【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 檢驗(yàn)方法 （ 1）常規(guī)方法 檢 樣改 良 C a m p B A P 布 氏 桿 菌 培 養(yǎng) 基直 接 相 差 鏡 檢過(guò) 氧 化 氫酶 試 驗(yàn)氧 化 酶試 驗(yàn)動(dòng) 力 試 驗(yàn)革 蘭 氏 染 色血 瓊 脂 平 板4 2 ℃ ， 4 8 h ， 微 需 氧1 ％ 甘 氨酸 試 驗(yàn)硫 化 氫試 驗(yàn)3 . 5 ％ 氯 化鈉 試 驗(yàn)生 長(zhǎng) 溫度 試 驗(yàn)馬 尿 酸試 驗(yàn)硝 酸 鹽 還原 試 驗(yàn)?zāi)?啶 酸試 驗(yàn)T T C 試 驗(yàn)血 清 分 型生 物 分 型報(bào) 告（ 2）現(xiàn)代檢驗(yàn)技術(shù) ① 基因探針?lè)? 核酸雜交試驗(yàn)是以互補(bǔ)核酸鏈能夠特異性結(jié)合并形成穩(wěn)定的雙鏈復(fù)合物為基礎(chǔ)。基因探針系統(tǒng)采用的是發(fā)光劑標(biāo)記的單鏈 DNA探針，該探針與核糖體 RNA結(jié)合形成穩(wěn)定的 DNA:RNA雜交體。選擇試劑將未雜交和雜交探針?lè)珠_(kāi)。標(biāo)記的DNA:RNA雜交作用 GENPROBE發(fā)光儀檢測(cè)。發(fā)光儀讀數(shù)大于或等于 CUTOFF值的為陽(yáng)性，低于 CUTOFF值的為陰性。 ② PCR法 根據(jù)彎曲菌屬 16sRNA高保守序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物；在合適的反應(yīng)條件和反應(yīng)體系下進(jìn)行反應(yīng)；最后利用電泳觀察結(jié)果。 ③ 熒光酶標(biāo)試劑盒 檢測(cè)彎曲桿菌的探針是用非放射性物質(zhì)標(biāo)記的。標(biāo)記物為發(fā)光素。靶順序?yàn)?rRNA。近年來(lái)用堿性磷酸酶人工合成的寡核苷酸檢測(cè)人工污染的糞便樣品，檢測(cè)量為一百萬(wàn)個(gè)菌落形成單位（ CFU)，敏感性和特異性達(dá) 100％。 此方法只在臨床檢測(cè)中應(yīng)用，尚未用于食品檢測(cè)。 金黃色葡萄球菌 ? 葡萄球菌是一類革蘭氏陽(yáng)性菌。它的致病力的強(qiáng)弱與其產(chǎn)生的毒素及酶類有關(guān)。人一旦感染該菌，當(dāng)機(jī)體抵抗力減弱或皮膚受損時(shí)，易被感染，引起傷口化膿、中耳炎、毛囊炎等。產(chǎn)生葡萄球菌腸毒素的還可引起食物中毒。 ? 對(duì)人有致病性的葡萄球菌多產(chǎn)生 α 溶血素；對(duì)動(dòng)物有致病性的葡萄球菌多產(chǎn)生 β溶血毒素。 ? 金黃色葡萄球菌某些菌株能產(chǎn)生一種能引起急性腸胃炎的腸毒素，當(dāng)這些菌株污染了食物，在溫度條件適宜時(shí)，即可產(chǎn)生相當(dāng)數(shù)量的腸毒素，根據(jù)腸毒素的血清型別不同，分為 A、 B、C、 D、 E五型。其中以 A型引起的食物中毒最多， B和 C型次之。腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)純化的腸毒素，能耐高溫。 ? 血漿凝固酶是鑒別葡萄球菌有無(wú)致病性的重要指標(biāo)。血漿凝固酶具有抗原性，可分為 8型。大多數(shù)致病性葡萄球菌能產(chǎn)生此酶，而非致病菌不產(chǎn)生?？蓱?yīng)用 8個(gè)型的凝固酶抗血清進(jìn)行分型試驗(yàn)，用來(lái)研究葡萄球菌的流行病學(xué)情況。 檢驗(yàn)方法 檢 樣2 5 g （ M l ) + 2 2 5 m L 滅 菌 生 理 鹽 水直 接 計(jì) 數(shù) 法 增 菌 培 養(yǎng) 方 法B a i r d P a r k e r 平 板7 . 5 ％ 氯 化 鈉 肉 湯或 胰 酪 胨 大 豆 肉 湯血 平 板血 平 板B a i r d P a r k e r 平 板觀 察 溶 血涂 片 染 色 血 漿 凝 固 試 驗(yàn)報(bào) 告 3 6 ℃ 177。 1 ℃ ， 2 4 h 3 6 ℃ 177。 1 ℃ ， 2 4 h 3 6 ℃ 177。 1 ℃ ， 2 4 h 3 6 ℃ 177。 