第十六章細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附因子的測定(編輯修改稿)
2024-08-28 13:26 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 PE)、216。抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產(chǎn)量三、抗病毒活性測定法常用于檢測抗病毒活性的細(xì)胞株常用于攻擊細(xì)胞的病毒檢測抗病毒活性的方法216。 TNFα 和 TNFβ 與同一受體結(jié)合，故兩者生物學(xué)活性相似216。 用 TNFα 與 TNFβ 特異性中和抗體作阻斷試驗，以區(qū)別兩類 TNF216。 TNF活性測定靶細(xì)胞：小鼠成纖維細(xì)胞株 L92 LM、 注意：182。 若選用 L929細(xì)胞，其不宜生長過密。182。 細(xì)胞被某種因素激活后，代謝增強(qiáng)，線粒體脫氫酶活性也增強(qiáng)， 著色也會加深。182。 MTT染色時，必須考慮待檢樣品中有無激活靶細(xì)胞的因素。細(xì)胞毒活性測定法常用于 TNF等的測定252。細(xì)胞病變程度分為 5個等級，即： “ 0” ，表示無明顯 CPE； “ 1+” ， CPE≤25 ％； “ 2+” ， CPE為 25～ 50％； “ 3+” ， CPE為 50～ 75％； “ 4+” ， CPE為 75～ 100％。根據(jù)病變程度找出 CPEI50的標(biāo)本稀釋范圍，并以此計算出距離比例和確定 IFN效價。 該法操作復(fù)雜、影響因素較多，在試驗前應(yīng)對所用的病毒進(jìn)行滴定。 標(biāo)本稀釋度log4兩孔平均CPE細(xì)胞病變抑制程度細(xì)胞病變抑制積累細(xì)胞病變積累細(xì)胞病變抑制率3 0 4 16 0 16/16(100%)4 0 4 12 0 12/12(100%)5 0 4 8 0 8/8(100%)6 4 4/(73%)7 4 (27%)8 0 0 0 8 0/8(0%)細(xì)胞病變抑制法結(jié)果判斷舉例 * *結(jié)果： CPEI50稀釋度介于 4647之間，距離比例為 (7350)/(7327) =，效價為 ；同法計算 IFN標(biāo)準(zhǔn)品的 CPEI50稀釋度，將 IFN效價換算成國際單位， IFN國際單位 =樣品 CPEL50的稀釋度 /標(biāo)準(zhǔn)品CPEI50稀釋度 標(biāo)準(zhǔn)品的單位。 216。趨化性 (chemotaxis)： 誘導(dǎo)細(xì)胞向由 趨化因子低濃度出向 趨化因子高濃度處作定向移動的特性 ,可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗。216?；瘜W(xué)增活性 (chemokinesis)： 細(xì)胞因子增強(qiáng)細(xì)胞的隨機(jī)運動能力的特性 ,可采用瓊脂糖小滴化學(xué)動力學(xué)試驗檢測。趨化因子誘導(dǎo)細(xì)胞移動的方式四、趨化活性測定法敏感性較高特異性不高操作繁瑣易受干擾五、生物學(xué)活性測定方法學(xué)評價第二節(jié) 免疫學(xué)測定法 細(xì)胞因子 (或受體 )與相應(yīng)的特異性抗體 ( 單克隆抗體或多克隆抗體 )結(jié)合，通過同位素、熒光或酶等標(biāo)記技術(shù)加以放大和顯示， 從而定性或定量顯示細(xì)胞因子 (或受體 )的水平。根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同，夾心法 ELISA可分為：1. PcAb與 McAb夾心法2. McAb與 PcAb夾心法 3. 雙 McAb夾心法4. 細(xì)胞、 McAb夾心法一、 ELISA方法ELISA法是應(yīng)用最為廣泛的非均相酶
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