吸光光度法的靈敏度與準確度(編輯修改稿)
2025-08-14 17:40 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 (?小 ) 磷鉬 (V)藍 (?大 ) Sn2+ 22 3. 蛋白質(zhì)測定 — 溴甲酚綠、考馬司亮藍等 4. 氨基酸測定 — 茚三酮 (紫色化合物 ) 5. 水質(zhì)檢測 : NH4+、 NO Mn2+、 Fe2+、SO4 Hg2+ 6. 藥物含量測定 — 比吸光系數(shù)定量；荷移光譜法測定 . 7. 紫外吸收 (UV): NO NO SO4SO3 CO3 SCN、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白質(zhì)等。 23 多組分的測定 ?x?1, ?y?1, ?x?2, ?y?2由 x,y標液 在 ?1, ?2處分別測得 . a) 在 ?1處測組分 x, 在 ?2處測組分 y. b) 在 ?1處測組分 x。 在 ?2處測總吸收 ,扣除 x吸收 ,可求 y. c) x,y組分不能直接測定 A1=?x?1bcx+ ?y?1bcy(在 ?1處測得 A1) A2 =?x?2bcx+ ?y?2bcy(在 ?2處測得 A2) 24 光度滴定 NaOH滴定 對硝基酚 pKa= 間硝基酚 pKa= ? pKa= V1 V2 V(NaOH)/mL 對硝基酚 間硝基酚 酸形均無色 . 堿形均黃色 25 典型的光度滴定曲線 依據(jù)滴定過程中溶液吸光度變化來確定終點的滴定分析方法。 Vsp 滴定劑吸收 Vsp 被滴物吸收 Vsp 滴定劑與待測物均吸收 Vsp 產(chǎn)物吸收 26 絡(luò)合物組成的測定 1. 摩爾比法 : 固定 cM ,改變 cR 1:1 3:1 c(R)/c(M) A 3,0 27 2. 等摩爾連續(xù)變化法 : M R M R nn?MR (c c c ）?? 常數(shù)M:R=1:1 cM/c cM/c M:R=1:2 0 1 0 1 28 一元弱酸離解常數(shù)的測定 HL H＋ ＋ L HLHL L= [ H L ] + [ L ]KccAKK???? ? ? ??+ L++aaa(HL)[ H ] ( H L )=++ [ H ] + [ H ]Ka＝ [H+][L]/[HL] 高酸度下，幾乎全部以 HL存在，可測得 AHL＝ εHLc(HL)； 低酸度下，幾乎全部以 L存在，可測得 AL ＝ εLc(HL). 代入整理： L HLAAK AAap = p H + l g 或 配制一系列 c相同 ,pH不同的溶液 ,測 A. HL、 L 顏色不同 +a L= [ H ] K AA[HL] [L] HL AA29 MO吸收曲線 Aa(HL) Ab (L) 1 2 3 4 5 6 Ab 6 5 4 3 2 1 Aa 350 400 450 500 550 600 ?/nm A 曲線 pH 1 , 2 3 4 5 6 , 由每份溶液的一對 pH、 A，可求得一個 Ka, 取平均值即可 . 30 紫外可見分光光度法在有機定性分析中的應(yīng)用 有機化合物分子的電子躍遷和吸收帶 非鍵軌道 成鍵軌道 成鍵軌道 反鍵軌道 反鍵軌道 ? (nm) HCHO = = n ? ? ? ? ???* ? ? ?* ? ? ?*n ? ?* ? ? ?* n ? ?* 31 躍遷 ? max(nm) ? ? ? ?* ~150(200) n ? ?* ~200 100～ 300 n ? ?* 200～ 800 10～ 100 ? ? ?* ~200 ~104 190 CH2－ CH2 CH2 135 （ C－ C） CH3－ CH2－ CH3 135
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