吸光光度ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-10 11:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 液 A參比 若人為將參比的吸光度調(diào)節(jié)為零， A試樣 可以直接讀出。 選擇參比溶液所遵循的一般原則： ⑴ 若僅待測(cè)組分與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)物在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收， 其他所加試劑均無(wú)吸收， 用純?nèi)軇ㄋ?)作參比溶液； ⑵ 若顯色劑或其他所加試劑在測(cè)定波長(zhǎng)處略有吸收 ,而試液 本身無(wú)吸收， 用“試劑空白” (不加試樣溶液 )作參比溶液； ⑶ 若待測(cè)試液在測(cè)定波長(zhǎng)處有吸收，而顯色劑等無(wú)吸收， 則可 用“試樣空白” (不加顯色劑 )作參比溶液； ⑷ 若顯色劑、試液中其他組分在測(cè)量波長(zhǎng)處有吸收，則可 在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑， 作為參比溶液。 (5) 改變加入試劑的順序，使被測(cè)組分不發(fā)生顯色反應(yīng)，作 為參比溶液消除干擾。 顯色反應(yīng)及其影響因素 顯色反應(yīng)與顯色劑 : ；靈敏度高 （ ε ≥ 104 ） ； ， 符合一定的化學(xué)式； ； ； 如 Mn（ Ⅶ ）在紫外或可見光區(qū)本身有較深的顏色，可以直接進(jìn)行測(cè)定。 2 顯色劑 無(wú)機(jī)顯色劑 ： 硫氰酸鹽、鉬酸銨等。 有機(jī)顯色劑 ： 偶氮類顯色劑 ： 性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇 性好、對(duì)比度大，應(yīng)用最廣泛。偶氮胂 III、 PAR等。三苯甲烷類：鉻天青 S、二甲酚橙等 ： 三種或三種以上組分形成的絡(luò)合物 由一種金屬離子同時(shí)與兩種不同的配位體形成的三元配合物 。 例 : TiEDTAH2O2三元配合物的穩(wěn)定性 ， 比 TiEDTA和 TiH2O2二元配合物的穩(wěn)定性 ， 分別增強(qiáng)約 1000倍和 100倍 。 絡(luò)合劑 表面活性劑 影響顯色反應(yīng)的因素 : ； ； ； 吸光度 A與顯色劑用量 cR的關(guān)系會(huì)出現(xiàn)如圖所示的幾種情況 。 選擇曲線變化平坦處 。 ： 實(shí)驗(yàn)確定 ： 實(shí)驗(yàn)確定 吸光光度分析及誤差控制 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 一般應(yīng)該選擇 λmax為入射光波長(zhǎng)。 如果 λmax處有 共存組分干擾 時(shí)， 則應(yīng)考慮選擇 靈敏度稍低 但能 避免干 擾的入射光波長(zhǎng)。 如圖測(cè)定 A，有 B共存干擾，選 500nm 為測(cè)定波長(zhǎng)，靈敏度雖有所下降，卻消除 了干擾，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度和選擇性。 測(cè)量波長(zhǎng)的選擇 : “吸收最大，干擾最小 ” 原則 2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 （ 1）根據(jù) A=ε bc配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液 。 （ 2）顯色 。 （ 3）在選定的波長(zhǎng)條件下 。 （ 4）選擇合適的參比溶液 。 （ 5）測(cè)定吸光度 ， （ 6）以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo) ， （ 7）繪制通過(guò) 原點(diǎn) 的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 現(xiàn)象 標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定未知溶液的濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線常發(fā)生彎曲（尤其當(dāng)溶液濃度較高時(shí)），這種現(xiàn)象稱為對(duì)朗伯— 比耳定律的偏離。 引起偏離的因素（兩大類） （ 1）物理性因素， 即儀器的非理想引起的； （ 2）化學(xué)性因素。 對(duì)朗伯 比爾定律的偏離 物理性因素： 難以獲得真正的純單色光 。 分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光帶。復(fù)合光可導(dǎo)致對(duì)朗伯 — 比耳定律的正或負(fù)偏離。 非單色光、雜散光、非平行入射光都會(huì)引起對(duì)朗伯 — 比耳定律的偏離， 最主要的是非單色光作為入射光引起的偏離。 非單色光作為入射光引起的偏離： 假設(shè)由波長(zhǎng)為 λ1和 λ2的兩單色光 組成的入射光通過(guò)濃度為 c的溶液，則： A1＝ lg（ Ｉ 01 /Ｉ t1 ）＝ ε1 bc A2＝ lg(Ｉ 02 /Ｉ t2 ）＝ ε2 bc 故： 式 中： Ｉ 0 Ｉ 02分別為 λ λ2 的入射光強(qiáng)度； Ｉ t1 、 Ｉ t2分別為 λ λ2 的透射光強(qiáng)度； ε ε2分別為 λ λ2的摩爾吸收系數(shù)； cbcb IIII ???? ?? 21211
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