懷化醫(yī)專微生物學檢驗教案doc(編輯修改稿)
2025-08-14 17:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 、動物接種： 多種病原性立克次體能在豚鼠、小鼠等動物體內(nèi)有不同程度的繁殖。在豚鼠睪丸內(nèi)保存的立克次能保持致病力和抗原性不變。雞胚接種： 立克次體還能在雞胚卵黃囊中繁殖，常用作制備抗原或疫苗的材料。細胞培養(yǎng)： 常用的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)有敏感動物的骨髓細胞、血液單核細胞和中性粒細胞等，一般不產(chǎn)生細胞病變。以32～35℃孵育最為適宜。（三）抗原結(jié)構(gòu) 立克次體有兩種主要抗原： 一種為可溶性（醚類）抗原，耐熱，與細胞壁表面的粘液層有關(guān)，為群特異性抗原。另一種為顆粒（外膜）性抗原，不耐熱，與 細胞壁成份有關(guān)，為種特異性抗原?！ ≡诎哒顐?，群特異性抗原在普氏、莫氏及加拿大立克次體中均存在，與其他屬的立克次體很少交叉或不交叉，而種特異性蛋白抗原在上述三個種間互不交叉。 恙蟲病群中只有恙蟲病立克次體一個種，根據(jù)恙蟲病立克次體種特異性抗原性的差異，可分為若干血清型?！×⒖舜误w具有與變形桿菌某些X株的菌體抗原（O）共同的耐熱多糖類抗原，臨床上常用以代替相應的立克次體抗原進行非特異性凝集反應，作為人或動物血清中相關(guān)抗體的檢查。這種交叉凝集試驗稱為外斐反應（WeiiFelix reaction），作為輔助診斷。(四)抵抗力除貝鈉(Q熱)柯克斯體外,立克次體抵抗力較弱。56℃30分鐘死亡；室溫放置數(shù)小時即可喪失活力。對低溫及干燥的抵抗力強，在干燥虱糞中能存活數(shù)月。對一般消毒劑敏感，對四環(huán)素和氯霉素敏感。磺胺類藥物不僅不能抑制反而促進立克次體的生長、繁殖。二、致病性與免疫性致病物質(zhì)有兩種，一種為內(nèi)毒素，由脂多糖組成；另一種為磷脂酶A，可分解脂膜而溶解細胞，導致宿主細胞中毒。傳播媒介是節(jié)肢動物，如虱、蚤、蜱、螨等。虱、蚤的傳播方式是含大量病原體的糞便在叮咬處經(jīng)搔抓皮損處侵入人體；蜱、螨傳播則是由叮咬處直接注入體內(nèi)。致病性進入人體后，立克次體首先侵入局部淋巴組織或小血管內(nèi)皮細胞內(nèi)，即經(jīng)過吸附細胞膜上受體而被吞入胞內(nèi)，再由磷脂酶A溶解吞噬體膜的甘油酸而進入胞質(zhì)，隨后分裂繁殖，導致細胞腫脹、中毒，出現(xiàn)血管炎癥，管腔堵塞而形成血栓、組織壞死。立克次體也能進入血流而擴散，到達皮膚、肝、脾、腎等處而出現(xiàn)毒血癥癥狀。立克次體還能直接破壞血管內(nèi)皮細胞，使透性增加、血容量下降和水腫。另外，血管活性物質(zhì)的激活可加劇血管擴張，導致血壓降低，休克、DIC等。免疫性立克次體是嚴格細胞內(nèi)寄生的病原體，其抗感染免疫是以細胞免疫為主，體液免疫為輔。病后一般能獲得較強的免疫性。感染后產(chǎn)生的特異性群和種抗體有中和毒性物質(zhì)和促進吞噬的作用。特異性細胞因子有增強巨噬細胞殺滅胞內(nèi)立克次體的作用。第二節(jié) 主要病原性立克次體一、斑疹傷寒立克次體 （一）普氏立克次體是流行性斑疹傷寒(又稱虱傳斑疹傷寒)的病原體。 病人是惟一的傳染源，體虱是主要傳播媒介，而非儲存宿主。 傳播方式為虱人虱，體虱僅是傳染媒介。（二）莫氏立克次體n 地方性斑疹傷寒(又稱鼠型斑疹傷寒)的病原體。嚙齒類動物是儲存宿主，傳播媒介是鼠蚤或鼠虱。n 鼠蚤叮咬人體時，常排糞于皮膚上，斑疹傷寒立克次體從抓破的傷口進入人體。若有人虱寄生，可通過人虱為傳播媒介，繼發(fā)性地在人群中傳播。 [致病物質(zhì)]n 有兩種，其一是內(nèi)毒素，主要成分為脂多糖(LPS)；其二為磷脂酶A,能損傷宿主細胞膜及溶解胞內(nèi)吞噬體膜，以利于病原體穿入宿主細胞并在其中生長。n 普氏和莫氏立克次體所致的斑疹傷寒癥狀相似，以高熱、頭痛、全身皮疹為主要特征。伴有神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等癥狀和實質(zhì)性器官損傷。 [微生物特性]（1）. 比細菌小，呈多形態(tài)性，在感染細胞內(nèi)聚 集成團,分布在胞質(zhì)內(nèi), Gimenez法染色后呈紅色，外表含有微莢膜結(jié)構(gòu)。（2）. 必須在真核細胞內(nèi)才能生長繁殖，培養(yǎng)時需要C02。通常采用59日齡雞胚作卵黃囊接種，于32℃35℃孵育4～13d內(nèi)死亡，雞胚死亡時間與接種劑量大小呈直接相關(guān)。 普氏和莫氏立克次體能在多種單層細胞上生長繁殖。豚鼠可作立克次體的初代分離。（3）.有群特異性和種特異性兩種抗原。大部分立克次體與普通變形桿菌X菌株的菌體耐熱多糖抗原有共同的抗原性，故可用這些菌株代替立克次體抗原進行凝集反應去檢測抗體，這種交叉凝集試驗被稱為外斐反應，可供輔助診斷。[微生物檢驗] (1)病人血液標本：發(fā)熱期均有立克次體血癥， 在急性期較易檢出立克次體。爭取在用抗生素前采血，立即床側(cè)接種。 (2)活檢或尸檢材料：肺、肝、脾、淋巴結(jié)、心瓣膜等標本。 (1)免疫熒光檢測 用于臟器檢查。制備標本片薄而均勻，組織結(jié)構(gòu)清晰，固定后用熒光抗體染色, 常見脾、肺及心瓣膜中有立克次體，也可在肝、腎及皮疹活檢組織中檢出。(2)核酸檢測 PCR敏感性高，所需樣品量只需ELISA實驗的1／5。以編碼17kD蛋白的基因和編碼普氏和莫氏立克次體169kD蛋白的基因作為擴增靶區(qū)。3．分
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