種蛋白質(zhì)在此 pH條件下，按各自負(fù)電荷量及相對(duì)分子質(zhì)量泳動(dòng)，此膠主要起分子篩作用。然而蛋白
法律信息相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1