2大腸菌群(編輯修改稿)
2025-08-22 04:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 的無菌均質(zhì)杯內(nèi) ,8000 r/min～ 10000 r/min 均質(zhì) 1 min～ 2 min,或放入盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min～ 2 min，制成 1:10 的樣品勻液。 ? 液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣品置盛有 225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10 的樣品勻液。 ? 樣品勻液的 pH 值應在 ～ 之間，必要時分別用1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 調(diào)節(jié)。 ? 用 1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取 1:10 樣品勻液 1 mL，沿管壁緩緩注入 9 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用 1 支 1 mL 無菌吸管反復吹打，使其混合均勻，制成 1:100 的樣品勻液。 ? 根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1 次，換用 1 支 1 mL 無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過 15 min。 初發(fā)酵試驗 ? 每個樣品，選擇 3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種 3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（ LST）肉湯，每管接種 1mL（如接種量超過 1 mL，則用雙料 LST肉湯），36℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 24 h177。 2 h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生， 24 h177。 2 h產(chǎn)氣者進行復發(fā)酵試驗，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至 48 h177。 2 h，產(chǎn)氣者進行復發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。 復發(fā)酵試驗 ? 用接種環(huán)從產(chǎn)氣的 LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（ BGLB）管中， 36 ℃ 177。 1℃ 培養(yǎng) 48 h177。 2 h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。 大腸菌群最可能數(shù)（ MPN）的報告 ? 按 LST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄 B），報告每 g（ mL）樣品中大腸菌群的 MPN值。 第二法 大腸菌群平板計數(shù)法 ? 7 檢驗
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