第十六章細(xì)胞因子與細(xì)胞粘附因子的測(cè)定(參考版)
2024-08-12 13:26本頁(yè)面
【正文】 對(duì)某些特定疾病具有診斷價(jià)值；對(duì)細(xì)胞因子治療具有監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)用藥的意義；對(duì)機(jī)體的免疫狀態(tài)具有評(píng)價(jià)作用。? 細(xì)胞因子或粘附分子的檢測(cè)方法包括生物學(xué)測(cè)定法和免疫測(cè)定法兩大類(lèi)。 1．細(xì)胞因子和細(xì)胞粘附分子的特性是什么？可分為幾類(lèi)？2．基于促進(jìn)細(xì)胞增殖生物學(xué)活性，檢測(cè) IL ILIL TNF等方法所使用的細(xì)胞依賴株與檢測(cè)原則是什么？3．細(xì)胞因子生物活性測(cè)定法的種類(lèi)，各用于哪些細(xì)胞因子的檢測(cè)，主要優(yōu)缺點(diǎn)？4． ELISA法在細(xì)胞因子和粘附分子檢測(cè)可應(yīng)用于哪些方面？5． ELISPOT的原理、用途、與 ELISA的異同是什么？思考題6．在應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞因子時(shí)，需要哪些靶細(xì)胞活化劑？各自的作用是什么？7．與細(xì)胞因子的生物活性測(cè)定法相比，免疫測(cè)定法的優(yōu)勢(shì)是什么？如何看待其現(xiàn)有的劣勢(shì)？試推測(cè)解決現(xiàn)存的不足和改進(jìn)方法的可能途徑。相關(guān)粘附分子的檢測(cè)有助于此類(lèi)疾病的診斷。 T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和上皮樣細(xì)胞分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的 功能： IL IL IFNγ 和 GMCSF182。 有助于提供有效的疾病診斷和機(jī)體免 疫狀態(tài)信息216。免疫熒光染色和流式細(xì)胞分析：注意待檢細(xì)胞的活性和狀態(tài)，以保 證結(jié)果的特異性（二）標(biāo)本的適當(dāng)選取216。相應(yīng)細(xì)胞因子的基因和 mRNA表達(dá)：相應(yīng)細(xì)胞216。炎癥局部細(xì)胞因子的水平：局部分泌液216。 基因分析法：利于細(xì)胞內(nèi)定位分析、操作煩瑣（一）方法的聯(lián)合應(yīng)用216。 高敏感性方法：特異性的降低、廢棄物難處理182。 細(xì)胞因子的檢測(cè)方法多種多樣，各有利弊。臨床疾病治療效果的監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)用藥216。特定疾病的輔助診斷216。216。 一個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞，斑點(diǎn)的顏色深淺程度與細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子量相關(guān) 基本原理四、免疫學(xué)測(cè)定方法學(xué)評(píng)價(jià)216。細(xì)胞表面的粘附分子或細(xì)胞因子受體： 單克隆抗體技術(shù) 直接或間接熒光抗體染色 無(wú)需作細(xì)胞固定和非特異性結(jié)合位點(diǎn)的封閉 待測(cè)細(xì)胞是新鮮分離或培養(yǎng)的活細(xì)胞，保持良好狀態(tài)三、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn) (ELISPOT或 ElisaSpot) 在包被有待測(cè)細(xì)胞因子抗體的微孔板上，加入可分泌相應(yīng)細(xì)胞因子的待測(cè)細(xì)胞，經(jīng)在有或無(wú)刺激物存在的條件下培養(yǎng)，待測(cè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子于其周?chē)?，并被板上的特異性抗體捕獲。 1．分離和培養(yǎng)待檢細(xì)胞 2．細(xì)胞固定 3．封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn) 4．染色與分析 基本步驟使用流式細(xì)胞分析法，可以：216。ELISA特異、簡(jiǎn)便易于推廣和標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)可同時(shí)檢測(cè)大量標(biāo)本且試驗(yàn)廢棄物便于處理細(xì)胞因子測(cè)定的首選方法二、流式細(xì)胞分析法 流式細(xì)胞分析法，是基于熒光抗體染色技術(shù)并借助流式細(xì)胞儀敏感的分辨力所建立的方法。根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同，夾心法 ELISA可分為：1. PcAb與 McAb夾心法2. McAb與 PcAb夾心法 3. 雙 McAb夾心法4. 細(xì)胞、 McAb夾心法一、 ELI
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