1 ℃ ， 2 4 h（ 1）常規(guī)檢驗(yàn)方法 （ 2）現(xiàn)代檢驗(yàn)技術(shù) ① 利用 mini－ Vidas全自動(dòng)免疫分析儀，它是應(yīng)用酶聯(lián)免疫技術(shù)，用熒光分析技術(shù)通過(guò)固相吸附器，用已知抗體來(lái)捕捉目標(biāo)生物體，然后以帶熒光的酶聯(lián)抗體再次結(jié)合，經(jīng)充分沖洗，通過(guò)激發(fā)光源檢測(cè)，即能自動(dòng)讀出發(fā)光的陽(yáng)性標(biāo)本，其優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高、速度快，可在 48h的時(shí)間內(nèi)快速篩選鑒定出金黃色葡萄球菌及金黃色葡萄球菌腸毒素。 ② 美國(guó) 3M公司，利用耐熱核酸酶特性，設(shè)計(jì)出紙片法，能在 24h快速檢測(cè)出金黃色葡萄球菌。 ③ 大多數(shù)檢測(cè)葡萄球菌的探針是針對(duì)腸毒素的。它們能同編碼腸毒素有關(guān)的基因序列雜交，這類探針能檢測(cè)腸毒素 A、 B、 C和 E。 ④ PCR法：設(shè)計(jì)特異性引物根據(jù)產(chǎn)生腸毒素 AE基因（ entA, entB, entC, entD和 entE),檢測(cè)葡萄球菌exfoliative基因，檢測(cè)中毒休克毒素基因 (tst)。 肉毒梭菌 ? 肉毒梭菌是嚴(yán)重食物中毒的病原菌之一，在厭氧的環(huán)境下能產(chǎn)生強(qiáng)烈的外毒素。這種毒素毒性強(qiáng)烈，是一種獨(dú)特的神經(jīng)麻痹毒素，即肉毒毒素。該毒素性質(zhì)穩(wěn)定，是目前已知化學(xué)毒物和生物毒素中毒性最強(qiáng)烈者，對(duì)人的致死劑量為 0. 1ug。 ? 肉毒梭菌在自然界的分布具有某種區(qū)域性差異，顯示出生態(tài)上的差異傾向。根據(jù)抗原特異性，可分為 A、 B、 C、 D、 E、 F、 G七個(gè)型別。 ? 肉毒梭菌一年四季均可發(fā)生，發(fā)病主要與飲食習(xí)慣有密切的關(guān)系。 ? 歐美國(guó)家：肉類食品、罐頭食品； ? 日本等沿海國(guó)家：進(jìn)食水產(chǎn)品； ? 我國(guó)內(nèi)地：進(jìn)食發(fā)酵食品（如臭豆腐、豆瓣醬、豆豉等）。 檢驗(yàn)方法 1）常規(guī)肉毒梭菌的檢出 GB/T 2022 2） PCR法 食 品毒 素 檢 測(cè)增 菌 ， 產(chǎn) 毒 培 養(yǎng)3 0 ℃ ， 5 d報(bào) 告（ 一 ）毒 素 檢 測(cè)報(bào) 告（ 二 ）觀 察 生 長(zhǎng) 性 狀 ，染 色 鏡 檢分 離 培 養(yǎng)觀 察 菌 落 性 狀 ，染 色 鏡 檢增 菌 ， 產(chǎn) 毒 培 養(yǎng)3 0 ℃ ， 5 d毒 素 檢 測(cè) 培 養(yǎng) 檢 查報(bào) 告 （ 三 ）報(bào)告（一）：檢樣含某型肉毒毒素 報(bào)告（二）：檢樣含某型肉毒梭菌 報(bào)告（三）：由樣品分離的菌株為某型肉毒梭菌 致病性弧菌 弧菌屬共有 37個(gè)種（變種），其中已明確又 12個(gè)種對(duì)人類有致病作用。在這 12種致病菌種，最重要的，也是問(wèn)題最多的是 O1型霍亂弧菌、非 O1型霍亂弧菌、副溶血性弧菌和創(chuàng)傷弧菌。 霍亂弧菌 (Vibrionaceae cholerae) ? 霍亂弧菌是由 O1血清群和 O139血清群引起的烈性消化道傳染病。該病傳播快 , 波及面廣，是屬于國(guó)際檢疫的傳染病。 ? 水是傳播霍亂的主要媒介。 ? 與霍亂有關(guān)的食品主要是海產(chǎn)品、有殼的水生動(dòng)物和甲殼動(dòng)物，主要有魚、蝦、貝類、甲魚、牛蛙、蟹等。 ? 霍亂弧菌引起的疾病叫霍亂。 ? 由霍亂弧菌 E1 Tor生物型引起的癥狀較輕，病程也短。 ? 霍亂弧菌腸毒素會(huì)引起機(jī)體嚴(yán)重的嘔吐、腹瀉等臨床癥狀。 霍亂弧菌的檢測(cè)方法 ? 生物學(xué)檢測(cè)方法，作霍亂弧菌 O1+O139多價(jià)血清凝集試驗(yàn)（水、食品）。 ? PCR（對(duì)毒力基因 ctxAB、 tcpA進(jìn)行擴(kuò)增）。 致病性弧菌的檢測(cè)方法 具有代表性檢驗(yàn)方法簡(jiǎn)介 （ 1） FDA的細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè) 霍亂、付弧、創(chuàng)傷弧菌和其他弧菌（