第十六章細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附因子的測(cè)定-在線瀏覽
2024-09-11 13:26本頁(yè)面
【正文】 分析法 三、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn) 四、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)第三節(jié) 細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附分子測(cè)定的臨床應(yīng)用 一、臨床應(yīng)用原則 二、特定疾病診斷的輔助指標(biāo) 三、評(píng)估機(jī)體的免疫狀態(tài)、判斷治療效果及預(yù)后思考題小結(jié) 是由活化的免疫細(xì)胞及某些基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)并分泌的活性物質(zhì)，其主要生物學(xué)功能是介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)，其化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)或多肽。 細(xì)胞因子細(xì)胞粘附因子 是介導(dǎo)細(xì)胞間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間粘附作用的分子，其化學(xué)本質(zhì)為糖蛋白，可以細(xì)胞膜表面表達(dá)和可溶性兩種形式存在。 DNA擴(kuò)增法216。 原位雜交法216。 一、促進(jìn)細(xì)胞增殖和增殖抑制測(cè)定法216。細(xì)胞 代謝活性測(cè)定方法 3HTdR、 125IUdR摻入法或 MTT等比色法216。在細(xì)胞的增殖過程中， DNA合成的增加使得指示細(xì)胞對(duì)核苷或堿基的需求增多，若將核苷標(biāo)記上可以示蹤的同位素（ 3H/125I ），通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的同位素含量，則可反映細(xì)胞增殖的程度 。因此，待測(cè)細(xì)胞因子作一系列稀釋后加至指示細(xì)胞培養(yǎng)體系，以檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的死細(xì)胞數(shù)作為判斷指標(biāo)，死細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞因子的活性呈正比。死、活細(xì)胞情況可用同位素 51Cr釋放法判斷，或應(yīng)用臺(tái)盼蘭染色死細(xì)胞后直接計(jì)數(shù)。死細(xì)胞數(shù)、 51Cr釋放量越高或比色測(cè)定的吸光值越低，表明待測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞毒活性則越高。本法常用于 TNF等的測(cè)定二、細(xì)胞毒活性測(cè)定法基本原理252。L929 小鼠干擾素252。A549252。 VSV、 EMCV及 Sindbis virus等216。抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產(chǎn)量三、抗病毒活性測(cè)定法常用于檢測(cè)抗病毒活性的細(xì)胞株常用于攻擊細(xì)胞的病毒檢測(cè)抗病毒活性的方法216。 用 TNFα 與 TNFβ 特異性中和抗體作阻斷試驗(yàn)，以區(qū)別兩類 TNF216。 若選用 L929細(xì)胞，其不宜生長(zhǎng)過密。 細(xì)胞被某種因素激活后，代謝增強(qiáng)，線粒體脫氫酶活性也增強(qiáng)， 著色也會(huì)加深。 MTT染色時(shí)，必須考慮待檢樣品中有無激活靶細(xì)胞的因素。細(xì)胞病變程度分為 5個(gè)等級(jí)，即： “ 0” ，表示無明顯 CPE； “ 1+” ， CPE≤25 ％； “ 2+” ， CPE為 25～ 50％； “ 3+” ， CPE為 50～ 75％； “ 4+” ， CPE為 75～ 100％。 該法操作復(fù)雜、影響因素較多，在試驗(yàn)前應(yīng)對(duì)所用的病毒進(jìn)行滴定。 216。216。趨化因子誘導(dǎo)細(xì)胞移動(dòng)的方式四、趨化活性測(cè)定法敏感性較高特異性不高操作繁瑣易受干擾五、生物學(xué)活性測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)第二節(jié) 免疫學(xué)測(cè)定法 細(xì)胞因子 (或受體 )與相應(yīng)的特異性抗體 ( 單克隆抗體或多克隆抗體 )結(jié)合，通過同位素、熒光或酶等標(biāo)記技術(shù)加以放大和顯示， 從而定性或定量顯示細(xì)胞因子 (或受體 )的水平。 ELISA法不僅可以用于細(xì)胞因子檢測(cè)，也可用于可溶性細(xì)胞因子受體或可溶性粘附因
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